全 文 ：第 25卷第 6 期
20 09 年 1 1月
湖南中医杂志 Vo l . 2 5
H N U AN JON U R LTO F R A A DIT I ON ALH C INE SE ME DINEC I N
o v
N
o
.
6
0 209 0 1 5
H PL C法测定复方矮地茶片中岩白菜素的含量
湖南中医药大学第二附属医院 ( 4 10 00 5 )王 青
关键词 岩白菜素 ;分析 ;色谱法 ,高压液相 ;复方矮地茶片
复方矮地茶片功能清热解毒 , 化痰止咳 ,用于肺热咳
嗽及慢性气管炎等症 ,其中矮地茶 为其君药。 矮地茶系紫
金牛科植物紫金牛 Adr is i a j a p o n ie a ( H o m s t . ) B l . 的干燥
全草 , 属于常用中药 ,具有化痰止咳 、利湿活血等功能 , 可
用于新久咳嗽 、痰中带血 、湿热黄疽 、跌打损伤 。 本文以矮
地茶中有效成份岩白菜素为考察指标 ,首次建立了复方矮
地茶片的含量测定方法 ,并对其进行了方法学研究 , 现介
绍如下 。
l 仪器与试药
1
.
1 仪器 A g i le n t l 10 0 高效液相色谱仪 ; A E 24 0 型电子天
平 (瑞士 M e t t l e T o l e d。 ) ; QC 1 02 6 0 D 型超声波清洗器 。
1
.
2 试 药 对照品 : 岩白菜素对 照品 ( 批号 : 11 153 2 -
2 0 0 2 02
, 由中国药品生物制品检定所提供 ,供含量测定用 ) ;
甲醇为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其余试剂均为分析纯 。
方法与结果
色谱条件 D ia m o n s il C I: 色谱柱 ( 4 . 6 m o x 25 om m ,
2
5林m ) , 以甲醇 一水 ( 23 : 77) 为流动相 , 流速 1 . o m F m in , 柱
温 40 ℃ ,检测波长为 275 n m , 理论板数按岩白菜素计算不得
少于 15 00 。
2
,
2 对照 品 溶液 的 制备 精密称 取岩 白菜素对照 品
12
.
53 m g置于 25 m l 量瓶 中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇
匀 ,精密量取 s d , 置 10 0 inl 量瓶中 , 以 甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得 25 . 06 卜酬ml 的对照品溶液 。
2
.
3 供试品溶液的制备 取市售复方矮地茶片 20 片 ,精密
性检验采用 q 检验 , 所有数据均用软件 S PS 10 . 0 of r w in -
d
o w s (
o n e 一 w a y AN O V A )进行处理 。
3 实验结果
3
.
1 S Z RT I 对 E P M 小鼠行为学 O E% 、 O T % 和 ( OE + C E )的
影响 (见表 2)
表 2 SZ RT 对 E PM 小鼠 OE % 、 ( ) T叹和 ( O E + C E )的影响 。 士 s )
组别 剂量 (八 g ) n OE% 0T % OE + C E(次)
空白 一 19 10 . 11士 11. 79 6 . 05 士 10 . 2 1 16 .田 土 2 . 7
DZ P Zgfn 加 32
.
62 士 15
.
85
水 市
35
.
7 8 士 20
.
27 ” 卜 20
.
85 士 6
.
10
SZ RT{ ZD g 18 20
.
31士 12
. 册 率 2 . 46 士 16 . 75 , 15 15 士 3 . 86
注 :与 空白对照组比较 , * 尸 < 0 . 05 , * * 尸 < 0 . 01
3
.
2 SZ R T l l 对 E P M 大 鼠行为学 O E% 、 O T% 和 ( O E + C E )
的影响 (见表 3)
表 3 zS RT ll 对 E PM 大鼠 OE % 、 m 块 和 ( O E 十 C)E 的影响伍土 、 )
组别 剂量( / kg ) n OE% 0T % o E + e E (次)
空白 一 12 37 . 84 土8 . 18 45 . 13 土 8. 3 5 21.田 士3 . 93
DZP 1
1咫 13 54 . 74 士 l2 . 8() ` ’ 62 . 19 土 13. 39 ’ ` 21. 7 士5 . 39
SZRT ll 7 5 9 12 铭 . 01土 7 . 4 1 水 55 . 25 士 11. 8 1 * 2 . 83 士3 . 79
注 : 与空白对照组比较 , * 尸 < 0 . 05 , * * 尸 < 0 . 01
4 讨 论
SZ R T 所含成份复杂 ,其中含有相同类别的成份为挥发
油 、多糖类 、皂昔及昔元类 、黄酮类 、脂肪油类等 , 且这些成份
含量较多 ; 同时结合药理 , 有中枢调节作用的成份为皂昔 、
黄酮类等 , 而且多糖具有免疫调节作用 , 上述成份可能在
S Z RT 抗焦虑中发挥一定作用 。 基于以上认识 , 结合实验室
现有的分离条件和可操作性 , 制定了 SZ R T 的分离流程 。 分
离前 , 对水煎液进行了多糖 、 皂昔及普元 、黄酮等几类主要
成份的检识 , 结果呈阳性 。 分离后 , 对各部分的检识表明 , 这
几类主要成份仍然存在 。 这在一定程度 上提示分离后的各
部分合起来仍基本代表全方 。 高架十字迷宫 ( E PM )是抗焦
虑研究 中应用最广泛 的模 型之一 , 开放 臂进人 次数 比
( O E% )和开放臂停留时间比 ( O T% )是该模型测试中的经
典指标 ,反映的是动物趋近— 规避冲突的结果 , 一与焦虑程度直接相关 。 通常抗焦虑药只增加动物对开放臂的探索 , 使
O E% 和 O T% 上升 。 开放臂和封闭臂总的进入次数 ( O E 十
C E )反映了动物总的运动能力 , 可用来观察药物有无镇静作
用及镇静 强度 3[ 一 4」。 本实验 观察到组 分配方 s z R IT 和
SZ R lT l均能显著升高行为学指标 O E% 、 O T% ,但并不影响
开放臂和封闭臂总的进人次数 ,表明该两个配方均有显著
地抗焦虑作用而对小鼠或大鼠的运动能力无显著影响 ( 即
无镇静作用 ) 。 zS RT I和 zS R T l l均为涵括全部组份的配方 ,
且小鼠和大鼠试验结果互参 , 提示在 zS RT 水煎液提取分离
过程中 , 原方中抗焦虑作用的有效部份没有明显丢失 , 本研
究所拟定的酸枣仁汤的提取分离方案基本是合理的 , 为进
一步探讨 SZ R T 发挥抗焦虑作用的物质奠定了基础 。
参考文献
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19 87
,
9 2 ( 2 ) : 18 0 一 18 5
.
( 收稿 日期 : 20 0 9 一 1 1 一 03 )
1 06湖南中医杂志 20 09年第 5 2卷第 6期 (总第 1 48期 )
称定 , 研细 , 取约 1 9 , 置 10 0 ml 量枢中 , 加甲醇 50 nlI , 超声处
理 ( 30 w 、 50 K H z )40 im n , 放冷 , 以 甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 滤
过 , 取续滤液 , 即得 。
2
.
4 阴性样品溶液的制备 除去矮地茶 , 按照复方矮地茶
片生产工艺制成阴性对照样品 , 按供试品溶液的制备方法
制成矮地茶阻胜对照溶液 。
2
.
5 方法的专属性考察 在上述的色谱条件下 ,精密吸取
岩白菜素对照品溶液 、 供试品溶液 、 阴性样品溶液各 10闪 ,
注人液相色谱仪中 ,得 H P L C 图 ,结果显示阴性对照无干扰。
理论塔板数不低于 巧o 。 其结果见图 1 一 3 。
图 L 对照品 H PI 尤 色谱图
含量测定方法学考察
图 2 样品 H P L C 色谱图 图 3 阴性样品 H P L C 色谱图
从表 1 的结果可看出 ,本方法加样回收率较高。
2
.
5
.
1 线性关 系考察 精密吸取 2 、 5 、 8 、 10 、 巧 、 20 闪 的岩
白菜素对照品溶液 ,进样测定 , 以进样量为横坐标 ,峰面积
为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 其 回归方程为 y = 256 . Z x +
87 27
.
2
, r = 0
.
99 97
。 其结果表明岩白菜素进样量在 0 . 05 0 1
一 住 50 12 林g 之间与峰面积呈良好线性关系 。
2
.
5
.
2 精密度试验 取同一份对照品溶液 , 重复进样 6 次 ,
岩白菜素主峰面积的 R SD 为 0 . 37 % 。 其结果表明本方法精
密度良好 。
2
.
5
.
3 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液 ,分别于 0 、 2 、
4
、
8
、
12
、
24 h 后进样 ,计算岩白菜素主峰面积的 RS D ,结果
RSD 为 0 . 7 4% 。 其结果表明供试品溶液在 2 4 h 内稳定。
2
.
5
.
4 重复性试验 取同一批样品 , 共 6 份 , 按供试品溶液
制备方法制备 ,精密吸取供试品溶液和对照品溶液各 or 闪 ,
注人液相色谱仪 , 测定 ,并根据峰面积计算复方矮地茶片中
岩白菜素的含量 。 结果编号为 1 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 的含量分别为
1
.
6 12m g/ 片 、 l . 60 3 m扩片 、 l . 62 l m g/ 片 、 l . 6 0 7 m g/ 片 、
1 59 l m岁片 、 l . 627 m扩片 , 其平均含量为 l . 6 10 m g/ 片 , R SD
为0 . 81 % 。 其结果表明本方法重复性 良好 。
2
.
5
.
5 加样回收试验 精密称取本品粉末约 0 . 5 9 (共 6
份 ) ,分别精密加人浓度为 5 01 . 2 林酬 ml 对照品溶液 2 . s inl ,
按供试品溶液制备项下的方法制备 , 按上述色谱条件测定
岩白菜素的含量 , 并计算回收率与 R s D ,其结果见表 ] 。
表 1 加样回收试验结果
取样量
( g )
0
.
5 10 1
0
.
5047
0
.
5012
0
.
5054
0
.
5 190
0
.
5 113
样品中岩白
菜素量 ( m g )
对照品加
人量 ( m g )
实际测得量
( m g )
回收率
( % )
98
.
3
99
.
2
9 8
.
1
99
.
3
1(洲〕. 0
99
.
4
2
.
6 样品 的测 定 取市售复方矮地茶片 3 批样品 ( 批号
为 : 0 5 05 3 、 0 50 5以 、 05 050 5 ) , 按对照品溶液和供试 品溶液制
备项下的方法配制对照品溶液和供试品溶液 , 按上述色谱
条件测定 ,记录色谱图 , 以外标法计算含量 。 其结果见表 2 。
表 2 样品的测定 结果
批号 含量 ( m岁片 ) 平均含量 ( m酬片 )
0 8080 3 1
.
6 1 2
1
.
607
1
.
60 3
0 8080 4 1
.
624
1
.
62 1
1
.
6 18
0 808 05 1
.
62 1
1
.
6 1 5
1
.
60 9
3 讨 论
3
.
1 复方矮地茶片标准收载于卫生部颁药品标准 。 该标
准暂无含 {,墩 l]金项 , 经查 目前尚无本品含量测定方法的报
道 。 本文首次建 亿了复方矮地茶片的 H PL C 含量测定方
法 ,该法专属性高 , 操作简便 , 能更好地控制本 品的内在
质量 。
3
.
2 笔者曾分别采用 D ia m o n s il C , 。 ( 4 . 6 m m x 25 o m m , 5 林m )
色谱柱 、 A g il e n t T C C ,: ( 4 . 6 m m x 250 m m , 5林m ) 色谱柱和
P h e n o m e n e x L u n a e : : (4
.
6m m x 25 0 m m
,
5 卜m ) 色谱柱进行试
验 ,结果各色谱柱分离主峰的理论板数均大于 巧 o , 主峰相
邻杂质峰的分离度均大于 1 . 5 , 且峰型对称 ,符合要求 。 故
本法适用于以上三类 C , 8色谱柱 ,适用范围较广 。
3
.
3 本文仅对复方矮地茶片中矮地茶的含量测定方法进行
了探讨 , 为了更好地控制其质量 ,对于其他成份如野菊花 、批
把叶 、 甘草的含量测定方法则有待进一步研究。
(收稿 日期 : 20() 9 一 10 一 18 )
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.
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注 :平均回收率为 9 . 0 % ; RS D 为 0 . 72 %