全 文 ：作用，与免疫抑制类药物不同，本药对佐剂性关节炎大鼠免疫
器官没有明显的抑制作用。该实验结果为麻花秦艽作为免疫
性抗炎药物治疗风湿及类风湿关节炎等的开发提供了一定的
药理学依据。
参考文献
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Effcets of the Gentiana straminea Maxim on adjuvant arthritis in rats
Zhao Qin，WangLele，Wei Lipeng，Wang Xin，Li Jie，He Xue，Sun Fangyun，Yuan Dongya
(The Medical Department of Tibet Institute for Nationalities，Xianyang 712082)
Objective:To investigate the preventive and therapeutic effects of the Tibetan Gentiana straminea Maxim on adjuvant arthritis (AA)in
rats．Methods:Forty-eight rats were randomly divided into 6 groups:control group，AA model group，tripterygium glycosides group，and Gen-
tiana straminea Maxim Extracts groups of different dosages (10，5，2． 5 g /kg)． In addition to the control group，each group was injection of in-
tradermal Freund＇s complete adjuvant (0． 1 ml)into left hindpaw of rats to establish adjuvant arthritis model． Gentiana straminea Maxim were
administered by intragastric administration (ig)for 21 days(10，5，2． 5 g /kg)． The pathological changes of hindpaw swelling in each group
were observed． Primary and secondary hindpaw swelling of AA rats were measured with volume meter． Ｒesults :Gentiana straminea Maxim
10，5，2． 5 g /kg obviously relieved the changes of hindpaw swelling in adjuvant arthritis rat． Conclusion:Gentiana straminea Maxim could al-
leviate the changes of the hindpaw swelling affected with rheumatoid arthritis．
Key words Gentiana straminea Maxim(麻花秦艽) ;adjuvant arthritis
新疆软紫草石油醚提取物对小鼠及其靶器官的毒性影响
*
戴 冰1，曹璐婷2，肖子曾2，吴沁璇2，曾呈茜2，杨梦琳2，张嘉妮2
(1湖南中医药大学附属第一医院，长沙 410007;2湖南中医药大学，长沙 410208)
摘 要 目的:考察新疆软紫草石油醚提取物对小鼠的急性毒性和蓄积毒性影响，探讨其主要靶器官的毒性作用。方法:急
性毒性实验:采用改良寇氏法进行半数致死量(LD50)的测定;蓄积毒性实验:采用剂量递增法给药，对照组给以 4%吐温-80 水溶液，
观察实验期间一般生理情况，以及组织病理学变化，进行血清生化指标检测。结果:新疆软紫草石油醚提取物单次灌胃小鼠的半数
致死量(LD50)= 3． 48g /kg，LD5095%的可信区间为 3． 46 ～ 3． 50g /kg。蓄积毒性实验结果表明新疆软紫草石油醚提取物在小鼠体内
的蓄积系数 K =3． 76，为中等蓄积毒性，小鼠 17 天累积灌胃新疆软紫草石油醚提取物 13． 08g /kg 可引起小鼠摄食量减少，体重下
降，小鼠肝脏、脾脏和胃肠道均有不同程度的损伤和病变。结论:新疆软紫草石油醚提取物对小鼠的毒性作用主要表现在肝毒性和
胃肠道毒性，表明肝脏和胃肠道可能是其毒性作用的主要靶器官。
关键词 新疆软紫草;石油醚提取物;半数致死量;蓄积毒性;靶器官
紫草为紫草科(Boraginaceae)多年生草本植物，2010 版《中
华人民共和国药典》收载的紫草为新疆紫草(软紫草) ［Arnebeia
euchroma(Ｒoyle)Johnst］或内蒙紫草 Arnebia guttata Bunge 的干
燥根［1］。其中以新疆软紫草品质为优［2］。现代药理研究发现，
新疆软紫草具广泛的药理作用，其主要有效成分萘醌类化合物
具有促进伤口愈合和抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗生育等作
用，临床应用广泛［3］。同时由于该类化合物较为丰富的色素资
源以及抗氧化性，常被广泛用于食品，化妆品和印染行业。
目前对新疆软紫草毒理学方面的研究相关报道较少，仅见
于王增涛［4］在对新疆软紫草复方制剂紫茜抗癌胶囊的毒性研
741中药药理与临床 2015;31(1)
* 基金项目:湖南省自然科学基金项目(13JJ3096) ;湖南省科学技术厅科技计划一般项目(2010FJ4091) ;湖南省高校创新平台开放基金项目
(11K046) ;湖南省中医药管理局项目(201460)。
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.01.047
究中发现，高剂量长期服用大鼠有轻微毒性反应，以及桂春［5］
等研究发现乙酰紫草素大剂量对培养的大鼠心肌细胞有一定
毒性作用。课题组在前期研究发现，新疆软紫草石油醚提取物
对小鼠有一定的毒性作用［6］，为此，本研究设计新疆软紫草石
油醚提取物急性毒性实验和体内蓄积毒性实验对其进行系统
综合研究，探讨其对小鼠主要靶器官的毒性影响，为新疆软紫
草的进一步临床开发利用提供参考。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 新疆软紫草(Arnebeia euchroma(Ｒoyle)
Johnst)购自湖南中医药大学第一附属医院，批号 1307220462
(经湖南中医药大学附属第一医院药剂科检验，符合 2010 版中
国药典要求)。本实验以其为原料，干燥粉碎后以 10 倍量的石
油醚(60℃ ～90℃)1ml /min的流速渗漉提取一个月。回收溶剂
石油醚，干燥至恒重，新疆软紫草石油醚提取物固形物得率为
2． 69%，临用前以 4%吐温-80 助溶配置成混悬液。
1． 2 动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重 18 ～ 22 g，共 110 只，
SPF 级，购自湖南中医药大学实验动物中心，合格证号:SCXK
(湘)20130004。
1． 3 试剂 石油醚(60℃ ～90℃)购自天津市富宇精细化工有
限公司;总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶
(LDH)、肌酐(Cre)、尿素(Urea)试剂盒购自中生北控生物股份
有限公司。
1． 4 方法
1． 4． 1 急性毒性实验 昆明小鼠 70 只，雌雄各半，体重 18 ～
22 g。按照体重随机分为 7 组，每组 10 只，禁食 12 h 后，以
25ml /kg鼠重灌胃一次，对照组给以 4%吐温-80 水溶液。实验
组分别给以 1． 9、2． 5、3． 4、4． 5、6 和 8g /kg的新疆软紫草石油醚
提取物。给药后观察 14 天，观察记录各组小鼠的毒发时间、毒
性表现、死亡时间和死亡只数，计算 LD50。
1． 4． 2 蓄积毒性实验 采用蓄积系数法［7］。取 40 只小鼠，雌
雄各半，分为对照组和新疆软紫草石油醚提取物组两组，以
10ml /kg鼠重灌胃，对照组给以 4%吐温水溶液，新疆软紫草石
油醚提取物组以 4 d为一期，初始给药剂量为 0． 1 倍 LD50，以后
各期给药剂量顺次按 1． 5 倍递增，连续给药(表 1)。当实验组
小鼠累积死亡数目达到一半时或者累积给药量达到 5． 0 倍
LD50时结束实验。计算累积给药剂量以及蓄积系数 K = LD50
(n)/LD50。
表 1 新疆软紫草石油醚提取物蓄积毒性实验给药方法
给药期限 1 ～ 4(d) 5 ～ 8(d) 9 ～ 12(d) 13 ～ 16(d) 17 ～ 20(d)
每日剂量 0． 10 LD50 0． 15 LD50 0． 22 LD50 0． 34 LD50 0． 50 LD50
每阶段累积计量 0． 40 LD50 0． 60 LD50 0． 90 LD50 1． 36 LD50 2． 00LD50
累积总剂量 0． 40 LD50 1． 00 LD50 1． 90 LD50 3． 26 LD50 5． 26 LD50
1． 4． 3 观察指标和检查方法 一般生理观察:观察小鼠的体重
变化，体征变化，食物消耗，饮水以及精神活动状态，统计小鼠的
每日摄食量和体重变化，记录小鼠的死亡数目和解剖状况以及
死亡原因;病理组织学观察:称量小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胃和
小肠的重量，计算各脏器指数，脏器指数 =脏器(mg)/活体体重
(g) ，并做病理组织学观察;血液生化学指标:末次给药禁食 12
h后，摘眼球取血，制备血清，检测血清总蛋白(TP)、白蛋白
(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷
酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素 (Urea)、肌酐(Cre)。
2 结果
2． 1 急性毒性实验
2． 1． 1 小鼠死亡频数分布 小鼠灌胃新疆软紫草石油醚提取
物后 4 小时候开始有死亡。随着给药浓度的降低达到死亡高峰
的时间也随之变长。6 天后存活小鼠未再发生死亡现象。小鼠
灌胃不同浓度新疆软紫草石油醚提取物后累积死亡-时间情况
见图 1。
图 1 新疆软紫草石油醚提取物不同剂量组小鼠累积死亡-时间曲线
2． 1． 2 LD50测定结果 根据各剂量组小鼠死亡数量及给药剂
量，用改良寇氏法计算新疆软紫草石油醚提取物 LD50及 95%可
信限，算的新疆软紫草石油醚提取物单次灌胃小鼠的 LD50 = 3．
48g /kg ，LD5095%的可信区间为 3． 46 ～ 3． 50g /kg，见表 2。
表 2 新疆软紫草石油醚提取物灌胃小鼠的 LD50
组别
剂量
(g /kg)
鼠数
(只)
死亡鼠数
(只)
死亡率
(%)
对照 10 0 0
新疆软紫草石油醚提取物 8 10 10 100
新疆软紫草石油醚提取物 6 10 8 80
新疆软紫草石油醚提取物 4． 5 10 7 70
新疆软紫草石油醚提取物 3． 4 10 6 60
新疆软紫草石油醚提取物 2． 5 10 3 30
新疆软紫草石油醚提取物 1． 9 10 0 0
2． 1． 3 小鼠急性毒性实验症状观察 小鼠给药后高剂量组活
动减少、反应迟钝、背毛凌乱、精神萎靡、扎堆。随着时间的增
加，小鼠出血腹泻、腹部急剧喘气、走路不稳、后抽搐跳跃或反转
而死。但发现不同浓度组之间随剂量递减中毒程度减轻。对死
亡小鼠进行解剖，发现小鼠胃肠道内有大量气体和液体充盈，肠
壁变薄。其余重要组织脏器未见明显异常。
2． 2 蓄积毒性实验结果
2． 2． 1 死亡情况与蓄积系数 K值计算 小鼠在新疆软紫草石
油醚灌胃第一阶段未出现死亡。从第 7 天开始随时间增加不断
有死亡出现。第四阶段达到高峰，第 17 天死亡只数达到 10 只，
实验结束，其中死亡雄性小鼠 6 只雌性 4 只。见表 3。根据表 3
数据计算得新疆软紫草石油醚提取物在小鼠体内的蓄积系数 K
=3． 76，根据蓄积毒性评价标准［8］，表明新疆软紫草石油醚提
取物具有中等蓄积毒性。存活小鼠累积灌胃新疆软紫草石油醚
提取物 13． 08g /kg。
841 中药药理与临床 2015;31(1)
表 3 蓄积毒性实验新疆软紫草石油醚提取物组小鼠死亡情况(n
= 20)
阶段
时间
(d)
给药剂量
(g /kg /d)
死亡只数
(只)
第一阶段 1 ～ 4 0． 10 LD50 0
第二阶段 5 ～ 8 0． 15 LD50 2
第三阶段 9 ～ 12 0． 22 LD50 2
第四阶段 13 ～ 16 0． 34 LD50 4
第五阶段 17 0． 50 LD50 2
LD50 = 3． 48g /kg
2． 2． 2 一般生理观察结果 与对照组相比，新疆软紫草石油醚
提取物组小鼠给药第一阶段活动均正常，对小鼠的体重和摄食
量影响均无显著性差异。随着给药累积计量的变大，小鼠活动
减少、反应迟钝、背毛凌乱，摄食量开始逐渐减少，体重也随之下
降，与同期对照组相比有显著性差异。表明新疆软紫草石油醚
提取物对小鼠的摄食量和体重有较大影响，见表 4。
表 4 蓄积毒性实验对照组与新疆软紫草石油醚提取物组小鼠的
摄食量和体重比较(珋x ± s)
阶段
时间
(d)
给药剂量(g /kg)
对照组
新疆软紫草
石油醚提取
摄食量(g)
对照组
新疆软紫草石
油醚提取
体重(g)
对照组
新疆软紫草石
油醚提取
第一阶段 1 ～ 4 - 1． 39 30． 01 ± 0． 19 28． 69 ± 0． 24 6． 39 ± 0． 10 5． 94 ± 0． 15
第二阶段 5 ～ 8 - 2． 09 31． 71 ± 0． 17 25． 48 ± 0． 32* 6． 30 ± 0． 06 5． 84 ± 0． 10＊＊
第三阶段 9 ～ 12 - 3． 06 33． 64 ± 0． 12 24． 29 ± 0． 10＊＊ 6． 43 ± 0． 08 5． 00 ± 0． 09＊＊
第四阶段13 ～ 16 - 4． 73 34． 55 ± 0． 20 25． 04 ± 0． 20＊＊ 6． 28 ± 0． 12 3． 71 ± 0． 16＊＊
与对照组比较 * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01(下同)
2． 2． 3 病理组织学检查 新疆软紫草石油醚提取物组(存活
小鼠和刚死亡小鼠总和)与对照组比较心、肺、肾、脑的脏器系
数无显著性差异。肝、脾、胃、小肠的脏器系数与对照组相比均
有显著性差异。表明新疆软紫草石油醚提取物对小鼠肝脏、脾
脏和胃肠道有明显的影响，见表 5。
表 5 蓄积毒性实验小鼠的脏器指数(珋x ± s，n = 10 or 20)
脏器指数
(mg /g)
对照组
新疆软紫草石油醚
提取物组 13． 08g /kg
心脏指数 5． 11 ± 0． 14 5． 13 ± 0． 20
肝脏指数 49． 54 ± 1． 70 53． 13 ± 1． 28＊＊
脾脏指数 3． 20 ± 0． 18 2． 30 ± 0． 22＊＊
肺脏指数 8． 10 ± 0． 40 8． 78 ± 0． 58
肾脏指数 13． 85 ± 0． 98 14． 47 ± 0． 86
脑指数 14． 04 ± 1． 02 15． 62 ± 1． 04
胃指数 9． 43 ± 0． 48 10． 93 ± 0． 53＊＊
小肠指数 9． 24 ± 0． 66 11． 79 ± 0． 75＊＊
新疆软紫草石油醚提取物组与对照组存活小鼠病理组织
切片检查显示。新疆软紫草石油醚提取物组小鼠部分肝细胞
出现水肿，细胞体积增大，空泡变性，胞浆疏松淡染，细胞核染色
加深且大小不等。个别小鼠有肝脏局部坏死现象。脾脏淋巴细
胞排了疏松，白髓面积增大，高倍镜下可见巨噬细胞吞噬大量
异物，出现大量聚核。胃内壁出现上皮脱落现象，局部有溃疡，
壁细胞空泡变性。小肠上皮脱落，无完整形态，部分小鼠出现血
管增多，大量充血现象。个别实验组小鼠肾小管管壁变薄，少数
管腔内可见蛋白管型。其他心、肺、脑组织结构清晰，病理学检
查未见异常变化，见图 2。
2． 2． 4 血清生化指标 新疆软紫草石油醚提取物组(存活小
鼠)与对照组血清生化指标测定结果显示实验组小鼠血清 TP、
ALB和 A/G于对照组相比有显著性差异，GLO 值差异不显著。
ALT、AST值与对照组比有显著性差异。表明新疆软紫草石油
醚提取物对小鼠造成了肝功能损伤，这与病理组织观察到的小
鼠肝脏病变一致。其余 APL、LDH、Cre、Urea各指标实验组与对
照组相比均无显著性差异，见表 6。
图 2 对照组与新疆软紫草石油醚提取物 13． 08g /kg组小鼠的肝脏、胃、
小肠、脾脏、肾脏组织的病理切片(HE染色，× 400)
表 6 蓄积毒性实验小鼠血清生化指标测定结果(珋x ± s，n = 10 or
20)
指标 对照组
新疆软紫草石油醚
提取物组 13． 08g /kg
TP(g /L) 70． 09 ± 1． 26 66． 26 ± 1． 77*
ALB(g /L) 41． 45 ± 2． 05 35． 01 ± 1． 51＊＊
GLO(g /L) 28． 64 ± 0． 73 28． 28 ± 1． 03
A /G 1． 46 ± 0． 09 1． 11 ± 0． 06＊＊
ALT(U /L) 36． 05 ± 2． 07 44． 41 ± 2． 68*
AST(U /L) 128． 90 ± 1． 59 137． 99 ± 3． 11*
ALP(U /L) 137． 55 ± 2． 60 139． 40 ± 5． 09
LDH(U /L) 125． 24 ± 8． 46 128． 28 ± 12． 81
Cre(μmol /L) 96． 18 ± 5． 89 99． 97 ± 6． 09
Urea(mmol /L) 4． 40 ± 0． 45 4． 48 ± 0． 44
3 讨论
课题组前期采用系统溶剂提取法对新疆软紫草的药效研
941中药药理与临床 2015;31(1)
究中发现其石油醚提取部位对小鼠有一定的毒性作用。且新
疆软紫草石油醚提取物中主要成分为萘醌类化合物［9］，是新疆
软紫草主要的药效物质之一。然在药物临床应用与功能开发
过程中对可能有毒副作用的药效物质，了解其毒性作用的靶
点，阐明其作用机制，才能指导其更加充分合理的开发利用。急
性毒性实验和蓄积毒性实验是了解受试药物短期毒性强弱和
毒性反映以及反复多次将机体与受试药物接触一定时间后机
体的中毒作用，以及其代谢产物在机体内的贮留部位和药物的
毒作用、毒效应，找寻其可能作用靶点的第一步。因此本研究以
新疆软紫草石油醚提取物为受试药物，对其毒性进行初步研
究。实验结果表明，新疆软紫草石油醚提取物灌胃小鼠的 LD50
= 3． 48g /kg，20 天定期剂量递增蓄积毒性系数 K = 3． 76。新疆
软紫草石油醚提取物为中等蓄积毒性。实验结果初步评价了
新疆软紫草石油醚提取物的安全性，为以后的亚慢性毒性试
验、长期毒性实验和特殊毒性试验剂量的选择和临床应用、药
效学研究以及其他功能的开发利用提供了一定的实验依据。
小鼠一般生理情况观察中摄食量和体重是受试药物毒性
反映的重要指标。蓄积毒性实验结果显示，小鼠灌胃新疆软紫
草石油醚提取物 5 天后摄食量开始减少，随着灌胃累积剂量的
增加，摄食量与对照组相比有显著性差异。同时小鼠体重也明
显下降，表明新疆软紫草石油醚提取物可能引起小鼠食欲下
降，干扰了小鼠对食物的吸收或代谢，从而导致了体重下降。病
理学检查显示小鼠胃肠道脏器系数与对照组相比有显著性差
异，组织切片发现胃肠道有明显病变。表明新疆软紫草石油醚
提取物对小鼠胃肠道有一定毒性作用。
蓄积毒性实验结果显示肝脏是新疆软紫草毒性作用的一
个重要靶器官，新疆软紫草石油醚提取物可使小鼠血清 TP、
ALB和 A/G值明显降低，ALT、AST 水平明显升高，并导致肝脏
组织产生病理损伤，肝脏指数与对照组比有显著性差异，以上
均表明新疆软紫草石油醚提取物在小鼠体内蓄积具有一定肝
毒性。
蓄积毒性实验病理学检查中发现小鼠脾脏指数明显降低，
组织切片观察到一定病变，表明新疆软紫草石油醚提取物对免
疫系统也有一定影响。小鼠肾脏组织有轻微的病变，但肾脏指
数以及血清肾功能指标与对照组比较没有显著性差异。因此
新疆软紫草石油醚提取物对于免疫系统以及肾脏的影响机制
还有待进一步探究。
本研究结果表明新疆软紫草石油醚提取物对小鼠具有一
定毒性作用。而新疆软紫草石油醚提取物中主要含有极性较
低、脂溶性强的萘醌类化合物。因此有必要对其进行毒性筛选
从中找出新疆软紫草产生毒性的根源成分或组分，为今后新疆
软紫草石油醚提取物进行减毒提供参考，也为新疆软紫草安全
合理开发利用提供依据和保障。
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Toxic effects of Arnebia euchroma petroleum ether extract on mice and their target organs
Dai Bing1，Cao Luting2，Xiao Zizeng2，Wu Qinxuan2，Zeng Chengxi2，Yang Menglin2，Zhang Jiani2
(1 The No． 1 Affiliated Hospital，Hunan University of TCM，Changsha 410007;2 Hunan University of TCM，Changsha 410208)
Objective:To investigate the acute toxicity and cumulative toxicity of Arnebia euchroma petroleum ether extract effects in mice and dis-
cusses its main toxic target organs． Methods Acute toxicity:Using the impro ved karber method to determine the median lethal dose，The ex-
perimental group is divided into 6 groups and give different concentrations of Arnebia euchroma petroleum ether extract． The control group
give 4% twain -80 aque ous solution． Cumulative tox icity:By using dose escalation for medicine，the control group give 4% twain -80 aq
ueous solutio n． Usually the physiological information observed during the experiment and Histopathological cha nges． Detection of serum bio-
chemical indexes in mice． Ｒesults:The Arnebia euchroma petroleum ether extract sin gle lavage LD50 in mice = 3． 48 g /kg． Accumulation
toxicity experiment results show that the Arnebia euchroma petroleum ether extract medium accumulati on toxicity in mice and the accumula-
tion coefficient K = 3． 76，which can cause food intake and weight loss in mice． Liver，spleen and gastro intestinal tract in mi ce have differ-
ent deg rees of injury and disease． Conclusions:The toxic effects of Arnebia euchroma petroleum ether extract in mice in liver toxicity and
gastrointestinal tract toxicity． This suggests that the liver and gastrointestinal tract is probably the main toxic target organs．
Key words Arnebia euchroma;petroleum ether extract(新疆软紫草石油醚提取物) ;lethal dose 50;cumulative toxicity;target organ
051 中药药理与临床 2015;31(1)