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天冬提取物对小鼠血浆蛋白的影响及其电泳图谱研究



全 文 :板聚集作用明确 ,故初步推测 TBN可能干扰了该受
体与纤维蛋白原结合而抑制血小板的聚集 ,但具体
机制有待在进一步的实验中求证。
综上所述 , TBN能明显抑制血小板的聚集 ,且
优于其母核结构 TMP,但其作用机理尚待进一步讨
论。本研究为 TBN开发成为防治血栓性疾病的特
色新药提供了一定的实验依据。
参 考 文 献
[ 1] 杨锐 ,魏文宇 , 王爱莲 ,等 .川芎嗪对血小板聚集三条激
活途径的抑制及解聚作用的探讨 [ J] .中国血液流变学
杂志 , 1995, 5(1):4-7.
[ 2] 徐正衸 , 王万铁 ,李东 .川芎嗪对家兔心肌缺血再灌注
损伤时氧自由基的抑制作用 [ J] .温州医学院学报 ,
1996, 26(40):193-195.
[ 3] 苏明华 , 周亚光 ,杨光田 .川芎嗪对原代培养大鼠海马
神经元 L型钙通道电流和胞浆细胞内钙浓度的影响
[ J] .中国康复 , 2008, 23(1):17-19.
[ 4] ChenSY, HsiaoG, HwangHR.etal.Tetramethylpyrazine
induceshemeoxygenase-1 expressionandattenuatesmyo-
cardialischemia/reperfusioninjuryinrats[ J] .Journalof
BiomedicalScience, 2006, 13(5):731-740.
[ 5] 陈洁文 ,汤湘江 , 万文成 .川芎嗪对大鼠脑急性缺血缺
氧损伤的保护作用 [ J] .广州中医药大学学报 , 1998, 15
(1):60-67.
[ 6] SunYW, JiangJ, ZhangZJ, etal.Antioxidativeandthrom-
bolyticTMPnitronefortreatmentofischemicstroke[ J] .
Bioorganic& MedicinalChemistry, 2008, 16(19):8868-
8874.
[ 7] 谭载友 , 江涛 ,唐春萍 , 等.阿魏酸川芎嗪的抗血小板聚
集作用 [ J] .中国新药杂志 , 2003, 12(1):529-531.
[ 8] RodvienR, MielkeCHJr.Roleofplateletinhemostasis
andthrombosis[ J] .WestJMed, 1976, 125(3):181-186.
天冬提取物对小鼠血浆蛋白的影响及其电泳图谱研究
熊大胜 ,许丽宾 ,席在星
(湖南文理学院生命科学系 ,湖南 常德 415000)
  摘要 目的:测定天冬块根和茎藤提取物对饲养小鼠血浆 6条蛋白谱带比重的影响 , 探讨天冬提取物对小鼠
血浆蛋白组成的影响。方法:以天冬茎藤和块根水提液 、多糖饲养小鼠血浆醋酸纤维薄膜蛋白电泳谱带比重与生
理盐水 、D-半乳糖饲养小鼠对照 , 分别进行组间 T检验 ,确定其药用效果。结果:各组小鼠血浆电泳均出现 Alb、α1、
α2 、β、Fib、γ6条蛋白谱带。天冬茎藤提取物能显著增加小鼠血浆 Fib和 β带 、降低 Alb、α1带比重 ,其影响效果与
衰老模型无显著性差异;天冬块根提取物对小鼠血浆 Alb、β带无显著影响 ,虽能显著降低 α1 、α2和 γ带比重 , 但其
影响效果与衰老模型差异显著。结论:天冬块根和茎藤提取物对小鼠血浆蛋白质组成的影响不同 , 因茎藤提取物
有 D-半乳糖致衰效果 , 不可将其入药。
关键词 天冬;血浆;蛋白质电泳;蛋白质组成
中图分类号:R285.5  文献标识码:A  文章编号:1001-4454(2010)09-1453-03
收稿日期:2009-09-29基金项目:天冬药用植物种质资源标准化整理 、整合及共享试点国家科技基础平台项目(2005DKA21004)作者简介:熊大胜(1951-),男 ,教授 ,主要从事植物遗传育种研究;Tel:0736-7186128, E-mail:xiongdasheng@126.com。
  天冬 Asparaguscochinchinensis(Lour.)Merr.为
百合科天冬属多年生攀援草本植物 。味甘苦 、性寒 ,
归肺肾经 ,有养阴润燥 、清肺生津 、提高机体免疫能
力和延缓衰老的功效〔1-5〕。据报道 ,天冬块根提取物
能显著提高小鼠血浆蛋白质含量 ,但茎藤提取物却
不能 。但天冬块根和茎藤对小鼠血浆蛋白组成的影
响尚未见报道 。本文通过天冬块根 、茎藤提取物饲
养小鼠血浆醋酸纤维薄膜蛋白电泳 ,分别测定血浆
Alb、α1、α2、β、Fib和 γ蛋白谱带比重变化 ,研究天冬
块根 、茎藤提取物对小鼠血浆蛋白组成的影响。
1 材料与仪器
1.1 实验动物  1 ~ 2月龄清洁级 BALB/c小鼠
72只 ,体质量(20±2)g,由中南大学实验动物学部
提供 ,许可证号:SCXK(湘)20050005。
1.2 药物与试剂 天冬药材为湖南省石门县雁池
乡天冬块根和茎藤 ,并经湖南中医药大学药学院刘
塔斯教授鉴定 , 60℃烘干 ,分别磨碎 , 60目筛样品备
用;D-半乳糖为 sigma产品。
1.3 主要仪器 722S分光光度计为上海精科分
析仪器厂产品;DYCP-37B电泳槽 、DYY-6C稳压稳
流电泳仪为北京六一仪器厂产品;醋酸纤维薄膜和
氨基黑购自万伯生物试剂有限公司。
·1453·JournalofChineseMedicinalMaterials  第 33卷第 9期 2010年 9月
2 方法
2.1 天冬提取物制备
2.1.1 天冬水提液的制备:称取天冬茎藤粉末
12.00 g,蒸馏水 200mL煮提 3次 ,每次 1 h,合并 3
次提取液 ,浓缩至 75 mL得 A1;用同样提取方法获
得天冬块根水提液 B1。
2.1.2 天冬多糖的制备:称取天冬茎藤粉末
12.00 g,蒸馏水 200 mL煮提 2 h,过滤 ,残渣加蒸馏
水 400 mL煮提 2 h,合并 2次提取液 , 浓缩至 50
mL,用 95%乙醇 66 mL沉淀多糖 ,净置过夜 ,去上清
液 ,抽滤 ,用 80%乙醇洗涤(10 mL×3),浓缩至 75
mL得 A2;用同样提取方法获得天冬块根多糖 B2。
2.1.3 给药剂量:中国药典中天冬用药剂量为 6
~ 12 g,按成人 12 g生药标准推算生药 0.2 g/kg体
质量 。小鼠高剂量按 20倍成人用药剂量 4.0 g/kg
设计 ,每处理 12只小鼠(240 g),天冬生药 9.6 g。
即取 A1 、A2、B1、B2各 60 mL,分别分装 15瓶 ,每瓶 4
mL, 130℃灭菌备用 。
2.2 动物分组及处理 72只小鼠 ,雌雄兼用 ,随
机分成 6组 ,每组 12只 , 6次重复;4个给药组每日
腹腔皮下注射 A1 、A2 、B1 、B2 15 mL/kg;正常对照组
注射等量生理盐水 ,衰老模型组注射 D-半乳糖 10
mL/kg(质量浓度 5 mg/mL),连续注射 15 d, 1次 /
d。末次给药 24 h后 ,摘眼球取血 , 3 000 r/min离
心 15 min, 分别获得上述 A1、A2 、B1、B2 、正常对照
组 、模型组 6个组别饲养小鼠血浆各 6次重复血浆
样品 。
2.3 醋酸纤维薄膜蛋白电泳 醋酸纤维薄膜(2.5
×8 cm),巴比妥缓冲液浸泡 ,在预定点样线上精确
点样 ,血浆端贴在电泳槽阴极 ,加盖 ,平衡 ,电泳:180
V, 0.4 ~ 0.6 mA/cm宽 , 60min;氨基黑染色液染色 ,
冰醋酸 、乙醇漂洗液漂洗 ,照相 。分别获得上述 A1 、
A2 、B1 、B2、正常对照组 、模型组血浆蛋白醋酸纤维
薄膜电泳谱带。
2.4 血浆蛋白谱带量化处理 用 7支编号并灭菌
的试管 , 精确切下血浆白蛋白 (Alb)、α1 球蛋白
(α1)、α2球蛋白 (α2)、β球蛋白 (β)、纤维蛋白原
(Fib)、γ球蛋白(γ)带和空白带 ,分别用 0.4 mol/L
NaOH4.0mL脱色液洗脱 , 722S分光光度计 620nm
处 ,空白带校正零点 ,分别获得 Alb、α1 、α2 、β、Fib、γ
谱带洗脱液的光密度 D(λ)。光密度总和 T=A+
α2 +α1 +β +Fib+γ;Alb体积分数(%)=Alb带光
密度 D(λ)值 / T×100,用同样方法获得上述各处
理血浆 6条蛋白谱带的体积分数%。
2.5 统计学处理 A1、A2 、B1 、B2血浆 Alb、α1 、α2 、
β、Fib、γ谱带的体积分数分别与正常对照组 、模型
组进行组间 t检验 ,数据以 x±s表示 。
3 结果
3.1 天冬提取物对小鼠血浆蛋白电泳图谱的影响
 天冬块根水浸提液 B1 、多糖 B2 、茎藤水浸提液
A1、多糖 A2、正常对照组 、D-半乳糖衰老模型组饲养
小鼠 ,用醋酸纤维薄膜血浆蛋白电泳获得图谱 ,各实
验组别小鼠血浆醋酸纤维薄膜电泳均获得 6条蛋白
谱带 ,从上至下依次为 Alb、α1、α2 、β、Fib、γ蛋白带;
天冬茎藤提物物 A1、A2与 D-半乳糖人工致衰模型
组小鼠血浆蛋白均为 6条灰色带 ,天冬块根提取物
B1 、B2与正常对照组均为 6条红色带。
3.2 天冬提取物对小鼠血浆蛋白组成的影响 结
果如表 1所示 ,天冬茎藤提取物 A1、A2能显著降低
小鼠血浆 Alb带比重 、增加 β带比重(P<0.01),但
天冬块根提取物 B1 、B2对小鼠血浆 Alb和 β带无明
显影响 。天冬块根提取物 B1、B2能显著降低 α2和
γ谱带比重(P<0.01),但天冬茎藤提取物 A1 、A2
对小鼠血浆 α2和 γ带无明显影响。天冬茎藤和块
根提取物均能显著降低 α1带比重 ,增加 Fib带比
重 。
  表 1  给药组小鼠 6条血浆蛋白谱带比重与正常对照组间 t检验(%, x±s, n=12)
蛋白带 Alb α1 α2 β Fib γ 合计
正常对照组 63.22±0.07 2.40±0.01 6.80±0.01 8.43±0.50 8.10±0.62 11.24±0.40 99.9
A1 32.44±0.39** 1.28±0.19** 6.90±0.74 39.00±1.03** 10.70±0.47** 11.14±0.08 100.0
A2 32.29±0.70** 1.96±0.09** 6.67±0.04 38.83±1.13** 10.13±0.32** 11.28±0.44 100.0
B1 64.92±0.54 1.27±0.14** 5.90±0.62** 8.00±0.04 12.29±0.51** 9.17±0.32** 100.0
B
2 63.32±1.80 1.68±0.49** 4.85±0.39** 7.66±0.80 11.58±0.49** 10.32±1.42** 100.0
  注:与正常对照比较 , **P<0.01
3.3 给药组小鼠血浆蛋白组成与衰老模型组的差
异比较 结果如表 2所示 ,天冬块根提取物 B1 、B2
的 Alb、β、Fib带与衰老模型组有显著性差异(P<
0.05或 P<0.01),但茎藤提取物 A1 、A2与衰老模型
无显著性差异。天冬块根和茎藤提取物 A1 、A2、B1 、
B2的 α1 、α2带比重均显著高于衰老模型组(P<0.05
或 P<0.01), γ带比重均显著低于衰老模型组(P<
0.01)。
·1454· JournalofChineseMedicinalMaterials  第 33卷第 9期 2010年 9月
  表 2  给药组小鼠 6条血浆蛋白谱带比重与衰老模型组之间 t检验(%, x±s, n=12)
蛋白带 Alb α1 α2 β Fib γ 合计
模型组 32.10±0.03 1.00±0.03 1.00±0.01 39.51±1.04 10.44±0.48 14.56±0.51 100.0
A1 32.44±0.39 1.28±0.19* 6.90±0.74** 39.00±1.03 10.70±0.47 11.14±0.08** 100.0
A
2 32.29±0.70 1.96±0.09** 6.67±0.04** 38.83±1.13 10.13±0.32 11.28±0.44** 100.0
B1 64.92±0.54** 1.27±0.14* 5.90±0.62** 8.00±0.04** 12.29±0.51** 9.17±0.32** 100.0
B2 63.32±1.80** 1.68±0.49* 4.85±0.39** 7.66±0.80** 11.58±0.49* 10.32±1.42** 100.0
  注:与模型组比较 , *P<0.05, **P<0.01
4 讨论
本实验结果表明 ,天冬块根和茎藤提取物 B1 、
B2、A1 、A2 、正常对照组和衰老模型组小鼠血浆醋酸
纤维薄膜蛋白电泳 ,均能获得 Alb、α1 、α2 、β、Fib、γ6
条蛋白带 ,该结果与施宗莲等对人体血浆蛋白醋酸
纤维薄膜电泳结果一致 ,并按施宗莲等研究结果 ,将
β与 γ球蛋白之间的区带命名为纤维蛋白原带
(Fib)〔6〕。
据报道 ,天冬块根提取物能显著或极显著提高
小鼠血浆蛋白质含量 ,但茎藤提取物对小鼠血浆蛋
白质含量无影响。本实验结果表明 ,天冬茎藤提取
物 A1 、A2能显著增加小鼠血浆 Fib和 β带 、降低
Alb、α1带比重 ,其影响效果与衰老模型无显著性差
异。天冬块根提取物 B1、B2对小鼠血浆 Alb、β带比
重无显著影响 ,虽然能显著降低 α1 、α2和 γ带比重 、
增加 Fib带比重 ,但其影响效果与衰老模型差异显
著。可见天冬茎藤提取物不仅对小鼠血浆 Alb、α2 、
β、Fib和 γ蛋白谱带比重的影响与块根完全不同 ,
还有人工致衰的效果 。鉴于此 ,不可将天冬茎藤入
药 。
参 考 文 献
[ 1] 林钰文 , 中药天冬研究进展 [ J] , 海峡药学 , 2008, 20
(6):90-93.
[ 2] 李敏 ,费曜 , 王家葵 .天冬药材药理实验研究 [ J] .时珍
国医国药 , 2005, 16(7):580-582.
[ 3] 张明发 ,沈雅琴 .天冬药理作用研究进展 [ J] .上海医
药 , 2007, 28(6):266-269.
[ 4] 曲凤玉 , 魏晓东 ,李士莉 , 等.天门冬醇提物对衰老模型
小鼠延缓衰老的实验研究 [ J] .中医药学报 , 1999, 27
(2):68-68.
[ 5] 刘云芝 ,曲凤玉 .天冬氯仿提取液对 D-半乳糖致衰小
鼠脑抗氧化作用的实验研究 [ J] .黑龙江医药科学 ,
2001, 24(2):68.
[ 6] 施宗莲 ,蒋兴亮 , 张均 ,等.血清和血浆醋酸纤维膜蛋白
电泳结果比较 [ J] .川北医学院学报 , 1999, 14(3):86-
87.
《中药材 》杂志来稿要求
1 来稿以科研论文 、经验总结 、简报 、综述 、译文等形式均可。科研论文及经验总结必须观点明确 , 有分析 , 有结论 ,避免材料
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5 计量单位 ,应按国际统一计量单位和符号书写 ,如:m, cm, mm, kg, g, h, min, s等。
6 标目 ,一般采用 1、1.1、1.1.1三级 , 层次的序号后不用黑点。
7 参考文献在文中引用处用方括号顺序以数字标注 , 数目过多的不必全列出 , 只举重要的和新的。
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