全 文 ：中国药物与临床2007年4月第7卷第4期ChineseRemedies&Clinics,April2007,Vol7,No.4
作者单位:830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院(买尔
旦·马合木提),药剂科(古丽仙·胡加),肿瘤外科(张国庆);新疆医
科大学药学院药剂学教研室(刘燕)
通讯作者:刘燕,Email:linyun200500@163.com
新疆紫草 [Arnebiaeuchroma(Royle)Johnston]
又名新疆软紫草、新藏假紫草,主产于新疆,为维吾
尔医常用药材。它的化学成分与硬紫草极为相似,紫
草素及其衍生物的含量比硬紫草高出8倍,被列为
正品。药理学研究表明,新疆紫草具有抗炎、抗生育、
抗肿瘤、杀菌抗病毒以及免疫调节等作用[1-3]。我们
分别制备了新疆紫草的脂溶性和水溶性提取物,并
观察了其对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,初
步探讨了其作用机制,旨在为新疆紫草作为新型保
肝药物提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂:新疆紫草(简称 AEJ,新疆参茸药
业有限责任公司,批号20040819;将其干燥根粉碎,
经提取分离得到其脂溶性提取物AE-Ⅰ和水溶性提
取物AE-Ⅱ;临用前用0.5%羧甲基纤维素钠配制
成所需浓度的混悬液备用);联苯双酯滴丸(规格1.5
mg/丸,北京协和制药厂,批号 04040109;临用前用
0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液备
用);二锅头白酒(红星牌,北京酿酒总厂,56%;用蒸
馏水配制成含酒精38%白酒备用);超氧化物歧化酶
(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛
(MDA)试剂盒(购于南京建成生物工程研究所)。
1.2 动物:昆明种小鼠,普通级,体重(20.3±2.1)g,
雌雄兼用,由新疆医科大学实验动物中心提供,动物
合格证号:新医动字SYXK(新)2003-0001。
1.3 仪器:WH—861旋涡混合器(上海环球物化仪
器厂);LD5—2A低速离心机(北京医用离心机厂);
新疆紫草提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用
买尔旦·马合木提 刘 燕 古丽仙·胡加 张国庆
【 摘 要】 目的 研究新疆紫草提取物(AE-Ⅰ、AE-Ⅱ)对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法 灌胃
35度二锅头白酒 16ml/kg造酒精性肝损伤模型,观察肝脏、脾脏系数,血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨
酶(AST)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛
(MDA)、一氧化氮(NO)的水平和肝脏病理组织学变化。 结果 AE-Ⅰ、Ⅱ各剂量组均可降低小鼠脾脏系数和血清
ALT、TG活性,升高肝组织SOD、GSH-Px活性,并降低肝组织MDA和NO含量(P<0.05);而仅有AE-Ⅰ(0.8g/kg)
可以降低肝脏系数(P<0.05);AE-Ⅰ(0.8g/kg)和AE-Ⅱ(2,4g/kg)可降低小鼠血清AST活性(P<0.05);AE-Ⅰ(0.8g/kg)和
AE-Ⅱ(4g/kg)可降低小鼠血清CHO活性(P<0.05);AE-Ⅰ、Ⅱ均可不同程度地改善肝脏病理组织性损伤。结论
AE-Ⅰ、AE-Ⅱ对小鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用。
【 关键词】 紫草;肝疾病,酒精性;小鼠
ThehepatoprotectiveefectsofArnebiaeuchroma(Royle)Johnstonextractsagainstalcohol-inducedacuteliv-
erinjuryinmice *MAHMUT-Maierdan,LIUYan,HUJIA-Gulixian,ZHANGGuo-qing.*AfiliatedTumorHospital,
PharmaceuticsColege,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China
【Abstract】Objective ToinvestigatethehepatoprotectiveefectsofArnebiaeuchroma(Royle)Johnstonextracts
(AE-Ⅰ andAE-Ⅱ)againstalcohol-inducedacuteliverinjuryinmice.Methods Theacuteliverinjuryanimal
modelwasestablishedinmicebyalcoholgavage (35%U/Uat16ml/kg).Theliverandspleenindexes;alanine
aminotransferase(ALT),activitiesofserumaspartateamiontransferase(AST),cholesterol(CHO)andtriglycerides
(TG),activitiesofsuperoxidedismutase(SOD)andglutathioneperoxidase(GSH-Px),contentsofmalondialdehyde
(MDA)andnitricoxide(NO)inliverhomogenate,aswelasthehistopathologicalchangesoftheliverwereassessed.
Results Ataldosesstudied,AE-IandAE-ⅡsignificantlyreducedthespleenindexandactivitiesofserumALTand
TG,increasedtheactivitiesofliverhomogenateSODandGSH-Px,loweredthecontentsofMDAandNO(P<0.05or
P<0.01).Specificaly,AE-I(0.8g/kg)decreasedtheliverindex(P<0.05);AE-I(0.8g/kg)andAE-Ⅱ(2g/kgand
4g/kg)decreasedtheactivityofserumAST(P<0.05);AE-Ⅰ (0.8g/kg)andAE-Ⅱ (4g/kg)decreasedtheactivity
ofserumCHO (P<0.05orP<0.01);AE-Ⅰ andAE-Ⅱ improvedliverinjuries.Conclusion AE-IandAE-Ⅱ
showedprotectiveefectsagainstacuteliverinjuryinducedbyalcoholinmice.
【Keywords】 Lithospermum;Liverdiseases,alcoholic;Mice
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中国药物与临床2007年4月第7卷第4期ChineseRemedies&Clinics,April2007,Vol7,No.4
表2 AE对小鼠急性酒精性肝损伤血清ALT及
AST活性的影响(x±s)
剂量
g·kg-1·d-1
ALT
U/L
AST
U/L
- 24±6 99±16
- 42±13a 142±23a
- 41±13a 134±34d
0.2 17±3b 107±23c
0.4 28±6b 121±19
0.8 26±4b 108±18c
2.0 30±7c 111±14c
4.0 27±12b 112±34c
注:a与正常对照组比较P<0.01;与模型组比较bP<0.01,cP<0.05;d与
正常对照组比较P<0.05
组别 只数
正常对照组 10
模型组 10
溶剂对照组 10
阳性对照组 10
AE-Ⅰ组 10
10
AE-Ⅱ组 10
10
表1 AE对小鼠急性酒精性肝损伤肝脏
脾脏系数的影响(x±s)
剂量
g·kg-1·d-1
肝脏系数
%
脾脏系数
%
- 3.90±0.36 0.24±0.05
- 4.35±0.36a 0.33±0.07a
- 4.34±0.25a 0.29±0.05
0.2 3.98±0.36 0.25±0.05b
0.4 3.99±0.39 0.25±0.03b
0.8 3.86±0.13b 0.23±0.04c
2.0 4.00±0.25 0.24±0.07b
4.0 4.04±0.22 0.23±0.04c
注:a与正常对照组比较P<0.05;与模型组比较bP<0.05,cP<0.01
组别 只数
正常对照组 10
模型组 10
溶剂对照组 10
阳性对照组 10
AE-Ⅰ组 10
10
AE-Ⅱ组 10
10
DY89—1型电动玻璃匀浆机 (宁波新芝生物科技股
份有限公司);AEROSET型全自动生化分析仪(美国
雅培公司);721型分光光度计 (上海第三分析仪器
厂)。
1.4 动物分组与处理:80只昆明种小鼠,雌雄各半,
随机分成 8组,每组 10只,即正常对照组、模型组、
溶剂对照组、阳性对照组(联苯双酯组,0.2g/kg)、AE-
Ⅰ低剂量组(0.4g/kg)、AE-Ⅰ高剂量组(0.8g/kg)、
AE-Ⅱ低剂量组(2g/kg)和高剂量组(4g/kg)。均灌
胃给药,1次/d,连续 10d,灌胃容积为 0.2ml/10g,
正常对照组和模型组给予蒸馏水,溶剂对照组给予
0.5%羧甲基纤维素钠。
1.5 动物模型的建立[4-6]:每日灌胃给药 30min后,
除正常对照组外,其余各组小鼠均灌胃35度二锅头
白酒16ml/kg,正常对照组灌胃等容积的蒸馏水。第
10天给酒后禁食不禁水,24h后称重,采集血和肝
脏、脾脏标本,作相关检测。
1.6 检查项目及方法:①肝脏、脾脏系数的检测:小
鼠取血后立即断颈椎处死,剖腹取肝脏、脾脏,用 4
℃生理盐水冲洗,滤纸吸干,称重,计算肝脏、脾脏系
数。脏器系数(%)=脏器重量(g)/体重(g)×100%;
②生化指标的检测:实验结束时,每鼠摘眼球取血,
3500r/min离心10min,分离血清,用全自动生化分
析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨
酶(AST)、胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)的活性;取
肝右叶相同部位的一小块肝组织,以4℃生理盐水
制成10%肝匀浆,2000r/min离心10min,取上清液
按试剂盒说明书测定肝组织 SOD、GSH-Px的活性
及MDA、NO的含量。③肝脏病理组织学检查:取每
只小鼠肝左叶相同部位的一小块肝组织,用10%甲
醛溶液固定,石蜡包埋切片,苏木素-伊红(HE)染
色,光镜下观察肝脏病理组织学改变。
1.7 统计学处理:数据以 x±s表示,应用 SPSS12.0
统计软件包进行处理。组间比较采用方差分析,检验
水准α=0.05。
2 结 果
2.1 肝脏病理组织学检查:正常对照组小鼠肝组织
结构正常,肝细胞无明显病变。模型组小鼠肝与正常
对照组比较有显著的改变,肝正常组织结构消失,肝
细胞明显肿胀,呈气球样变及脂肪变性,胞质疏松,
其内可见大小不一、数量不等的脂滴,肝细胞点状坏
死和灶性坏死,尤以汇管区明显,坏死灶内有大量炎
性细胞浸润。AE对急性酒精性肝损伤的病理改变有
恢复作用,可减轻肝细胞浊肿、炎性细胞浸润和脂肪
变性程度,减少点状坏死,促进肝细胞再生。表明AE
对酒精所致小鼠肝脏损伤具有保护作用。
2.2 对肝脏、脾脏系数的影响:与正常对照组比较,
模型组小鼠肝脏、脾脏系数明显增加,其差异有统计
学意义(P<0.05)。与模型组比较,除AE-Ⅰ高剂量组
可以降低肝脏系数(P<0.05)外,其余各组虽有降低
肝脏系数的趋势,但其差异无统计学意义;各给药组
均可以降低脾脏系数。见表1。
2.3 对肝功能的影响:与正常对照组比较,模型组
小鼠血清ALT、AST活性显著升高(P<0.01),说明造
模成功。与模型组比较,溶剂对照组并不能改变这种
情况(P>0.05);各给药组均可降低小鼠血清 ALT的
活性(P<0.05或 P<0.01);除 AE-Ⅰ低剂量组外,各
给药组均可降低小鼠血清AST的活性。见表2。
2.4 对血脂的影响:与正常对照组比较,模型组小
鼠血清CHO、TG活性升高(P<0.05或P<0.01)。与模
型组比较,溶剂对照组并不能改变这种情况 (P>
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中国药物与临床2007年4月第7卷第4期ChineseRemedies&Clinics,April2007,Vol7,No.4
表3 AE对小鼠急性酒精性肝损伤血清CHO及
TG活性的影响(x±s)
剂量
g·kg-1·d-1
CHO
mmol/L
TG
mmol/L
- 2.5±0.3 1.53±0.32
- 3.7±0.8a 2.00±0.43d
- 3.5±0.6a 1.88±0.46
0.2 2.5±0.5b 1.38±0.35b
0.4 3.2±0.9 1.56±0.33c
0.8 2.7±0.4b 1.24±0.24b
2.0 3.0±0.5 1.37±0.28b
4.0 2.9±0.5c 1.29±0.18b
注:a与正常对照组比较P<0.01;与模型组比较 bP<0.01,cP<0.05;d与
正常对照组比较P<0.05
组别 只数
正常对照组 10
模型组 10
溶剂对照组 10
阳性对照组 10
AE-Ⅰ组 10
10
AE-Ⅱ组 10
10
0.05);AE-Ⅰ和 AE-Ⅱ高剂量组均可降低小鼠血清
CHO的活性(P<0.05或P<0.01),各给药组均可降低
小鼠血清TG的活性(P<0.05或P<0.01)。见表3。
2.5 对肝组织SOD、GSH-Px活性和MDA、NO含量
的影响:模型组小鼠肝组织 SOD、GSH-Px活性和
MDA、NO含量与正常对照组比较差异均有统计学
意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组均可以升高
小鼠肝组织SOD、GSH-Px活性,并降低肝组织MDA
和NO的含量(P<0.01)。见表4。
3 讨 论
由酒精性肝损伤引起的酒精性肝病(alcoholic
liverdisease,ALD)已成为一种世界性的疾病,发病
率呈明显上升趋势,成为仅次于病毒性肝炎的第二
大肝病。ALD发病率高、后果严重,加之酒精中毒对
神经系统、生殖系统的影响,已成为一种严重危害人
民健康的疾病。另外,ALD又常和乙型、丙型肝炎合
并存在,迭加致病,更易并发肝硬化及肝癌。因此,对
ALD的防治应予以高度重视,加强ALD的宣传和防
治研究已成为当前面临的重要课题。研究表明,机体
表4 AE对小鼠急性酒精性肝损伤肝组织SODGSH-Px活性
和MDANO含量的影响(x±s)
剂量
g·kg-1·d-1
SOD
U/mg蛋白质
GSH-Px
U/mg蛋白质
MDA
nmol/mg蛋白质
NO
nmol/mg蛋白质
- 73±10 169±15 1.8±0.5 1.01±0.29
- 47±12a 114±22a 4.7±0.8a 2.74±0.48a
- 52±12a 121±19a 4.6±0.5a 2.83±0.65a
0.2 66±10b 162±18c 2.9±0.4c 1.65±0.39c
0.4 62±16b 154±16c 3.3±0.6c 1.79±0.40c
0.8 67±11c 166±12c 2.3±0.3c 1.36±0.26c
2.0 63±13b 147±21c 3.0±0.3c 1.68±0.51c
4.0 63±12b 160±14c 2.8±0.6c 1.59±0.31c
注:a与正常对照组比较P<0.01;与模型组比较,bP<0.05,cP<0.01
组别 只数
正常对照组 10
模型组 10
溶剂对照组 10
阳性对照组 10
AE-Ⅰ组 10
10
AE-Ⅱ组 10
10
大量摄入乙醇后,在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢
氧化,使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响
脂肪代谢,致使脂肪在肝细胞内沉积[7];同时乙醇能
激活氧分子,产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过
氧化及体内还原型谷胱甘肽的耗竭[8];同时研究证
实酒精中毒可以直接引起肝纤维化,并由纤维化直
接进入肝硬化[9]。我们研究发现,AE-Ⅰ和AE-Ⅱ对
酒精性肝损伤小鼠的肝、脾肿胀大有一定抑制作用,
能改善肝脏病变状况,使血清 ALT、AST、CHO、TG
和肝组织 SOD、GSH-Px、MDA及 NO向正常水平恢
复。提示AE-Ⅰ和AE-Ⅱ对酒精引起的肝损伤均具
有保护作用,其确切机制有待进一步研究。
参 考 文 献
1 方文贤,宋崇顺,周立孝.医用中药药理学.北京:人民卫生出版
社,1998.
2 卢贺起,丁家欣,魏雅川.紫草的实验研究进展.中国中医药信
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3 葛峰,王晓东,王玉春.药用紫草的研究进展.中草药,2003,34
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与临床,2004,20(4):3-4.
5 洪敏,董自波,孙小玉,等.茵陈蒿汤对大鼠酒精性肝损伤的保
护作用.南京中医药大学学报,2004,20(5):303-304.
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防治作用.中国新药杂志,2005,14(7):852-855.
7 PlaaGL.Chlorinatedmethanolandliverinjury:highlightsofthe
past50years.AnnRevPharmacolToxicol,2000,40:40-42.
8 杨光华.病理学.5版.北京:人民卫生出版社,2001.
9 江正辉,王泰龄.酒精性肝病.北京:中国医药科技出版社,2001.
(收稿日期:2006-06-13)
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