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新疆软紫草系统溶剂法提取工艺研究



全 文 :动弹 ,一般 24 h内死亡。死亡小鼠解剖观察 ,主要
脏器未见变化。未死亡小鼠 30 min至 2d后可恢复
活动 ,用孙氏改进寇氏法计算 LD50和 95%可信限 ,
结果见表 10。
表 9 去除致炎成分后挥发油脂肪乳制剂急性毒理试验
组别 小鼠/只
剂量 /
(mL/kg)
死亡
动物
死亡率
/%
LD50及 95%
可信限度
1 10 13 10 100
2 10 11 8 80
3 10 9 6 60
4 10 7 5 50 7mL/kg
5 10 5 2 20 6.8~ 7.6
6 10 3 0 0
7 10 0 0 0
表 10  去除致炎成分后挥发油急性毒理试验
组别 小鼠/只
剂量 /
(mL/kg)
死亡
动物
死亡率
/%
LD50及 95%
可信限度
1 10 12.3 10 100
2 10 9.8 9 90
3 10 7.8 8 80
4 10 6.3 7 70 4.95mL/kg
5 10 5.0 6 60 4.2~ 5.7
6 10 4.0 4 40
7 10 3.2 1 10
  由以上结果可知:萜烯类挥发油的半数致死量
为 4.2 ~ 5.7mL/kg,而萜烯类脂肪乳的半数致死量
为 6.8 ~ 7.6mL/kg,说明制成乳剂后毒副作用有所
降低。
4 讨论
  根据上述实验结果 ,连翘萜烯脂肪乳的最优制
备工艺为:A3B1C3D4E2 ,即压力 160 /550 cm/kg2 、匀
乳次数 8、匀质温度 50 ℃、混合温度 55 ℃、匀乳温
度 35 ℃。一级阀门压力过大或过小 ,均会导致脂肪
乳的粒径不均匀 ,当压力控制在 160 cm/kg2时 ,显
著提高了粒径的均匀度;二级阀门压力用于控制乳
剂粒径的大小 ,根据实际需要 ,把压力控制在 550
cm/kg2较为合适;理论上 ,匀乳次数越多 ,粒径越均
匀 ,但从节能 、节时的角度分析 ,匀乳 8次即可达到
要求;乳剂制备过程中要严格控制温度 ,温度过低 ,
乳化不完全 ,温度过高 ,挥发油类药物会过度损失 ,
并且温度过高或过低均会使乳剂的稳定性降低 ,经
正交试验得匀质温度为 50℃、混合温度 55 ℃、匀乳
温度 35℃时 ,乳化效果较为理想。
对去除连翘刺激性成分后萜烯类部位挥发油和
去除刺激性成分后萜烯类部位挥发油脂肪乳进行急
性毒性试验结果表明 ,制备成乳剂以后毒性有所降
低 ,半数致死量从 4.95 mL/kg增加到 7 mL/kg,这
在临床上应用有较大的意义 。产生这一结果的原因
可能是挥发油类药物以小液滴的形式均匀的分散在
乳剂中 ,使药物吸收均匀且剂量准确 ,减少药物的刺
激性 ,药物从小乳滴中缓慢释放使血药浓度处于平
稳状态 ,因而在一定程度上降低了毒副作用 。
参考文献:
[ 1]  雷載权.中药学 [ M] .上海:上海科技出版社 , 2004:67.
[ 2]  廖颂明.中 /长链脂肪乳注射液制备工艺研究 [ J] .广东药学院
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368.
新疆软紫草系统溶剂法提取工艺研究
戴 冰 1 ,  冷 旺 2 ,  邹双华2 ,  周新培 1 ,  刘 磊 2
(1.湖南中医药大学附属第一医院 ,湖南 长沙 410007;2.湖南中医药大学 ,湖南 长沙 410007)
收稿日期:2007-10-11
基金项目:湖南省计划生育委员会科研课题基金(No.2002-14)。
作者简介:戴 冰(1964-),女 ,博士 ,副主任药师,研究方向:中药学 ,电话:0731-5600467。
关键词:新疆软紫草;系统溶剂法;提取工艺
摘要:目的:初步探讨新疆软紫草系统溶剂法提取工艺。方法:将新疆软紫草加入石油醚 、醋酸乙酯 、乙醇和水进行系统
溶剂提取 , 并分别制作样品 ,取提取所得不同的样品及紫草生药材 ,在 516 nm波长处测定吸光度。结果:紫草素及其衍
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生物在石油醚提取物中最大。结论:采取系统溶剂法提取紫草 ,工艺稳定 、可行。可为紫草药理活性成分筛选及制剂开
发提供新的提取途径 。
中图分类号:R284.2     文献标识码:A     文章编号:1001-1528(2008)10-1461-04
  新疆软紫草 Arnebiaeeuchroma为常用中药 ,始
载于《神农本草经 》列为中品 。味苦 ,性寒 。有凉
血 、活血 、解毒和透疹的功能 ,主治血热毒盛 、斑疹紫
黑 、麻疹不透 、疮疡 、湿疹 、水火烫伤等 。紫草的化学
成分和药理活性研究表明 ,紫草含有多种生理活性
成分 ,这些成分具有抗菌抗炎 、抗癌 、抗生育 、抗甲状
腺 、抗免疫低下 、降血糖 、保肝护肝等多种作用 [ 1] 。
本文就系统溶剂法提取中药新疆软紫草的工艺研究
进行探讨 ,现报道如下 。
1 仪器与试药
  电子天平 (BS-J120);紫外分光光度计 (UV-
2501PC);新疆软紫草(经湖南中医药大学附属第
一医院药剂科检验 ,符合 2005版中国药典要求);左
旋紫草素标准品 (0769-9903,由中国药品生物制品
检定所提供);石油醚 ,湖南师范大学试剂厂 (AR
级);醋酸乙酯 ,长沙安泰精细化工实业公司 (AR
级);乙醇 ,湖南师范大学试剂厂(AR级);水为纯净
水 。
2 方法与结果
2.1 最大吸收波长的确定
  取本品(新疆软紫草)适量 ,约 4.0g,于50°C干
燥 3 h,粉碎(过三号筛),精密称取约 0.25 g,置 50
mL量瓶中 ,加石油醚至刻度 ,超声提取 30 min,滤
过 ,精密量取续滤液 5 mL,置 25 mL量瓶中 ,加石油
醚至刻度 ,摇匀 ,随行试剂作空白。用紫外扫描仪在
400 ~ 700nm范围内作一个全程扫描 ,发现其最大
波长在 516nm波长处 。同法测定浸膏的最大吸收
波长 ,发现其最大波长也在 516 nm波长处 ,故选择
516nm为测定波长。
2.2 紫草药材中紫草素含量的测定 [ 2]
  取新疆软紫草适量 ,约 4.0g,于50 °C干燥 3h,
粉碎(过三号筛),精密称取约 0.5 g,置 50mL量瓶
中 ,加石油醚至刻度 ,超声提取 30min,滤过 ,精密量
取续滤液 5mL,置 25 mL量瓶中 ,加石油醚至刻度 ,
摇匀 ,随行试剂作空白 。于波长 516nm处测定紫草
素的吸光度 A,按左旋紫草素(C16H16O5)的吸光系
数 E%为 242计算 ,得出紫草药材中紫草素的含量。
2.3 4种溶媒系统溶剂法提取工艺考察
  称取新疆软紫草(新疆软紫草于 50 °C条件下 ,
干燥 3 h,粉碎过筛 ,筛取粗粉)500 g于渗漉筒中 ,
依次用石油醚 、醋酸乙酯和乙醇渗漉提取 ,每次加溶
剂 400 ~ 500 mL,使溶剂匀速流下 ,同时将流出的提
取液重新加入进行多次重复提取 ,多次流洗至提取
液颜色近无色时停止流洗 ,溶剂用量大约为样品的
20 ~ 30倍 。当流洗结束时 ,将药渣倒出 ,水浴挥干
溶剂后再换溶剂依次流洗。最后各部位提取液于旋
转蒸发器上浓缩并回收溶剂 ,浓缩液挥干溶剂后称
重 ,计算得率 [ 3] ;各提取部位分别编号为 Pe, EtOAc
和 EtOH。最后用水煎煮提取 ,得水提取物 ,并计算
得率;编号为 H2O。利用紫外分光光度法测定各提
取物中紫草素的含量 ,以左旋紫草素计 [ 2] 。
2.3.1 石油醚提取工艺的考察
在预试验基础上 ,发现粉碎度 、渗漉速率及浸泡
时间对提取结果有影响 ,因此采用 L9(34)正交表优
化石油醚提工艺条件 ,重点考察上述三个因素 ,分别
取三个水平。因素水平见表 1。
表 1  石油醚提取工艺因素水平表
水平 因  素粉碎度 渗漉速率 /(mL/min·cm2) 浸泡时间 /h
1 小段 2 8
2 粗粉 4 10
3 细粉 6 12
  称取新疆软紫草药材 200 g,根据正交试验安排
进行提取 ,提取液过滤 ,浓缩至 100 mL左右 ,移入
100mL量瓶中 ,加石油醚至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 25
mL置干燥至恒重的蒸发皿内 ,水浴蒸干 ,检测浸膏
收率 。余液浓缩 ,干燥 ,检测紫草素提取量。结果见
表 2。
  对石油醚提取浸膏收率进行方差分析 , A(粉碎
度)、B(渗漉速率)、C(浸泡时间)三因素的离差平
方和分别为 1.17、0.04、0.42,误差为 0.01。A和 C
具有显著差异 , B并无显著影响 ,结果表明:A>C>
B;最佳工艺:A3B2C3 ,即加入 10倍量石油醚浸泡 12
h后 ,进行冷浸渗漉 ,渗漉速率为 4 mL/min· cm2 ,
此时石油醚提取的浸膏得率较高 。
对石油醚提取紫草素提取量进行方差分析 , A
(粉碎度)、B(渗漉速率)、C(浸泡时间)三因素的离
差平方和分别为26 041.56、38 253.56、984.22,误差
为 4 884.22。 A和 B有显著性差异 , C无显著性影
响 ,结果表明:B>A>C;最佳工艺:A2 B2C3 ,即加入
8倍量石油醚浸泡12h后 ,进行冷浸渗漉 ,渗漉速率
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表 2  石油醚提取工艺正交表
试验号 序  号A粉碎度 B渗漉速率 C浸泡时间 D空列
考查 指标
浸膏收率 /% 紫草素提取量 /mg
1 1 1 1 1 2.12 1 708
2 1 2 2 2 2.52 1 661
3 1 3 3 3 2.57 1 498
4 2 1 2 3 2.98 1 792
5 2 2 3 1 3.31 1 811
6 2 3 1 2 2.55 1 646
7 3 1 3 2 3.41 1 736
8 3 2 1 3 3.08 1 743
9 3 3 2 1 3.35 1 667
K1 2.40 2.84 2.58 2.93
K2 2.95 2.97 2.95 2.83
K3 3.28 2.82 3.10 2.88
R 0.88 0.15 0.51 0.10
K1 4 867.00 5 236.00 5 097.00 5 186.00
K2 5 249.00 5 215.00 5 120.00 5 043.00
K3 5 146.00 4 811.00 5 045.00 5 033.00
R 127.33 141.67 25.00 51.00
为 4 mL/min· cm2 ,此时石油醚提取的紫草素提取
量较高 。
2.3.2 石油醚提取工艺验证
称取新疆软紫草药材 200g,按最佳石油醚提取
工艺进行提取 ,过滤 ,浓缩 ,干燥 ,计算浸膏得率及检
测紫草素提取量 ,结果见表 3。
  表 3结果与正交试验结果相近 ,由此证明该提
取工艺稳定 、可行 。
2.3.3 醋酸乙酯 、乙醇提取工艺的考察
在系统溶剂法提取过程中 ,为使有效成分充分
提取 ,我们分别采用了醋酸乙酯和乙醇回流提取 ,并
对二者的用量进行了考察 。考察不同用量的醋酸乙
酯和乙醇对其浸膏得率及紫草素提取量的影响 ,结
果见表 4。
表 3  石油醚提取工艺验证结果
序号 紫草素提取量 /mg 浸膏得率 /%
1 1 822 3.1
2 1 825 3.2
3 1 815 3.2
平均 1 821 3.15
表 4  醋酸乙酯 、乙醇提取紫草工艺考察结果
试验号 用量 浸膏得率 /% 紫草素提取量 /mg
醋酸乙醋
1 3 3.57 1 678
2 4 4.06 1 810
3 5 4.08 1 813
乙醇
1 3 0.67 103
2 4 0.82 118
3 5 0.84 120
  表 4结果可知 ,醋酸乙酯 、乙醇皆在 4倍与 5倍
量时提取浸膏得率较大 ,紫草素提取量较高。但考
虑到应节约成本的原则且紫草素提取量接近 ,故用
4倍量的醋酸乙酯 、乙醇进行提取。
2.3.4 水提取工艺的考察
为了选择合适的水提取条件 ,以提取时间 、提取
次数 、加水量为考查因素。以浸膏收率及浸膏中紫
草素提取量为考查指标进行三因素三水平正交试
验。因素水平见表 5。
表 5  水提正交试验因素水平选择表
水平 因  素提取次数 /次 提取时间 /min 加水量 /倍
1 1 30 8
2 2 45 10
3 3 60 12
  取经系统溶剂法提取所得药渣 ,按正交试验工
艺进行提取 ,提取液过滤 ,浓缩至 250mL左右 ,移入
250 mL量瓶中 ,加入水至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 25
mL置干燥至恒重的蒸发皿内 ,水浴蒸干 ,检测浸膏
收率 。余液浓缩 ,干燥 ,检测紫草素的提取量 。结果
见表 6。
  对用水提正交收率进行方差分析 ,以浸膏收率
为指标 , A(提取次数)、B(提取时间)、C(加水量)三
因素的离均差平方和分别为 0.04、0.21、0.01,误差
为 0.02。B因素有显著性差异 , A和 C无显著性影
响 ,结果表明:B>A>C;最佳工艺:A2B3C1 ,即水煎
煮 2次 ,每次 1 h,每次 8倍量水。
2.3.5 水提取工艺验证
由表 7可知 ,验证结果与正交实验结果基本一
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致 。根据提取条件考查研究情况最终确定提取工艺
为:水煎煮 2次 ,每次 1 h,加水 8倍量 。
表 6  水提工艺正交试验表
试验

序  号
A
提取次数
B
提取时间
C
加水量
D
空列
考 查指 标
浸膏收
率 /%
1 1 1 1 1 0.58
2 1 2 2 2 0.76
3 1 3 3 3 0.89
4 2 1 2 3 0.67
5 2 2 3 1 1.01
6 2 3 1 2 1.05
7 3 1 3 2 0.62
8 3 2 1 3 0.72
9 3 3 2 1 1.06
K1 0.74 0.62 0.78 0.88
K2 0.91 0.83 0.83 0.81
K3 0.80 1.00 0.84 0.76
R 0.17 0.38 0.06 0.12
表 7  水提正交实验验证结果
序号 药材用量 /g 浸膏收率 /%
1 200 0.98
2 200 1.05
3 200 1.07
平均 1.03
2.3.6 紫草药材中紫草素含量测定
按干燥品计算:(已测紫草药材的水分含量为
9.79%)
紫草素含量%=5.53 /(1-9.79%)=6.13%
药典规定 ,按干燥品计算 ,含羟基萘醌总色素以
左旋紫草素(C16H16O5)计 ,不得少于 0.80%,符合
(2005年版中国药典)规定 。
4种溶媒系统溶剂法的工艺流程:将新疆软紫
草加入 10倍量石油醚浸泡 12 h后 ,进行冷浸渗漉 ,
渗漉速率为 4 mL/min· cm2 ,然后加入 4倍量醋酸
乙酯和乙醇进行冷浸渗漉 ,最后加水煎煮 2次 ,每次
1 h,加水 8倍量进行系统溶剂提取 。
表 8  紫草药材中紫草素含量的测定
测定次数 药粉重 /g吸收度 /A紫草素含量 /% 平均值 /%
1 0.507 8 1.468 0 5.97
2 0.505 5 1.274 0 5.21 5.53
3 0.507 2 1.196 0 5.41
3 讨论
  新疆软紫草中的主要成分为萘醌类色素 ,其醌
类结构具抗生育的活性成分;主要有左旋紫草素 、紫
草素等 。且目前紫草素测定方法已经比较成熟 ,对
紫草素衍生物的测定方法主要有比色法 、重量法 、紫
外-可见分光光度法 、正相高效液相色谱法等 。这些
方法主要用于测定紫草提取物中的萘醌类化合物总
量或主要单体含量 。虽高效液相色谱法具有比紫外
分光光度法更多得优点 ,但本实验采用紫外分光光
度法对药材及所得提取物进行测定 ,方法简单 、快
速 、准确 ,为控制紫草素含量及提取工艺进行优选提
供了可靠的方法 ,故本实验研究以左旋紫草素为指
标成分对提取工艺进行优选 。
紫草的有效化学成分主要分为两大类 ,一类是
脂溶性很强的紫草色素 ,另一类是水溶性成分 ,主要
是多糖类 ,含量在 2%左右 。提取新疆软紫草时的
方法不同对有效成分的影响不同 。而以往即使在使
用同一溶媒石油醚提取时 ,有的用索氏提取 ,有的用
回流提取 ,有的用冷浸萃取方式提取 ,前二者提取时
温度远远高于 60 °C,有些成分受到了破坏 ,因而导
致同一溶媒不同温度提取时 ,所含软紫草的成分不
同。油浸法(70°C)提取时对相关的成分有一定的
破坏;油炸法一般都是 200 °C左右操作 ,时间虽短 ,
对软紫草成分的影响还是较大的[ 4] 。故采用石油
醚 、醋酸乙酯 、乙醇 、水四种溶剂系统溶剂法于室温
提取软紫草。实验结果表明渗漉速率及溶媒用量对
提取结果具有显著差异 ,这可能与粉碎度对提取结
果有一定影响 ,渗漉速率越小 ,溶媒用量相对较高 ,
溶媒与药材接触时间长 ,药材松散开 ,药材里面的紫
草素成分容易渗出 ,从而提高了提取率 。同样 ,药材
粗粉能增加生药与溶剂接触的表面积 ,从而提高渗
漉效果。但对粗粉进行再粉碎提取时 ,对提取效果
不明显 ,这也可能与紫草生药本身质地疏松有关。
三次验证实验结果与正交试验结果相近 ,也证明了
该提取工艺稳定 、可行。
由于采用的系统溶剂法提取新疆软紫草 ,故只
对醋酸乙酯 、乙醇用量进行了考察 ,实验结果表明 ,
不同用量的溶媒 ,浸膏收率及紫草素提取量不同 ,用
3倍 、4倍 、5倍溶剂量考察 , 4倍 、5倍量浸膏收率及
紫草素提取量相对较高 ,考虑到应节约成本的原则 ,
故最终确定用 4倍量的醋酸乙酯 、乙醇分别进行提
取。同时 ,紫草中除脂溶性成分外 ,还含少量水溶性
成分 ,主要是多糖类 。并对经上述三中溶媒提取后
的药渣加水煎煮 ,由于可能还含有少量未提取完全
的紫草素成分 ,使得浸出物中紫草素含量低 ,不便用
紫外法检出 ,我们选择浸膏收率为指标对水提主要
因素进行了考察。
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第 30卷 第 10期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
October2008
Vol.30 No.10
收稿日期:2007-10-12
基金项目:广西科学基金(No.桂科青 0542037)、国家十一五科技支撑计划(No.2006BAI08B04-01)、国家 973中医理论专项(No.
2005CB523503)资助。
作者简介:覃 锋(1982-),男 ,硕士研究生 ,从事近红外光谱技术 、智能计算 ,电话:010-62772265。
*通讯作者:罗国安 ,教授 , E-mail:luoga@mail.tsinghua.edu,电话:010-62781688;杨辉华 , 副教授 , E-mail:yanghuihua@mail.tsinghua.edu.
cn.电话:13718680586。
参考文献:
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[质  量 ]
NIR光谱结合 LLE-PLS建模用于安神补脑液提取过程分析的研究
覃 锋 1, 2 ,  杨辉华 1, 2* ,  吕琳昂 2, 3 ,  师 涛 2, 3 ,  梁琼麟2 ,  王义明2 ,  罗国安 2*
(1.桂林电子科技大学计算机与控制学院 ,广西 桂林 541004;2.清华大学分析中心 ,北京 100084;3.江西中
医学院 ,江西 南昌 330004)
关键词:安神补脑液;质量控制;近红外光谱;局部线性嵌入;偏最小二乘
摘要:目的:探讨安神补脑液提取过程近红外(NIR)光谱分析的可行性及其方法 。方法:提出 NIR光谱建模的局部线性
嵌入(LLE)-偏最小二乘(PLS)方法 , 该方法首先用 LLE对 NIR光谱数据降维 ,再用 PLS建立校正模型。结果:参数优化
后的 LLE-PLS, 二苯乙烯苷留-法交叉验证均方根误差(RMSECV)为 0.045 7 mg/mL、决定系数(R2)为0.967 3, 淫羊藿苷
RMSECV为 0.033 3 mg/mL、R2为 0.980 9, 均优于常规的 PLS建模方法。结论:基于 NIR光谱和 LLE-PLS方法可实现安
神补脑液提取过程的在线分析。
中图分类号:R927.2     文献标识码:A     文章编号:1001-1528(2008)10-1465-04
ApplicationofnearinfraredspectracoupledwithLLE-PLSmodelingtoextrac-
tionprocessofAnshenBunaoSyrup
QINFeng1, 2 ,  YANGHui-hua1, 2* ,  L Lin-ang2, 3 ,  SHITao2, 3 ,  LIANGQiong-lin2 ,  WANGYi-ming2 ,  
LUOGuo-an2*
(1.ColegeofComputerandControl, GuilinUniversityofElectronicTechnology, Guilin541004;2.AnalysisCenter, TsinghuaUniversity, Beijing100084,
China;3.JiangxiUniversityofChineseMedicine, Nanchang330004 , China)
KEYWORDS:AnshenBunaoSyrup;qualitycontrol;nearinfraredspectrum;localylinearembedding;partial
leastsquares
ABSTRACT:AIM:Todiscussthefeasibilityandmethodsoftheapplingnearinfrared(NIR)analysistotheex-
tractionprocessofAnshenBunaoSyrup.METHODS:AnovelnonlinearmodelingmethodforNIRspectrawas
proposedinthepaper.Firstly, localylinearembedding(LLE)wasadoptedtolowerthedimensionsofNIRspec-
tra, andthenpartialleastsquares(PLS)wasusedtobuildcorectionmodeling.RESULTS:Afterparameteropti-
mization, LLE-PLScouldaccuratelypredicttheconcentrationofchrysopheninewithaminimumRMSECVof
0.045 7mg/mL, R2 of0.967 3, andicarinwithRMSECVof0.033 3 mg/mL, R2 of0.980 9, suggestingthat
LLE-PLSwasmorespecificthanthecommonPLSmethods.CONCLUSION:Onlinequalitycontrolintheprocess
ofAnshenBunaoSyrupisrealizablebycombiningNIRspecrtaandLLE-PLSmodelingmethods.
1465
2008年 10月
第 30卷 第 10期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
October2008
Vol.30 No.10