全 文 ：新疆紫草石油醚提取物
对小鼠生殖组织形态及其脏器指数的影响
〔摘要〕 目的 观察新疆紫草石油醚提取物对小鼠生殖组织形态学及其脏器指数的蓄积毒性影响。方法 采用渗漉提取法制备
新疆紫草石油醚提取物，以其为受试物。 选用昆明种小鼠 40只，雌雄各半，按随机数字表法分为对照组和试验组，每组 20只进行
蓄积毒性试验。 试验组给以新疆紫草石油醚提取物，对照组给以 4%吐温-80水溶液。 当小鼠死亡过半后停止试验，计算小鼠生殖
组织脏器指数，光镜下观察小鼠生殖组织形态变化。 结果 新疆紫草在小鼠体内的蓄积毒性为中等蓄积，小鼠累积灌胃 13.08 g/kg
新疆紫草石油醚提取物后试验组雄性小鼠睾丸指数与对照组比没有显著性差异，组织形态观察未发生病变。试验组雌性小鼠卵巢
指数和子宫指数降低，但其组织形态未发生病理性损伤。 结论 新疆紫草石油醚提取物对小鼠生殖组织形态以及雄性小鼠睾丸指
数均无明显影响，但能降低雌性小鼠卵巢指数和子宫指数。
〔关键词〕 新疆紫草；石油醚提取物；蓄积毒性试验；生殖组织形态；脏器指数
〔中图分类号〕R285.5 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.03.005.016.03
Effect of Petroleum Ether Extract from Arnebia euchrom on Reproductive Tissue Morphology
and Viscera Index in Mice
DAI Bing1, CAO Luting2, XIAO Zizeng2*, WU Qinxuan2, ZENG Chengxi2, YANG Menglin2, ZHANG Jiani2
（1. The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410007, China；
2. Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410208, China)
〔Abstract〕 Objective To observe the effect of Arnebia euchroma petroleum ether extract on cumulative toxicity of
reproductive tissue morphology and viscera index in mice. Methods The Arnebia euchroma petroleum ether extract as the
sample was prepared by percolation extracting method. 60 Kunming mice with half males and half female were
randomly divided into the control group and experimental group, 20 mice in each group were for the cumulative toxicity test.
The experimental group was treated with Arnebia euchroma petroleum ether extract, and the control group with 4% Tween-80
water solution. The experiment was stopped when the mice died more than half, then reproductive tissue viscera index was
evaluated and the reproductive tissue morphology in mice was observed by light microscope. Results The Arnebia euchroma
petroleum ether extract showed moderate accumulation toxicity in mice. When the mice cumulative lavage 13.10 g/kg Arnebia
euchroma petroleum ether extract, the testis index of male mice in the experimental group had no significant difference with
the control group, and histopathologic morphology of lesions did not occur. The ovary and uterus index of female mice in the
experimental group were decreased, but there was no pathological damage in its organization form. Conclusion The
accumulation of Arnebia euchroma petroleum ether extract in mice had no obvious effect on reproductive tissue morphology
and male testis index in mice, but it could reduce the ovary and uterus indexes in female mice.
〔Keywords〕 Arnebia euchroma； petroleum ether extract； accumulation toxicity test; reproductive tissue morphology；
viscera index
戴 冰 1，曹璐婷 2，肖子曾 2*，吴沁璇 2，曾呈茜 2，杨梦琳 2，张嘉倪 2
（1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）
〔收稿日期〕2014－11－26
〔基金项目〕湖南省自然科学基金资助项目（13JJ3096）；湖南省科学技术厅资助项目（2010FJ4091）；湖南省高校创新平台开放基金资助项目
（11K046）；湖南省中医药管理局资助项目（201460）。
〔作者简介〕戴 冰，女，主任药师，博士研究生导师，主要从事中药药理学及药效物质基础研究。
〔通讯作者〕* 肖子曾，男，教授，E-mail：xiaozz573@126.com。
2015 年 3 月第 35 卷第 3 期
Mar． 2015 Vol． 35 No． 3
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Hunan Univ． of CM
新疆紫草 [Arnebia euchroma (Royle) Johnst]为
2010 版《中华人民共和国药典》收载的紫草品种之
一。 味甘、咸，性寒，归心、肝经，具有清热凉血、活血
解毒、透疹消斑等功效，是临床常用的中药 [1]。 现代
药理研究发现新疆紫草具有良好的抗早孕、 抗生育
作用，课题组前期研究发现，新疆紫草石油醚提取物
16
是其抗生育作用的药效部位[2]，但对其抗生育的毒性
研究少有报道。 故通过开展对新疆软紫草石油醚提
取物的蓄积毒性试验研究，对促进新疆紫草作为抗
生育新药的研发，确保其在育龄妇女用药安全得以
逐步实现，丰富、发展中药妊娠用药禁忌理论提供
一定的实验依据。
1 材料
1.1 受试物
新疆紫草 （购自湖南中医药大学第一附属医
院，批号 1307220462；经湖南中医药大学第一附属
医院药剂科检验鉴定为新疆紫草。
1.2 试验动物
昆明种小鼠，雌雄各半，健康适龄，体质量 18～
22 g，共 40 只，SPF 级，购自湖南中医药大学，许可
证号：SCXK（湘）2013-0004；饲养处及试验地：湖南
中医药大学实验动物中心 SPF级实验室。
1.3 主要仪器与试剂
RE-52A 旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器
厂)；LEICA DM LB2 型双目显微镜 (德国 LEICA 公
司)；Shandon325型石蜡切片机(英国 Shandon 公司)；
Motic B5 显微摄像系统(麦克奥迪实业集团公司)。
2 方法
2.1 新疆紫草石油醚提取物的制备[3]
称取 3 kg新疆紫草 50 ℃干燥 6 h后粉碎。 将
新疆紫草粉末平均分三份（每份 1 kg）于渗漉筒中，
加 10 倍体积石油醚，浸泡 12 h，以 2 mL/min 的流
速渗漉提取一个月，富集提取液，减压回收溶剂。 浓
缩液挥干溶剂后称重，计算每份固形物得率（相对
于生药材），分别为 2.75%、2.68%、2.63%，平均固形
物得率为 2.69%。 动物试验前以 4%吐温-80 助溶，
50 ℃水浴加热搅拌配制成混悬液备用。
2.2 蓄积毒性试验及蓄积系数计算
取昆明种小鼠 40 只，雌雄各半，采用 20 d 剂
量递增蓄积毒性试验法 [4]，将小鼠随机分为对照组
和试验组，每组 20只。 以 10 mL/kg鼠重灌胃，对照
组给以 4%吐温-80水溶液，试验组小鼠给以配制的
新疆紫草石油醚提取物混悬液， 以 4 d 为一周期，
初始给药剂量为 0.1 倍 LD50 （LD50按课题组急性毒
性试验所得数据 3.48 g/kg计算），1.5倍递增量每期
递增， 连续给药到小鼠累积死亡一半时结束试验，
共计 17 d。计算累积给药剂量以及蓄积系数 K=LD50
(n) ／ LD50。
2.3 脏器指数测定及生殖器官病理观察
进行毒性试验后，待解剖小鼠禁食 12 h，腹腔
注射 10%水合氯醛麻醉（350 mg/kg）。解剖雄性小鼠
取睾丸，雌雄小鼠取卵巢和子宫，精密电子天平称
取各脏器质量后于 10%甲醛溶液中固定。 计算脏器
指数，即脏器(mg)与活体体质量(g)之比。 采集的组织
经过常规脱水、石蜡包埋、切片、烘烤、脱蜡、复水、
HE 染色后光学显微镜下观察。
2.4 统计学分析
试验数据以“x±s”表示，采用 SPSS 18.0 统计软
件进行统计学分析，组间差异的显著性分析采用单
因素方差分析或非参数检验，P<0.05 认为差异具有
统计学意义。
3 结果
3.1 新疆紫草石油醚提取物小鼠蓄积毒性试验结
果
给药第 17 天小鼠累积死亡总只数达到 10 只，
累 积 给 药 剂 量 为 13.08 g/kg， 相 当 于 生 药 材
486.25 g/kg，蓄积系数 K=3.76，根据蓄积毒性评价
标准[5]，当 K≥5时，为弱蓄积性；当 3≤K<5 时，为中
等蓄积性；当 1≤K＜3 时，为强蓄积性。 结果表明新
疆紫草石油醚提取物为中等蓄积毒性。
3.2 新疆紫草石油醚提取物对小鼠生殖器官脏器
指数的影响
试验组雄性小鼠睾丸指数与对照组比较无显
著性差异（P>0.05），而试验组雌性小鼠卵巢和子宫
指数与对照组比均差异具有统计学意义 （P<0.05），
表明长期灌胃新疆紫草石油醚提取物对雄性小鼠
睾丸组织无蓄积毒性影响，但可减轻雌性小鼠卵巢
和子宫质量。 结果见表 1。
3.3 新疆紫草石油醚提取物对小鼠生殖器官组织
形态的影响
对照组雄性小鼠睾丸生精小管内细胞排列紧
密，可见精原细胞、精母细胞以及大量精子细胞位
于生精小管腔面，精子排列有序，睾丸间质细胞完
好。 与对照组相比试验组雄性小鼠睾丸病理组织观
察无明显病变。
表 1 新疆紫草石油醚提取物对小鼠
生殖器官脏器指数的影响 （n=10，x±s）
注：与对照组比较 *P＜0.05。
组 别
对照组
试验组
给药剂量（g/kg）
—
13.08
睾丸指数（对）
6.60±1.00
7.21±0.83
卵巢指数（对）
0.94±0.12
0.81±0.11*
子宫指数
3.49±0.23
3.14±0.28*
戴 冰，等 新疆紫草石油醚提取物对小鼠生殖组织形态及其脏器指数的影响第 3 期 17
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（上接第 4页）
（本文编辑 杨 瑛）
对照组雌性小鼠卵巢内各级卵泡细胞生长发
育正常，轮廓清晰，初级卵母细胞核大而圆，可见少
量闭锁卵泡。 小鼠子宫大多处在增生期或分泌期，
腺体排列密集，内膜较厚，组织细胞结构正常。 与对
照组相比试验组小鼠卵巢内各级卵泡细胞，卵母细
胞发育正常，未发现细胞结构异常的病变，但闭锁
卵泡数目明显增加， 小鼠子宫大多处于增生前期，
腺体较少，内膜相对对照组较薄，组织细胞结构基
本正常。 表明新疆紫草石油醚提取物对试验组小鼠
卵泡和子宫发育有一定影响，但对其细胞结构均无
病理性损伤。 结果见第 72页彩图图 1~3。
4 讨论
石油醚是提取新疆紫草脂溶性萘醌类成分的
主要溶剂，其挥发性强，极性较低；且由于新疆紫草
萘醌类成分是一类天然色素，高温下容易变性或者
分解。 因此本试验根据前期对新疆紫草石油醚提取
工艺的考察结果 [6]，采用石油醚渗漉法冷浸提取该
类成分，制得新疆紫草石油醚提取物，发现其得率
较高且稳定。 同时还由于该提取物不溶于水，故在
进行动物试验给药时，用 4%吐温-80 助溶量，水浴
加热搅拌配制成混悬液给药。
脏器指数反映药物对脏器的影响，是初步的毒
性判断。 该指数增加表示脏器有充血、水肿、增生、
肥大等变化，指数下降表示脏器萎缩、退行性变化
等[5]。 脏器指数的比较结果在一定程度上可说明药
物毒性作用的影响程度， 支持或印证病理检查结
果。 本试验发现新疆紫草石油醚提取物为中等蓄积
毒性，可降低雌性小鼠卵巢指数和子宫指数（卵巢
和子宫质量）， 但对雌性小鼠卵巢和子宫组织形态
无毒性损害，其细胞结构基本正常；表明该提取物
可能导致雌性小鼠生殖组织的生长发育受到抑制，
从而起到抗生育作用。 这与戴德英，罗学娅发现紫
草在抗生育药理作用中可能使雌性小鼠的卵巢和
子宫质量下降，但对组织并无损害作用，其抑制作
用是可逆的报道一致[6-7]。 究其原因可能与新疆紫草
石油醚提取物干扰垂体对卵巢的调节作用，降低雌
孕激素水平[8-9]，抑制小鼠卵巢内卵泡的成熟以及子
宫内性腺的发育，使得闭锁卵泡数目增多，子宫内
膜壁变薄，从而导致卵巢和子宫的质量减轻有关。
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（本文编辑 贺慧娥）
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湖南中医药大学学报 2015 年第 35 卷18
A.空白组；B.高糖组；C.左归组；D.4-苯基丁酸组
图 1 足细胞 Hoechst 33258 荧光染色
激光共聚焦显微图（×600）①正常对照组；②模型组；③益心泰低剂量组
④益心泰中剂量组；⑤益心泰高剂量组；⑥氯沙坦钾组
图 1 各组家兔心肌组织病理改变（HE 染色，×400）
① ② ③
④ ⑤ ⑥
A1：对照组；B1：试验组
图 1 各组小鼠睾丸组织光镜图（HE，×400）
①正常血清组；②柴哮高组；③柴哮中组；④柴哮低
组；⑤盐哮血清组；⑥哮喘血清组
图 3 各组大鼠气道上皮细胞中 MAL 蛋白的
表达光镜图（免疫组化，×200）
①正常组肺组织；②哮喘组肺组织
图 1 两组大鼠肺组织形态光镜图（HE，×200）
① ②
① ②
③ ④
⑤ ⑥
A2：对照组；B2：试验组
图 2 各组小鼠卵巢组织光镜图（HE，×400）
A1 B1
A2 B2
A3 B3
A3：对照组；B3：试验组
图 3 各组小鼠子宫组织光镜图（HE，×200）
正文见第 24~25页 正文见第 18页
正文见第 11页
正文见第 3页
A B
C D
湖南中医药大学学报 2015 年第 35 卷72