全 文 ：新疆雪莲的体细胞胚胎发生及植株再生
贾莉芳1 ,2 , 王晓军1 , 赵民安1 (1.中国科学院新疆理化技术研究所 ,新疆乌鲁木齐 830011;2.中国科学院研究生院 ,北京 100049)
摘要 通过对新疆雪莲进行胚性愈伤诱导培养(MS+2 , 4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.05 mg/L), 体细胞胚胎发生诱导培养(MS+2 , 4-D 0.1
mg/L),体细胞胚胎分化培养(MS+PEG 25 g/ L),体细胞胚胎萌发(MS+GA3 5 mg/L)和壮苗培养(MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3 mg/L),首
次通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲的植株再生 ,生根率 100%,成活率达 60%,为其大规模人工栽培奠定了基础。
关键词 新疆雪莲;体细胞胚胎发生;植株再生
中图分类号 Q945.6+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)15-04509-01
Somatic Cell Embryogenesis and Plantlet Regeneration of Saussurea Involucrate
JIA Li-fang et al (Xinjiang Institute of Physics and Chemistry , Chinese Academy of Sciences , Urumqi , Xinjiang 830011)
Abstract The Saussurea involucrate embryogenic induction culture(MS+2 , 4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.05 mg/L)was made , including somatic cell em-
bryogenesis induction culture(MS+2 , 4-D 0.1 mg/L), somatic cell embryo differentiation culture(MS+PEG 25 g/ L), somatic cell embryo germination
(MS+GA3 5 mg/L)and lustihood seedling culture(MS+NAA0.1 mg/ l+6-BA 0.3mg/ L)and the plantlet regenerationwas realized through somatic cell
embryogenesis way , with rooting rate of 100% and survival rate of 60%, which provided a base for manual culture of Saussurea involucrate cosmically.
Key words Saussurea involucrate;Somatic cell embryogenesis;Plant regeneration
新疆雪莲为菊科凤毛菊属多年生草本药用植物 ,在国内
仅大面积分布于新疆 ,是我国中药 、民族药中的珍稀名贵药
材。可用于治疗风湿疼痛症 、防治心血管疾病 、延缓衰老 、抑
制癌细胞增生等。此外 ,它还是一种具有独特香味的野生香
料。但近年来在利益的驱动下 ,人为大规模掠夺式的采挖 ,
使得野生雪莲数量急剧下降;加上雪莲种子自然萌发率低 ,
生长环境残酷 ,人工栽培困难 ,故被列为国家三级濒危物种
而受到保护 。目前 ,国内已有新疆雪莲通过器官发生途径实
现植株再生的报道[ 1] ,而新疆雪莲通过体细胞胚发生途径实
现植株再生则尚未见报道 。笔者首次通过体胚发生途径实
现了新疆雪莲的植株再生 ,为其大规模人工栽培奠定了
基础。
1 培养材料与条件
1.1 培养材料 新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kir.)
的成熟种子 。
1.2 培养条件 ①胚性愈伤诱导培养基:MS +2 , 4-D 0.5
mg/L+6-BA 0.05 mg/L;②体细胞胚胎发生诱导培养基:MS+
2 ,4-D 0.1 mg/L;③体细胞胚胎分化培养基:MS+PEG 25g/L;
④体细胞胚胎萌发培养基:MS+GA3 5 mg/L;⑤壮苗培养基:
MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3 mg/L。以上培养基蔗糖含量
为 3%, pH 值 5.85 。①、④琼脂含量为 0.6%, ②、③为液体培
养基。固体培养条件:光强 20 ～ 40μmol/(m2·s),光照时间 12
h/d ,温度(25±1)℃。液体培养条件:室内散射光 8 ～ 10 h/d ,
摇床转速 120 r/min ,温度(25±1)℃。
2 生长与分化情况
2.1 无菌苗的获得 将种子用流水冲洗 1 h后 ,在无菌条件
下先用 75%酒精浸泡 50 s ,无菌水冲洗 3次 ,再用 0.2%的升
汞浸泡 15 min ,无菌水冲洗 5次 ,消毒滤纸吸干表面水分 ,接
基金项目 中国科学院西部行动高新技术项目(KGCX2-SW-506)。
作者简介 贾莉芳(1982-),女 ,山西神池人 ,硕士研究生 ,研究方向:植
物细胞工程。
收稿日期 2007-01-30
种在不含激素的MS培养基上。约 1周后种子开始萌动 ,2周
后将其转入胚性愈伤诱导培养基。
2.2 胚性愈伤组织的诱导 取上述无菌苗 ,将其子叶 、下胚
轴切成 0.5～ 1 cm 的小段 ,接种在培养基①上 ,2周后可见黄
绿色 、颗粒状 、质地松散的胚性愈伤组织形成 , 1个月后即可
转入体细胞胚诱导培养基中。
2.3 体细胞胚的诱导及分化 挑选胚性愈伤组织(图 1-A)
接种于液体培养基②中 ,接种量 3%,继代周期(7±2)d。2周
后愈伤组织表面即有大量球形胚(图 1-B)产生 ,此时 ,将培养
物接种于培养基③中 ,以促进体细胞胚的分化和生长。1个
月后 ,体细胞胚一端首先长出一条主根 ,接着另一端有绿色
芽点长出 ,此为体细胞胚发育的子叶胚阶段 。
注:A.胚性愈伤组织;B.球形胚(箭头所指);
C.具备根和芽的完整植株。
图 1 新疆雪莲体细胞胚胎发生的形态学观察
2.4 体细胞胚的萌发及植株再生 将发育成熟的体细胞胚
转接于培养基④中 ,2 周后即可得到发育完整的植株(图 1-
C),生根率 100%。待小苗长至 3 ～ 4 cm 长时转接于培养基
⑤上 ,进行壮苗培养。15 d继代培养一次。待小苗长出 3 ～ 4
条不定根 ,且其长度达到 1～ 2 cm取出组培苗 ,小心洗去根部
培养基 ,移栽到盛有无菌蛭石的小瓶中炼苗 。初期加盖保鲜
膜保持适宜湿度 ,1周后揭去薄膜 ,待新根长出后移入温室大
棚栽培 ,成活率达 60%。
参考文献
[ 1] 杨林,邹建华 ,刘庆华,等.新疆雪莲的组织培养及植株再生[ J] .植物
生理学通讯, 2005 ,41(4):553.
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2007 , 35(15):4509 责任编辑 罗芸 责任校对 李洪
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.15.058