全 文 ：高效液相色谱法测定新疆软紫草中咖啡酸四聚体的含量
贺金华* ,买尔旦 马合木提
(新疆医科大学药学院药剂教研室 ,新疆乌鲁木齐 830054)
摘要:目的:建立高效液相色谱法(H PLC)测定新疆软紫草中咖啡酸四聚体含量的方法。 方法:采用 YMC
ODS-A C-18 色谱柱(4. 6 mm×250 mm , 10 μm),流动相:甲醇∶水∶甲酸(29∶71∶0. 1), 流速:1. 0 ml /min ,检测
波长:252 nm ,柱温:40℃。结果:咖啡酸四聚体进样量在 0. 5 ～ 3. 5μg 范围内与峰面积线性关系良好 , 相关系数 r
=0. 999 5。平均回收率为 101. 8%, RSD为 2. 46%( n =9)。结论:高效液相色谱法适用于新疆软紫草中咖啡酸
四聚体含量的测定。
关键词:新疆软紫草;咖啡酸四聚体;高效液相色谱法
中图分类号:Q949. 777. 4;R962;R927. 2　　文献标识码:B　　文章编号:1009-5551(2005)05-0429-02
HPLC determination of caffeic acid tetramer in Arnebia euchroma
HE Jin-hua , Maierdan
(College of Pharmarcy , X inj iang Med ical Universi ty ,Urumqi 830054 , China)
Abstract:Objective:To establish high-perfermance liguid chromatog raphy (HPLC) method of determing
caffeic acid tet ramer in Arnebia euchroma(Roy le) Johnston. Methods:YMC ODS-A C-18 co lumn(4. 6×
250 mm , 10 μm)was eluted using MeOH-H2O-HCO 2H(29∶71∶0. 1)as the mobile phase at the column
temperature 40℃. The flow rate was 1m l /min and the determinat ion w aveleng th w as 252 nm . Results:
The method w as proved to be linear in the range f rom 0. 5 ～ 3. 5 μg w ith a correlation coefficient of
0. 999 5. The average recovery w as 101. 8%w ith RSD of 2. 46%( n =9). Conclusion:The method can be
applied to the de termination o f caf feic acid tet ramer in A rnebia euchroma(Roy le) Johnston. .
Key words:Arnebia euchroma;caffeic acid tet ramer;high pe rfermanoe liguid chromatog raphy (HPLC)
　　紫草是我国民间常用的中草药 ,以根入药 。中
国药典收载的紫草有 3 个品种 ,分别是紫草科植物
紫草(Lithospermum ery throrhizon Sieb. et zucc) 、
新疆紫草 (Arnebia euchroma , pahnst) 、内蒙紫草
(Arnebia g ut lata B unge) 。新疆软紫草 [ Arnebia
euchroma(Roy le) Johnston] 别名新疆紫草 、新藏假
紫草 ,其化学成分与硬紫草极为相似 ,紫草素及其衍
生物的含量比硬紫草高出 8倍 ,被列为正品 ,在传统
中药处方中用做抗炎 、退热和抗菌药。临床常用于
治疗 Ⅰ 、Ⅱ度烧伤 、疱疹 、湿疹 、宫颈糜烂及宫颈病变
出血 、婴儿尿布皮炎 、肝炎等。近年来 ,国内外文献
报道新疆软紫草的含水丙酮提取物具有抗艾滋病病
毒的作用[ 1 ～ 4] 。本文采用高效液相色谱法(HPLC)
测定了紫草水溶性有效成分之一的咖啡酸四聚体的
含量 ,现报道如下。
1　仪器和试药
1. 1　仪器　Waters 2690高效液相色谱仪 ,Waters
2487紫外检测器 , M illennium 32色谱工作站(美国
Waters), BS110S 电子天平(Sartorius)。
1. 2　试药　实验用植物为新疆生长的新疆软紫草
的干燥根 ,品种由新疆医科大学药学院生药教研室
鉴定。咖啡酸四聚体对照品由新疆医科大学药学院
天然药化教研室从新疆软紫草根中提取分离得到 ,
其1H-NMR 、13 C-NMR 、UV 、IR和 ESI-MS 数据与
文献[ 4 ,5]对照一致。甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,
甲酸为分析纯。
2　方法和结果
2. 1 　色谱条件 　色谱柱:YMC ODS-AC-18 柱
(4. 6 mm×250 mm , 10μm);流动相:甲醇:水:甲酸
(29∶71∶0. 1);流速:1. 0 ml /m in;检测波长:252
nm;柱温:40℃。
2. 2　对照品溶液的制备　精密称取对照品 25 mg ,
用流动相定容至 5 m l ,摇匀。精密吸取 1 ml 置 10
m l容量瓶中 ,加流动相至刻度 ,摇匀备用 。
429新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG M EDICAL UNIVERSITY　2005 May , 28(5)
* 作者简介:贺金华(1968 -),女 ,主管药师 ,在读研究生 ,研究方向:化学成分的分离鉴定。
2. 3　样品溶液的制备　精密称取紫草根粉末 5 g ,
置100 ml的三角烧杯中 ,加蒸馏水 50 ml ,回流提取
3 h ,静置至室温 。用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤 ,即得
供试品溶液。
2. 4　标准曲线的制备　分别取对照品溶液 1 、2 、3 、
4 、5 、6 、7 μl ,在上述色谱条件下进样 ,记录色谱图 。
以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲
线 ,得到回归方程:A =58 4826. 5C - 4 0071. 71 ,相
关系数 r =0. 999 5。结果表明 ,咖啡酸四聚体进样
量在 0. 5 ～ 3. 5 μg 范围内与峰面积线性关系良好。
2. 5　色谱行为和系统适用性　分别取对照品溶液
和样品溶液各 5 μl进样 ,记录色谱图(图 1)。咖啡
酸四聚体的保留时间(tR)为 22. 098 min ,样品溶液
和对照品溶液的色谱图中 ,咖啡酸四聚体 tR 一致;
以咖啡酸四聚体为标准 ,计算色谱柱的理论塔板数
为 10821 ,咖啡酸四聚体的峰和相邻峰分离良好 ,说
明药材中的其他成分不干扰咖啡酸四聚体的测定。
　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　A　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　B
图 1　咖啡酸四聚体色谱图
(A:对照品溶液　　B:样品溶液)
2. 6　回收率测定　精密吸取已知含量的样品溶液3.
5 ml ,共9份 ,置5 ml容量瓶中 ,分别定量加入咖啡酸
四聚体对照品溶液适量各 3份 ,用水定容至刻度 。按
样品测定方法进行测定 ,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果
序号 对照品加入量(μg) 对照品检测量(μg) 回收率(%)
平均回收率
( x ±s , %) RSD(%)
1 200. 0 200. 3 100. 2
2 200. 0 197. 3 98. 7
3 200. 0 196. 2 98. 1
4 400. 0 405. 8 101. 5
5 400. 0 404. 5 101. 1 101. 8±2. 51 2. 46
6 400. 0 414. 1 103. 5
7 600. 0 631. 4 105. 2
8 600. 0 626. 4 104. 4
9 600. 0 620. 3 103. 4
2. 7　精密度试验　取同一份对照品溶液 5μl ,在上
述色谱条件下 ,连续进样 5次 ,测定峰面积。峰面积
RSD为 1. 17%。
2. 8　稳定性试验　精密吸取同一样品溶液 10 μl ,
分别在 0 、2 、4 、6 、8 、10 h进样 ,测得样品中咖啡酸四
聚体的峰面积值 RSD 为 1. 06%;吸取同一样品溶
液 10 μl ,在 24 、48 、72 、96 h 进样测定 ,样品中咖啡
酸四聚体的峰面积值的 RSD为 0. 35%。
2. 9　样品含量测定　精密称取新疆软紫草药材粉
末 3批 ,按样品处理方法制备样品溶液 ,精密吸取
10 μl ,注入液相色谱仪 ,记录色谱图 ,测定峰面积 ,
计算得出药材中咖啡酸四聚体的含量分别为
0. 259%、0. 266%和 0. 263%。
3　结论
3. 1　本实验比较了不同比例的流动相的色谱行为
和不同提取时间对咖啡酸四聚体提取效率的影响 ,
结果以甲醇∶水∶甲酸(29∶71∶0. 1)作为流动相
分离效果最佳 ,咖啡酸四聚体与其他成分达到了基
线分离;提取 3 h提取效率最高 ,且以 0. 45 μm 微孔
滤膜过滤后的提取液稳定性为最好。
3. 2　本实验建立的咖啡酸四聚体的含量测定方法
可用于测定新疆软紫草中咖啡酸四聚体的含量 。
参考文献:
[ 1] 　王文杰 ,白金叶 ,刘大培 ,等. 紫草素抗炎及对白三烯 B4生物
合成的抑制作用[ J] .药学学报 , 1994 , 29(3):161-165.
[ 2] 　吴寿金 ,赵泰 ,秦永祺.现代中草药成分化学[ M] .北京:中国医
药科技出版社 , 2002. 146-156.
[ 3] 　高菊红.紫草的资源 、化学 、药理和临床研究情况[ J] .中草药 ,
1986 , 17(7):30-32.
[ 4] 　Kashiw ada Y , Nishizaw a M , yamaagishi T , et al . An ti-AIDS
agents , 18. S odium and potassium salt s of caf feic acid tet ram-
ers f rom Arnebia eu chroma as ant i-HIV agents[ J] . J Nat Prod
, 1995 , 58(3):392-400.
[ 5] 　Makoto N , Masashi T , Koji H . T w o caf feic acid tet ram ers hav-
ing enantiomeric phyenldronaphthalene m oiet ies f rom Macroto-
mia euch rom a[ J] . Phytochemis try , 1990 , 29(8):2645-2649.
[ 收稿日期:2004-12-20]
430 新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG M EDICAL UNIVERSITY　2005 May , 28(5)