全 文 ：第 18 卷 第 2 期
1 9 9 5 年
新 注 玉 学 院 学 报
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1 9 9 5
双波长薄层扫描法测定新疆雪莲中芦丁含量
李 伟 堵年 生
(新通医学院药学系药物 分析教研室 ) (新祖医 学院药学 系植物化学教 研室 )
赵 英
(新疆大宇化学系有机 化学教研室 )
提要 未用双波长薄层 扫描 法测定新疆雪莲芦丁 含量 。 以 乙 酸 乙醋一 甲 酸 一水
( 6 7
: 1 3 : 2 0 )为展开 剂 , 硅 胶 G F : 5; 薄层板分禹 ; 泪·l定波长 久, 为 2 6 3 n m ,参比波长 入R
为 2 3 5 n m 。 样品 回 收率为 9 7 . 3 % ;相 对标准偏差为 2 . 8 % 。 在芦丁 0 . 5一 6 . 0 拜g 范围
内有良好 的线性 , 相 关 系数 为 0 . 9 9 9 。 木 法简便 、 快速 、 灵敏度 高 。
关键词 新疆雪莲 ; 芦丁 ; 薄层扫 描法
新疆雪莲 ( s a u s s u r e a l : 、 v o l u e r a ` a K a r ·
e t K i r
.
e x M a x im ) 系菊科风毛菊属植物 , 主
要分布于我国新疆的夭山和 昆仑山高 山区 。
民间以全草入药 , 具有 活血通经 、 散寒除湿 、
强筋助阳等功效 。用于治疗风湿性关节炎 、 肺
寒咳嗽 、 小腹冷痛 、 闭经 、 胎衣不下 、 阳萎等疾
患 〔” . 药理试验表明 ,新疆雪莲具有消炎 、 镇
痛及终止妊娠 的作用 〔 2 , ,而总黄酮是消炎镇
痛的有效成分 。文献报道 ,芦丁是雪莲中重要
的黄酮成分 〔3 〕 。 芦丁具有祛痰和维生素 P 样
作用 , 能降低毛细血管通 透性 , 且具有抗病
毒 、 抑制醛糖还原酶作用 〔们 。 由于芦丁合成耗
资大 , 且作用不如天然药材中提取的芦丁 ,因
此国内外对芦丁黄酮类化合物的研究颇具规
模 。 新疆雪莲中芦丁的定量分析方法还未见
报道 ,为了开发新疆的雪莲资源 ,本文采用双
波长薄层扫描法测定了新疆雪莲芦丁含量 。
该法与目前文献报道的芦丁定量方法 〔` 一 ’ 〕比
较 ,具有简单 、 快速 、 灵敏度高 、 样品用量少等
特点 。
实 验 部 分
一 、 仪器与试剂
岛津 C S 一 93 。 型双波 长薄层扫 描仪 ; 微
量定量毛细管 (美 国 D r u m m o n d 科学 公司 ) ;
硅胶 G F 2 5 4 薄层板 (青岛海洋化工厂 ) ; 岛津
D R
一
1 型数据处理机 ; 芦丁对照品 (北 京药 品
生物制品检定所 ) ; 雪莲花 (新疆 医学院药理
教研室提供 ) 。 其它试剂均为 A R 级 。
二 、 实验条件的选择
1
. 薄层色谱分离条件 薄层板于 1 05 ℃
活化 30 m in , 密存备用 , 点加样 品液 于硅胶
G F 二 . 薄层板上 , 以 乙酸 乙酷一 甲酸 一 水 ( 67
, 1 3 , 2 0) 为展开剂 . 在温度 18 士 2℃的条件
下展开 ,色谱分离结果表明 ,样品中芦丁的分
离较为理想 (图 1 ) 。
2
. 测定 波长 的确定 点芦 丁对照品 3
拜g (1 . 0 拼g /川 的 甲醇液 ) 于薄 层板 上 , 展开
1 5 。 m , 在薄层扫描仪上于 2 0 0 一 3 7 0 ; l m 波
长范围内 ,对背景进行光谱扫描 ,接着对芦丁
新 任 医 学 院 学 报 18 卷
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5 0 0 飞U U U
扫描距离 ( m m )
15 0 0
图 1薄层色潜扫描图
1
:新疆雪莲 ; 2: 芦丁对照 品
斑 点进行差示光谱扫描 ,得到 吸收光谱 ( 图
2 )
。 由图 2 测得测定波长 溉 为 2 63 n m ,参比
波长 久R 为 2 3 5 n m 。
量法进行样品测定 。
5
. 线性范围和 回归方程 用微量定量毛
细管吸取芦丁对照液 0 . 5 ~ 6 . 。 川 ,点样 7 个
斑点 。按照上述方法操作 , 以积分值及点样量
计算得 回归方程为 A ~ 一 9 . 8 x l 丁 ’ 十 10 . 5
C
, r
= 0
.
9 9 9
。 芦丁在 0 . 5~ 6 . 0 拌 g 范围内与
积分值呈线性关系 。
三 、 回收率试验
精密称取芦丁对照品 4 . 2 5 nr g , 与 1 0 . 0
m l 雪莲样品液混匀 ,得回收溶液 。 将 回收溶
液样品液各 2 . 0 科l 、 对照 au 2 . 0 拌l 和 3 . 0 胖 l ,
点在同一块薄层板上 ,按稳定性试验项下的
方法操作 ,外 标二 点法定量 , 测得 回收率为
9 7
.
3%
。 测得数据见表 1 。
表 1 标准添加法回收率
20 0 序号 加入量
( m g )
回收量
( m g )
回收率 平均回 收举
(纬 ) ( % )
R S D
( % )
.4096235
.413972
…一巴JU亡户勺匕乃曰,`ó,七qn乙.…月任j J咭d.4,二弓`恤JJ任匕心8 000创荟叫ù、]
0 4 0 0
夕0 0 2 50 2 0 0 3 5 0
波长 ( n m )
图 2 紫外吸收光谱图
1
:芦丁对 照品 , 2 :薄层板背景
3
. 稳定性实验 同前点样 ,展开 ,薄层板
取 出晾干 30 m in 后 ,在选定波长下 ,采用双
波长反射法锯齿形扫描 , 扫描宽度 8 m m , 狭
缝 1 . 2 m m 又 1 . 2 m m , 线性参数 S X = 7 ,对斑
点每隔 1 0 m in 重复扫描测定 ,持续 Z h ,积分
值保 持不变 , R S D 为 1 . 6% , 表 明斑 点较稳
定 。
4
. 精密度试验 在同一块薄层板上 , 精
密点对照品溶液 5 点 , 共点 5块板 。 展开后测
定积分值 , 得板内精密度与板问精密度分别
为 1 . 1%和 2 . 9 % 。 结果表明可用回归曲线定
四 、 样品分析
精密称取雪莲花 20 . 0 9 , 置沙氏提取器
中 ,水浴加热回流提取至样品浸泡液为无色 。
浓缩提取液 , 残留物加 3 0 m l 蒸馏水混悬 .
先用乙醚脱脂 3 次 , 每次 10 0 m l , 然后再用
正丁醇萃取水层 3 次 , 每次 10 m l 。 合并并
减压浓缩正丁醇 ,浓缩物用 甲醇定容至 50 . 0
m l
, 即得雪莲样品溶液 。 按稳定性试验与 回
收率项下方法操作 , 取同一生药样品重复测
定 5次 。 结果见表 2 。
表 2 样品分析结果
序号 百分 含量 (% ) 平均 含量 (纬 ) R S D (纬 )
1 0
.
1 6 7
0
.
17 4
0
.
17 6
0
.
16 5
0
.
17 3
0
.
17 1
2期 双波 长薄层 扫 描 法 足 L {定 新往 雪莲中芦丁 含重
讨 论
控制的分析方法 。 本文亦可为其它黄酮类化
合物研究及含量测 定提供方法学 上 的参考 。
本文选择芦丁紫外光谱最大吸收峰位作
为测定波长 入 s, 与该波长对应的背景等吸收
点波长作为参比波长 久R ,采用双波长薄层扫
描法可同时消除薄层板厚度不均和背景吸收
所带来的误差 。
点样是薄层色谱分析关键的一步 , 它既
关系到能否得到可以重现的有良好分离度的
薄层色谱 ,也关系到定量分析结果的准确 , 因
为不 良的点样是最主要的误差来源 。 本文采
用小体积累加点样法 ,点样时控制斑点直径
不大于 Z m m . 同时 , 采用点样时同步干燥以
除去原点残存的溶剂 。
为优化色谱条件 , 本文先后选用苯 一 甲
醇 一 丙酮一醋酸 (6 0 : 18 : 18 : 4 ) , 正丁醇一
醋酸一 水 ( 4 0 : 10 : 5 0) , 乙酸乙酷 一 甲酸 一
水 ( 67 , 1 3 , 2 0) 等不同展开体系进行层析分
离 ,结果表明 ,使用乙酸 乙醋一 甲酸一水 (6 7
, 1 3 , 20 )为展开剂 ,即可使芦丁获得理想的
R f 值 ,又可达到较好的分离度 (图 1 ) 。
本法测定新疆雪莲中芦丁的含量具有快
速 、 准确 、 简便之优点 , 可作为雪莲制剂质量
参 考 文 献
王惠康 , 林章代 . 何 侃 , 等 . 新疆雪 莲化学成
分的研究 . 药学学报 , 2 9 5 6 ; 2 1 ( 9 ) : 6 5 0
李观海 . 刘发 . 雪莲对大鼠实验性 关节急性
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贾忠 建 . 李瑜 , 杜枚 , 等 . 新 疆雪莲 化学 成分
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沙世炎 , 徐丰啥 , 严敏 如 , 等编· 中草药有效
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汪宝琪 ,庞志功 , 白晓红 . 薄层一 化学发光法
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7 ( 3 )
:
4
〔1 9 9 4 年 4 月 2 5 日收 稿 〕
D e t e r m i n a t i o n o f R u t i n i n S a u s s u r e a I n v o l u e r a t a b y T L C S
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一 H C O O H 一 H : O ( 6 7 , 1 3 , 2 0 ) a s d e v e l o p i n g s y s t e m . R u t i n w a s d e t e r m i n e d b y u s i n g S h i-
m a d z u C S一 9 3 0 d u a l w a v e l e n g t h : 2 6 3 n m a n d r e f e r e n e e w a v e l e n g t h : 2 3 5 n m w it h s a t i s f a e -
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3% ; a n d i t s e o e f f i e ie n t o f v a r i a t i o n w a s
2
.
8%
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