全 文 ：有一定影响。但是因为黄曲霉毒素 B1是一种耐高温的毒素 ,一
般的炮制方法对其没有彻底破坏作用 ,因此炮制品中黄曲霉毒素
B1的仍有一定含量。
参考文献:
[ 1] 　中国预防医学科学院. 食品卫生国家标准 [ S] .北京:中国标准出
版社 , 1992:81.
[ 2 ] 　宓晓黎 ,成恒嵩 ,黄曲霉毒素分析方法研究进展 [ J] .粮食与饲料工
业 , 1994, 10:41.
[ 3 ] 　杜平华 ,杨晓峰.间接竞争酶联免疫吸附法分析检测中药中黄曲霉
毒素 B1的研究 [ J] .药物分析杂志 , 1995, 15(2):34.
收稿日期:2006-04-13;　修订日期:2007-03-22
基金 项 目:新 疆 自 治 区 高 校 科 研 计 划 科 学 研 究 重 点 项
目(No. XJEDU2004125)
作者简介:秦冬梅(1976-),女(汉族),江苏赣榆人 ,现任新疆石河子大学
药学院讲师 ,新疆医科大学药学院在读硕士研究生 ,主要从事中药民族药
的研究开发工作.
*通讯作者简介:买尔旦 马合木提(1965-),男(维吾尔族),新疆乌鲁木齐
人 ,现任新疆医科大学化学教研室讲师 ,主要从事中药民族药的研究开发
工作.
新疆软紫草中咖啡酸四聚体对照品的制备
秦冬梅 1, 2 , 买尔旦 马合木提1* , 贺金华 3
(1.新疆医科大学药学院 ,新疆 乌鲁木齐　830054;
　2.新疆石河子大学药学院 ,新疆 石河子　832000;
　3. 新疆维吾尔自治区药物研究所 ,新疆 乌鲁木齐　830002)
摘要:目的 从新疆软紫草的丙酮水提取物中分离制备了咖啡酸四聚体对照品。方法 经紫外光谱 、红外光谱 、核磁共振
和质谱确定结构。结果 其相关数据与文献一致 , 纯度为 98. 11 %。结论 符合中药化学对照品含量测定要求 , 可作为高
纯度咖啡酸四聚体化学对照品的制备分离方法。
关键词:新疆软紫草;　咖啡酸四聚体;　对照品
中图分类号:R283. 1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)08-1857-02
Preparation ofCaffeic Ac id Tetram ersReference Substance from A rnebia euchroma
Q IN Dong-mei1, 2 , MAI E r-dan1* , HE J in-hua3
(1. College of Pharmacy, X injiangMed ica lUniversity,Wurumuqi 830054, China;2. College of Pharmacy , Sh i-
heziUn iuersity, Sh ihezhi 830002, China;3. X injiang Institute ofMa teria Medica , Wurumuqi 830002, Ch ina)
Abstract:Objective To prepare refe rence substance for quality contro l o fArnebia euchrom a. Ca ffeic ac id te tram ers was ex trac-
ted and sepa ra ted from acetone w ater ex traction o f Arnebia echroma. M ethods Chem ical struc ture o f the ca ffeic ac id te trame rs
produc t was eluc ida ted by ultrav io let spectrom e try(UV), infrared spectro scopy( IR), nuc lea rm agne tic resonance(NMR) and m ass
spec trome try(M S). Resu lts The results w ere in ag reement w ith the reference. The pu rity o f the ca ffeic acid tetram ers produc twa s
98. 11%. Conclusion The m ethod m ee ts the refe rence substances of trad itional Chinese medic ines and can used to prepare and
pu rify the active constituen ts from Arnebia euchrom a.
Key words:Arnebia Euchroma;　Ca ffe ic acid tetram ers;Reference sub stance
　　新疆紫草 Arnebia euchroma为紫草科 Borag inaceae多年生草
本植物 , 以根入药 。紫草 , 始载于《神农本草经》, 列为中品。味
苦 , 性寒。有凉血 、活血 、解毒透疹之功效 [ 1] 。以往研究表明紫
草具有抗病原微生物 、抗炎及抗过敏 、抗生育 、解热 、抗肿瘤 、保
肝 、止血 、降血糖 、镇静和影响免疫功能等作用 [ 2] 。现代药理学
研究证明 , 紫草丙酮水提取物具有抗 H IV活性 [ 3] 。紫草主要含
两类有效成分:一为脂溶性的萘醌类 , 二为水溶性的多糖 、酚酸
类 [ 4] 。咖啡酸四聚体(caffe ic ac id te tram ers CAT)为紫草中重要
的水溶性有效成分之一 , 在《中国药典》中还未收载 , 据报道 , 咖
啡酸四聚体单钠和单钾盐具有明显的抗 H IV活性 [ 3] 。我们从紫
草中分离得到了咖啡酸四聚体 (结构式见图 4), 经紫外光谱
(UV)、红外光谱( IR)、核磁共振(NMR)和质谱 (M S)分析 , 其相
关数据与文献 [ 3]一致 , 纯度为 98. 11%, 符合中药化学对照品含
量测定要求 , 可作为紫草质量控制的化学对照品。分离制备紫草
水溶性活性成分对进一步揭示紫草药效的物质基础和开发新的
天然药物具有十分重要的意义。
1　仪器与试药
W aters液相色谱仪(包括 W 600输液泵 、W717自动进样器 、
W 2996PDA检测器和脱气装置);INOVA - 400核磁共振仪;Ag i-
lent LC M/ S DSL质谱仪;DK -S26型电热恒温水浴锅(上海精密
实验设备有限公司);RE - 52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂);MCL -GEL CH P20P(日本三菱公司);ODS -AC18(日本三
菱公司 );Sephadex LH - 20(日本三菱公司);反相薄层层析板
(M erch RP -F254S)。
实验用植物为新疆软紫草的干燥根 ,购于新疆参茸药业有限
公司(批号:20050102), 品种鉴定由新疆医科大学药学院生药 /
天然药物化学教研室帕丽达副教授完成。高效液相用甲醇 (色
谱纯),丙酮 、正己烷 、醋酸乙酯 、正丁醇 、甲醇 、甲酸为分析纯。
2　方法
2. 1　咖啡酸四聚体的分离和提取 采自新疆地区的新疆软紫草
干燥根 10 kg,粉碎 , 用正己烷回流提取 3次 , 合并 、回收正己烷 ,
得到沉红色粘稠物。将紫草正己烷提取后的药渣 , 用 70%丙酮
回流提取 3次 , 合并 、回收丙酮 ,得水溶液层。浓缩水溶液层后 ,
得到的提取物 , 依次用醋酸乙酯 、正丁醇萃取。剩余的水层浓缩 、
冷冻干燥 ,得紫黑色粘稠膏状物 240 g。将其依次用 M CL -GEL
CH P20P, Sephadex LH - 20上分离后 , 再在 ODS -AC18上 ,用不同
浓度的甲醇水溶液梯度洗脱 ,分离得黄褐色粉末 , 即为待测样品。
2. 2　纯度检查和含量测定
1857
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 8 时珍国医国药 2007年第 18卷第 8期
2. 2. 1　薄层色谱法 反相薄层层析板 (M erch RP - 18F254S 5 ×
7. 5)精制的 CAT用重蒸水溶解 , 用毛细管在反相薄层层析板点
样 , 自然晾干后 , 放入 3种展开系统中展开 。 3种展开系统按体
积配制 , 乙腈-水 (2∶8);乙腈-水 (3∶8);乙腈-甲醇-水 (1∶1∶
8),取出晾干后在 UV254 nm下观察斑点 , 供试品只有一个主斑
点 , 比移值 Rf分别为:0. 756, 0. 675, 0. 805。见图 1。
2. 2. 2　高效液相色谱法 色谱条件:色谱柱 W ater Symm a try C
18
150 cm ×4. 6 mm;流动相:甲醇-0. 14甲酸水(29∶71);检测波长
252 nm;流速:1 m l /m in;柱温:40℃。
精密称取咖啡酸四聚体 , 用甲醇配成浓度为 0. 22 mg /m l的
样品溶液 , 均进样 10 μl,样品显示为单峰 , 用归一化法计算含量
为 98. 11%(保留时间为 14. 656 m in)。见图 2。
乙腈-水(2∶8)　　　乙腈-水(3∶ 8)　　乙腈-甲醇-水(1∶1∶ 8)
图 1　咖啡酸四聚体三种展开系统 TLC鉴别
图 2　咖啡酸四聚体的纯度测定色谱图
2. 2. 3　二极管阵列检测器(PDA)纯度检查法 该实验所用仪器
为 W aters液相色谱仪 , W2996PDA检测器。在 “ 2. 2. 2”项中色谱
条件下 , 200 ～ 400 nm用 PDA检测器记录色谱图 ,检查主成分峰
的纯度。见图 3。
图 3　咖啡酸四聚体的三维光谱图
3　结果
3. 1　对照品的纯度检查 色谱图见图 2, 结果表明 , 在供试品溶
液的色谱图中 , 除溶剂峰外 , 各杂质峰面积总和小于样品溶液主
峰的面积(0. 5%)。二极管阵列检测器的测定结果表明:主成分
峰的纯度因子为 985. 985;五点光谱图完全重合 , 表明主成分峰
为单一物质峰。
3. 2　结构确认 [ 3] 定性鉴别 样品与三氯化铁乙醇溶液显色 ,阳
性 , 提示结构中有酚羟基 ,溴钾酚蓝乙醇液原位薄层显色 ,结果提
示化合物为有机酸的盐。
紫外光谱 样品的水溶液在 252nm处有最大吸收。
IR光谱中 σm axKB r 3388 cm - 1(OH), 1680 cm - 1(H -C =O),
1588 cm - 1(C=C)。
核磁共振 1H NMR见表 1。核磁共振 13C NMR见表 2。
质谱 分子离子峰(m /z717[M -H] - 1), 与分子式 C36H30O 16
相符。
以上 UV , IR, NM R, MS光谱数据与文献报道值一致 , 确定该
样品为咖啡酸四聚体 ,其纯度符合国家中药对照品纯度要求 。
表 1　核磁共振 1H NMR(M e2CO - d6+D2O), δppm
7. 64 (1H , s, H - 4 ) 6. 92 (1H , s, H -5 )
6. 88 (1H , s, H - 2′″) 6. 76 (1H , s, H -2″)
6. 72 (1H , d, J=8, H - 5′) 6. 69 (1H , s, H - 8)
6. 60 (1H , s, H - 2′) 6. 59 (1H , d, J=8, H - 6′″)
6. 48 (1H , d, J=8, H - 6″) 6. 39 (1H , d, J=8, H - 6′)
4. 98 (1H , dd, H - 8′″) 4. 82 (1H , dd, H - 8″)
4. 56 (1H , s, H - 1) 4. 02 (1H , s, H - 2)
3. 09 (1H , d, H - 7′″) 2. 92 (1H , q, H - 7′″)
3. 00 (1H , d, H - 7″) 2. 83 (1H , q, H - 7″)
表 2　核磁共振 13C NM R(Me2CO - d6+D2O), δppm
44. 9(C - 1) 47. 0(C - 2) 131. 4(C -3)
140. 2(C - 4) 117. 2(C - 5) 117. 2(C -8)
168. 4(C - 9, 10) 121. 6(C - 1′) 115. 5(C - 2′),
143. 6(C - 3′) 144. 9(C - 4′) 117. 2(C - 5′)
119. 7(C - 6′) 136. 2(C - 11) 124. 0(C - 12)
121. 9(C - 6″) 37. 6(C - 7″) 78. 2(C - 8″)
122. 0(C -6′″) 37. 9(C - 7′″) 78(C - 8′″)
图 4　咖啡酸四聚体的化学结构
4　讨论
作为新疆紫草中的水溶性成分之一 ,咖啡酸四聚体的提取 、
分离 、纯化及物理化学常数的测定 , 未见国内文献报道。本实验
从紫草的丙酮水提取物中制备咖啡酸四聚体 , 纯度较高 , 方法成
熟 , 可作为常规的制备方法。同时由于中药所含成分复杂 , 增加
了提取 、分离纯化的难度 , 尤其是水溶性成分的分离 ,有时结果的
重复性较差。可采用适当的梯度洗脱方法可以解决。
参考文献:
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1858
时珍国医国药 2007年第 18卷第 8期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 8