全 文 ：最适 DNA模板浓度范围后 ,紧接着要对引物浓度进行优化;不同
厂家 、不同商家的 DNA聚合酶常常给出不同的 RAPD产物 ,因此
开始选择什么样的 DNA聚合酶很重要 ,若中途更换酶 , 不可能重
复原来的实验结果 , 在 RAPD - PCR中酶的用量大都为每反应
0. 5 ～ 1 U(25μl), 这与聚合酶的来源有关 ,有时可达 2. 5 U,用量
过多会产生非特异性扩增 , 随着酶用量的增加甘油含量随之增
加 , 会抑制 PCR反应;dNTPs(dATP, dTTP, dCTP, dGTP)是 PCR的
原料 , 常用 50 ～ 200μm o l /L, 浓度太高产生错误掺入 ,浓度太低产
率太低 , 在 RAPD中多用 100 ～ 200 μm o l /L;最佳扩增程序提供
PCR最佳扩增结果 , 扩增程序中 PCR对退火温度最敏感 , RAPD
- PCR的退火温度一般都在 40℃以下 , 36 ～ 40℃比较适宜 , 小于
36℃会得到非特异性扩增条带;循环次数依 PCR热循环仪的型
号有较大的变化 , 循环次数太少扩增量不足 , 循环次数增加扩增
量显著提高但同时非特异性扩增的机会增加。
3. 2　 由于 RAPD - PCR对反应条件过于敏感 , 在对一个新类群
进行 RAPD分析时 ,完全有必要对各因子的反应条件进行优化 ,
建立稳定的 、最佳的反应体系;建立了最佳的反应体系后 ,要加强
RAPD反应程序的标准化 [ 4] , 以保证实验条件的一致性来增强
RAPD的可重复性。
参考文献:
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收稿日期:2006-11-28;　修订日期:2007-03-15
基金项目:中国科学院西部行动项目(No. KGCXZ-SW 510)资助课题
作者简介:张富昌(1979-),男(汉族),河南遂平人 ,现为中国科学院硕士
研究生 ,主要从事天然药物研发工作.
*通讯作者简介:赵文军 (1963-), 男(汉族),山东招远人 , 现任中国科学
院新疆理化技术研究所研究员 ,主要从事天然有机化学研究工作.
新疆雪莲的超临界萃取及气相色谱-质谱分析
张富昌 1, 2 ,赵文军 1* , 刘明灯 1, 2 ,宋铁珊 1
(1.中国科学院新疆理化技术研究所 ,新疆 乌鲁木齐　830011;
2.中国科学院研究生院 ,北京　100039)
摘要:目的 探讨超临界选择性萃取雪莲活性成分的可行性 , 报道超临界萃取挥发油的产率以及成分 , 预测提取物生理
作用。方法 以萃取率为指标对萃取压力 ,萃取时间 ,萃取温度做单因素考察 , 并对 10M Pa和 20MPa萃取压力下提取物
做 GC -MS分析。结果 适宜的萃取条件为:20MPa, 45℃,动态萃取 2. 5 h, 新疆雪莲挥发油的超临萃取率 (2. 49%)比水
蒸气法 (0. 08%)高 ,并且选择性好。结论 此研究为雪莲的综合开发奠定了基础。
关键词:新疆雪莲;　超临界萃取;　轻质组分
中图分类号:R284. 1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)08-1821-01
Supercritica lCarbon D ioxide Extraction andGC -M S ofVolatile Components from Sau-
ssurea involucrate
ZHANG Fu-chang1, 2 , ZHAO W en-jun1* , L IU M ing-deng1, 2 , SONG T ie-shan1
(1. X in jiang Institu te of Physical and Chem ical Technologies, Chinese Academ ic of Sciences, Urumchi 830011
China;2. Graduate School of ChineseAcademy of Sciences ,Beijing 100039, China)
Abstract:Objective To discuss the feasib ility of so lution ex trac ting active components o f Saussures involucra te by supercritica l
ca rbon diox ide. E stablish a m e thod for further m edica l app lication study ing and developing of the Saussures involucrate. Meth-
ods Supercritical fluid extrac tion(SFE)ability w as inve stiga ted. M a in extrac tion efficiency effects:pressure(10 - 30MP), tempera-
tu re(30 ～ 55℃) and tim e(0. 5 ～ 3 h) w ere dete rm ined. Vola tile constituents w ere ana ly sed by GC -MS. R esults The App ropri-
a te h ighest y ield o f vo latile com ponentsw as 2. 56%, much highe r than vapo r distilla tion way. The best resultsw ere ob ta ined:pres-
su re 20MP, tem pe ra ture45℃, tim e 2. 5 h. Conc lu sion The to tal e ssentia l o ilw ere sepa ra ted and iden tified.
Key words:Saussurea involucra te;　Vo la tile components;　Supe rcritica l fluid ex traction(SFE);　GC-MS
　　新疆雪莲 Saussurea involucra te Kar. e t K ir又名雪荷花 , 为菊
科风毛菊属多年生草本植物 ,主要分布在天山海拔 3 000 ～ 4 000
m的高山雪岭上 [ 1] 。天山雪莲具有除了传统的预防治疗风湿性
关节炎 、经血不调 、阳痿 、跌打损伤等疾病外 , 还应用到食品 , 美
容 , 戒毒 , 癌症防治等领域 , 是一个广为大众接受的中药材 [ 2] 。
超临界流体萃取技术 (supe rcritica l fluid ex traction, SFE)是一种新
型分离技术 , 具有萃取温度低 , 速度快等诸多优点 [ 3] 。有关雪莲
的超临界萃取并 GC-M S分析未见报道 , 本文探讨超临界 CO2选
择性萃取雪莲活性成分的可行性 , 明确最佳萃取条件 , 报道超临
界萃取新疆雪莲的产率以及成分 , 预测提取物生理作用 , 为雪莲
这一珍贵民族药材的进一步开发奠定基础。
1　器材
美国 PE 公司 Turbo Mass Autosystem XL-GC 联用分析仪;
HA121-50-02型超临界萃取装置 ,江苏南通华安超临界萃取有限公司
生产。雪莲采样于新疆阜康,经新疆中药民族药研究所李晓瑾研究
员鉴定为天山野生雪莲。 CO2为食品级 ,H e为色谱纯。
2　方法
2. 1　天山雪莲的超临界提取 将雪莲干燥后全草(地上部分)
120 g粉碎 、过 40目筛后加入 2 000 m l超临界 CO2萃取池中 , 以
萃取压力 ,萃取时间 , 萃取温度 3因素分别做单因素实验:参数设
置范围为压力 10 ～ 25MPa;萃取池温度 35 ～ 55℃ , 解析压力固
定 4. 2 MPa,温度 40℃ ;动态萃取 30 ～ 120 m in;CO2流量固定在
20 L /h。计算萃取率并结合 GC-MS 检测结果考察最佳提取
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 8 时珍国医国药 2007年第 18卷第 8期
条件。
2. 2　提取物的 GC-M S分析条件 色谱柱:supe lcow ax-10(60 m ×
0. 25 mm ×0. 25μl);色谱柱程序升温条件:柱温 60℃(10 m in),
3℃ /m in升温至 150℃, 2. 3℃ /m in升温至 270℃(42. 83 m in) ;
载气 H e,流速:16psi;接口温度 280℃ ;离子源温度 200℃ ;电离
电压 70 eV;扫描质量范围 30 ～ 550 am u。
3　结果与讨论
3. 1　考察萃取压力对超临界提取率的影响(固定其他条件:萃取
温度 50℃, 分离釜温度 30℃,分离釜压力 4. 2M Pa, CO2流量 20 L /
h,提取时间为 3. 5 h)压力一般是影响萃取率的主要因素 ,为此 ,
首先进行考察压力对萃取率的影响因素 ,固定萃取温度 50℃ , 选
择 10 ～ 30MPa之间 5种压力进行筛选, 其与萃取率的关系详见图
l。由图 1可知 ,当压力在 20MPa以下时 ,随着压力的增大萃取率
增加较快 ,超过 20MPa再增加压力变化不大。但具体哪个压力下
为好 ,还要结合其选择性 ,萃取物生理活性等才能判定。
3. 2　考察萃取时间对超临界提取率的影响(固定萃取压力为 20
M Pa, 萃取温度为 50℃, 30 m in取一次样 ,其他条件同上。) 萃取
开始初 , 由于 SCF-CO
2
与溶质未达到良好接触 , 萃取量较少 , 随
萃取时间延长 , 传质达到良好状态 ,单位时间的萃取量增大 ,直至
达到其最大值 , 此后由于萃取对象中待分离成分含量减少提取量
增加逐渐缓慢 , 综合考虑 2. 5 h为好。见图 2。
图 1　萃取率与萃取压力的关系　　图 2　萃取率与萃取时间的关系
3. 3　考察萃取温度对超临界提取率的影响 (固定萃取压力 20
M Pa, 萃取时间 2. 5 h, 其他条件同 2. 2项 ) 温度对萃取率的影
响:当萃取压力固定为 20M Pa, CO2流量固定为 20 L /h时 , 温度
对萃取率的影响详见图 3, 由图 3知 , 温度对超临界溶解能的影
响较为复杂。温度升高 , 可使超临界流体的密度降低 , 溶解度
下降。相反 , 温度的升高又可使物质分子运动加剧 , 利于溶质容积
之间的相互扩散 ,减小传质阻力 , 使溶解度增加。综合来说温度
影响不是很大 ,以 45℃为佳。
图 3　萃取率与萃取温度的关系
3. 4 　10, 20MPa萃取压力下萃取物的 GC-MS分析(固定萃取温
度为 45℃, 动态连续萃取 2. 5 h, 其他条件同 2. 1项) 考虑到不
同萃取压力下萃取成分可能存在的差异 ,分别对 10, 20MPa条件
下萃取物做 GC -M S分析 。
图 4　天山雪莲在 10M Pa压力下总离子流图(超临界 CO 2萃取)
图 5　天山雪莲在 20M Pa压力下总离子流图(超临界 CO 2萃取)
表 1　SFE法提取天山雪莲挥发油化学成分分析结果
序号 化合物名字 分子式 相对含量(10 MPa) 相对含量(20MPa)
1 十六碳烷 n-H exad ecane C16H34 / 0. 38
2 2-甲基十七碳烷 hep tadecane, 2-m ethy l C18H38 0. 52 /
3 9, 12, 15-十八碳三烯-1-醇 9, 12, 15-trienoate1-O ctadecano l C18H32O 0. 44 0. 20
4 棕榈酸甲酯 hexadecanoic acid, m ethy l ester C17H 34O 2 / 0. 60
5 月桂烯醇 m yrceno l C10H18O / 0. 21
6 棕榈酸乙酯 hexadecanoic acid, ethyl ester C18H 36O 2 0. 55 1. 35
7 9-十八碳烯酸乙酯 O leic Acid E thyl Ester C20H 38O 2 1. 24 /
8 二十碳烷 n-E icosane C20H42 1. 19 0. 75
9 十八酸乙酯 octadecaanoic acid , ethyl ester C20H 40O 2 / 0. 27
10 亚油酸乙酯 ethy l linoleate C20H 36O 2 0. 81 /
11 油酸 oleic acid C20H 38O 2 / 2. 21
12 9, 12-十八碳二烯酸甲酯 9, 12-O ctadecad ienoic acid , m ethyl ester C19H 34O 2 / 2. 10
13 9, 15-二烯十八酸甲酯 9, 15-octad ecadienoic acid, m ethy l ester C19H 34O 2 / 2. 10
14 亚麻酸甲酯 m ethy l linolenate C19H 32O 2 / 1. 39
15 11, 14, 17-二十碳三烯酸甲酯 11, 14, 17 - eicosatrienoic acid, m ethy l ester C21H 36O 2 1. 96 2. 60
16 植物醇 Phy tol C20H40O 0. 64 3. 34
17 二十一碳烷 n-H eneicosane C21H44 / 1. 82
18 邻苯二甲酸(2-乙基)二己酯 D i-2-ethylhexyl Ph th alate C24H 38O 4 / 1. 50
19 十四酸 n-Tetradecanoic C14H 28O 2 / 0. 34
20 3-二十碳烯 3-eicosene, (E) C20H40 / 4. 42
21 二十二烷 n-docosane C22H46 9. 70 /
22 二十三烷 n-T ricosane C23H48 18. 83 14. 28
23 M ethy l palu strate isom er C21H 32O 2 10. 81 9. 29
24 棕榈酸 hexadecanoic acid C16H 32O 2 12. 89 25. 52
25 去氢木香内酯 dehyd rocostus lactone C15H 18O 2 22. 24 22. 93
26 二十四烷 n-tetracosane C2H50 16. 03 /
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 8期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 8　
　　超临界萃取物主要含有:去氢木香内酯 , 不饱和 (脂肪 )酸
(脂),饱和脂肪酸(脂), 长链烷烃等。现代研究证实前 3类都有
显著的药理活性 [ 4, 7, 8] 。
萃取压力对萃取总量和萃取成分都有影响。当萃取压力由
10MPa升高到 20M Pa提取率由 0. 6%升高到2. 51%, 药理活性成
分含量上升, 脂质成分下降(46. 27% ～ 17. 23%)。综合提取率和
药效成分含量两方面考虑, 新疆雪莲适宜的萃取条件为:萃取釜 20
M Pa, 45℃,动态萃取 2. 5 h, 萃取过程短 、温度低 , 提取率 2. 51% ,
高于文献水蒸气法 0. 08%,并且萃取出多种水蒸气法不能得到的
系列不饱和酸成分 [ 5] 。雪莲 20MPa萃取物共分离出 26种化合
物:饱和脂肪酸(脂)(27. 81%),去氢木香内脂(22. 93%), 不饱和
酸(脂)(19. 69%), 鉴定了其中的 21种。已鉴定化合物组分占总
馏出组分的 80. 7%, 占色谱总馏出峰面积的 97. 6%。
雪莲 20M Pa萃取物含有 6种不饱和酸 , 异 pa lustra te甲酯 ,
油酸 , 亚油酸甲脂 , 9, 15-二烯十八酸甲酯 , 亚麻酸甲酯 , 11, 14, 17-
二十碳三烯酸甲酯均为首次从该属植物检测到。这与超临界萃
取温度低 , 时间短 ,提取系统密闭有关。 本实验为雪莲的进一步
研究开发奠定了基础 。
参考文献:
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收稿日期:2007-01-27;　修订日期:2007-03-15
基金项目:河北省卫生厅中医药管理局资助项目(No. 200133)
作者简介:赵　平(1958-),女(汉族),河北保定人,现任河北医科大学第三
医院教授,硕士学位 ,主要从事眼科疾病的中西医实验及临床研究工作.
*通讯作者简介:李慎乐 (1946-), 男(汉族),河北枣强人 , 现任河北医科
大学第三医院教授 ,主要从事眼科及中医中药抗衰老的研究工作.
中药对晶状体氧化损伤的防治作用
赵　平 ,白　瑜 ,张玉玲 ,周忠友 ,李慎乐*
(河北医科大学第三医院 ,河北 石家庄　050051)
摘要:目的 探讨制首乌 、北沙参 、紫丹参抗晶状体氧化损伤的作用机制。方法 用 D -半乳糖皮下注射 , 将 2月龄大鼠制
成衰老模型 , 然后用制首乌 、北沙参 、紫丹参 3味药灌胃 , 40 d后检测衰老大鼠晶状体组织中谷胱甘肽过氧化物酶 (g lu ta-
th ione pe rox idase, GSH -Px)、超氧化物歧化酶(Supe rox ide d ism utase, SOD)、丙二醛(m a le ic dia ldchyde, MDA)的活力和含
量。结果 中药治疗组晶状体中 GSH -Px、SOD的活力较衰老模型组明显增加 (P <0. 01), MDA的含量较衰老模型组明
显降低(P <0. 01)。结论 制首乌 、北沙参 、紫丹参 3味药联合应用具有抗晶状体氧化损伤的作用。
关键词:制首乌;　北沙参;　紫丹参;　自由基;　脂质过氧化
中图分类号:R285. 5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)08-1823-02
E ffect on Preventing and TreatingOxidative Damage ofChineseHerbs
ZHAO P ing, BAI Yu, ZHANG Yu-ling, ZHOU Zhong-you, LI Shen-le*(Department ofOphtha lmology, The Third Hospital ofHebeiMed ica lUn iversity, Shijiazhuang 050051, Ch ina)
Abstract:Objective To obse rve the e ffec t o f RadixPolygonum Multiflorum P reparata, Adenophora pan icula te and Radix Sa lviae
M iltiorrhizae on inh ibiting ox ida tive damage o f lens. M ethods Ag ing mode ls w erem ade by hypoderm ic injection of D - ga lac to se
into the 2 -month - o ld ra tsback of the neck. G ive the ra ts ga stric infusion w ith the decoction o f Rad ix Polygonum Multiflorum
P repara ta, Adenophora panicu late and RadixSa lviaeM iltiorrhizae a t the same time. The activ itie s o f g luta thione pe rox idase (GSH
- Px), supe rox ide dismu tase (SOD) andm a le ic dia ldchyde (MDA) in the ag ing rats treated w ith Chine se herbs wa s detec ted a f-
ter 40 day s. Resu lts The activ ity o fGSH - Px and SOD in he rbs cure group increased significantly com pa red w ith senile m ode l
g roup(P <0. 01), and the conten t o fMDA in herb s cure group dec reased significantly com pared w ith senile m ode l g roup(P <
0. 01). Conc lu sion The combinated app lication of Radix Polygonum Mu ltiflorum P repa ra ta, Adenophora panicu la te and Radix
sa lviaem iltiorrhizae p lay the no tab le ro le on antiox idan t dam age.
Key words:RadixPolygonum Multiflorum P repa ra ta;　Adenophora panicu late;　Rad ix SalviaeM iltiorrhizae;　F ree radicals;
　L ipid pe rox ide
　　近年 , 随着自由基医学的发展 , 自由基代谢与疾病和衰老的
关系已引起高度重视。越来越多的实验证实自由基增多所致的
脂质过氧化反应增强和抗氧化功能下降是白内障发生的重要机
制 [ 1] 。因此 , 寻找终止或抑制晶状体脂质过氧化反应的方法将
有利于延缓和预防白内障的发生和发展。笔者通过对衰老大鼠
晶状体中 SOD, GSH - Px和 MDA成分的测定 ,探讨中药制首乌 、
北沙参 、紫丹参抗氧化损伤的作用机制。
1　材料
1. 1　药物和试剂 中药由制首乌 、北沙参和紫丹参 3味药组成 ,
由河北医科大学第三医院制剂室制成口服液。 GSH - Px、 SOD、
MDA试剂盒均由南京建成生物公司提供。 D -半乳糖由上海试
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