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新疆紫草萘醌类色素对小鼠D-半乳糖亚急性衰老模型的抗衰老作用研究



全 文 :新疆中医药 2009年 第 27卷 第 4期(总第 122期)
新疆紫草[Arnebia euchroma(Royle)Johnst.]又名
新疆软紫草,药用其干燥根。其味苦,性寒,有凉血、
活血、解毒和透疹的功能。现代药理学研究发现紫
草具有多种生物活性成分,这些成分具有抗病毒、
抗肿瘤、抗生育、抗菌、消炎、降血糖、抗脂质过氧
化[1- 2]等作用。为了进一步探讨新疆紫草在延缓衰老
方面的作用,本文以D-半乳糖致亚急性衰老小鼠为
模型,研究了新疆紫草萘醌类色素的抗衰老作用,
并初步探讨其作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 3月龄ICR小鼠,雌性,由新疆医科大
学实验动物中心提供。动物合格证号:新医动字
SYXK(新)2003- 0001。在室温环境下分笼饲养,实
验前预养3天。
1.1.2 药品与试剂 新疆紫草(新疆参茸药业有限
责任公司,批号20050531),将其干燥根(由新疆医
科大学药学院生药教研室进行生药品种鉴定)粉
碎,醌类常规提取方法制备AE[3],相当于含80g生药/g
提取物,临用前用0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需
浓度的混悬液备用;维生素E胶丸(规格100mg/丸,
昆明圣火制药有限责任公司,批号20060102),制法
同上;D- 半乳糖(上海国药集团制药厂,批号
20050121);氯化钠注射液(新疆制药厂,批号
06050541);血尿素氮(BuN)、超氧化物歧化酶
(T- SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)、丙二醛
(MDA)检测试剂盒均购于南京建成生物工程研究
所。
1.1.3 仪器 S22PC分光光度计(上海棱光技术有
限公司)、TGL- 16G高速常压离心机、TDL- 4型离心
机(上海安亭科学仪器厂);DK- S26型电热恒温水浴
锅(上海精密实验设备有限公司);WH- 861旋涡混
合器(上海环球物化仪器厂);DY89- 1型电动玻璃匀
浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司),TU- 1800
紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任
公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组与处理 取3月龄ICR雌性小鼠70
只,称重,随机分为7组,每组10只,即正常对照组、
模型组、溶剂对照组、阳性对照组(即维生素E组,
0.1g/kg)、AE组(0.2,0.8,2.4g/kg)。除正常对照组外,
其余各组小鼠均颈背部皮下注射 D- 半乳糖
120mg/kg,正常对照组注射等量的生理盐水
(0.1mL/10g)。从第11d开始,在造模同时以上各组均
灌胃给药(1次/d,灌胃容积为0.2mL/10g),正常对照
组和模型组小鼠给蒸馏水,溶剂对照组给0.5%羧甲
基纤维素钠。饮食、饮水不拘,每周记录一次体重,
调整注射及灌胃剂量。至第42d,于造模和灌胃后
新疆紫草萘醌类色素对小鼠D-半乳糖亚急性
衰老模型的抗衰老作用研究
许今博1, 贺金华2, 买尔旦·马合木提3
(1.新疆医科大学附属中医医院,新疆 乌鲁木齐 830000; 2.自治区药物研究所,新疆 乌鲁木齐 830004;
3.新疆医科大学附属肿瘤医院,新疆 乌鲁木齐 830011)
摘 要 目的:探讨新疆紫草萘醌类色素(AE)对D-半乳糖所致亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法:以
D-半乳糖致亚急性衰老小鼠为模型,观察AE对小鼠血清尿素氮(BUN),肝组织超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽
过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平的影响。结果:与模型组相比,AE各剂量组均可明显降低小鼠血清BUN含
量(P<0.05),使肝组织T-SOD活性升高、MDA含量下降(P<0.05);AE中、高剂量组可以提高肝组织GSH-Px活性(P<
0.05)。其萘醌类有效成分包含紫草素。结论:新疆紫草萘醌类色素AE对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠具有延缓
衰老作用。
关键词 新疆紫草;衰老;D-半乳糖
实 验
研 究
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1
新疆中医药 2009年 第 27卷 第 4期(总第 122期)
12h,称重,采集血和肝组织样本,做相关检测。
1.2.2 生化指标的测定 每鼠摘眼球取血,离心
10min(3 500r/min),分离血清,按试剂盒说明书测定
血清尿素氮(BUN)含量;迅速取出小鼠肝右叶相同
部位的一小块组织,用4℃生理盐水制成10%的肝
组织匀浆,离心10min(2 500r/min),取上清液,按试
剂盒说明测定肝组织超氧化物歧化酶(T- SOD)、谷
胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px) 的活性及丙二醛
(MDA)的含量。
1.3 统计学分析
用SPSS13.0统计软件对数据进行统计学分析,
计量资料以平均值±标准差(x+s)表示,采用单因素
方差分析比较组间差异,检验水平α=0.05。
2 结果
2.1 AE对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠血清BUN及
肝组织MDA含量的影响
与正常对照组比较,D-半乳糖衰老模型组小鼠
血清BUN的含量明显升高,其差异具有统计学意义
(P<0.05),肝组织MDA的含量增高显著(P<0.01)。与
模型组相比,AE低、中、高剂量组均可显著降低血清
BUN的含量(P<0.01)及肝组织MDA的含量(P<0.01
或P<0.05),见表1。
表1 AE对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠血清BUN
及肝组织MDA含量的影响
注释:△P<0.05,△△P<0.01相比对照组;★P<0.05,★★P<0.01相比模
型组。
2.2 AE对 D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠肝组织
T-SOD、GSH-Px活性的影响
与正常对照组比较,D-半乳糖衰老模型组小鼠
肝组织T- SOD、GSH- Px的活性均显著降低(P<
0.01)。与模型组相比,AE低、中、高剂量组均可显著
提高肝组织T- SOD的活性(P<0.01),AE中、高剂量
组能使肝组织GSH- Px活性升高,其差异具有统计学
意义(P<0.05或P<0.01),见表2。
表2 AE对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠肝组织T- SOD、
GSH- Px活性的影响(x±s,n=10)
注释:△△P<0.01相比对照组;★P<0.05,★★P<0.01相比模型组。
3 讨论
采用D-半乳糖建立亚急性衰老模型是一种经
典的方法[4]。D-半乳糖在醛糖还原酶的催化下,还原
成半乳糖醇,半乳糖醇不能被细胞进一步代谢,堆
积在细胞内影响正常渗透压,使细胞肿胀、功能障
碍、代谢紊乳,导致衰老的发生。
氧自由基和羟自由基是机体代谢产生的自由
基的最主要成分。超氧化物歧化酶(T- SOD)和谷胱
甘肽过氧化物酶(GSH- Px)是机体清除自由基最主
要的抗氧化酶。T- SOD能够特异性的清除氧自由基,
GSH- Px则能特异性的清除羟自由基[5- 6]。本实验表
明,AE能使D-半乳糖损伤小鼠肝组织T- SOD活性升
高,GSH- Px的活性增强。提示新疆紫草萘醌类色素
可能通过提高机体自由基防御酶系,起到延缓衰老
的作用。
自由基氧化不饱和脂肪酸产生的过氧化脂质,
可引起内皮细胞生物膜系统损伤,影响细胞的功
能,丙二醛(MDA)是过氧化脂质的代谢产物,其含
量反映了机体脂质过氧化损伤的程度。尿素氮
(BUN)主要是脂质、蛋白质代谢的产物,经肾小球
滤过,当肾实质受损害时,肾小球滤过率降低,BUN
血浓度增加。因此,血清尿素氮的含量反映了肾脏
损伤程度[7- 8]。实验结果显示,AE能使D-半乳糖衰老
小鼠升高的MDA、BUN含量降低。提示新疆紫草萘
醌类色素可能通过肾脏保护,减少脂质过氧化物的
产生,达到延缓衰老的目的。
文献报道,荼醌类色素苯环上的双羟基是清除
自由基的关键结构,AE延缓衰老作用可能与其母核
上的醌结构和5,8-位酚羟基有[9- 10];研究表明,紫草
分组
剂 量 BUN MDA
(g/kg·d) (mg/L) (nmol/mgprot)
对照组 — 181.71±23.22 1.44±0.34
模型组 — 213.84±32.77△ 2.56±0.87△△
溶剂组 — 215.72±48.45 2.74±0.58
阳性对照组 0.1 137.04±16.38★★ 2.08±0.43
AE低剂量组 0.2 127.67±27.23★★ 1.69±0.56★★
AE中剂量组 0.8 140.59±13.09★★ 1.60±0.34★★
AE高剂量组 2.4 153.98±14.98★★ 1.93±0.51★
分组
剂量 T- SOD GSH- Px
(g/kg·d) (U/mgprot) (U/mgprot)
对照组 — 68.94±10.60 53.19±11.30
模型组 — 35.77±6.07△△ 32.69±4.04△△
溶剂组 — 34.96±4.69 39.68±9.26
阳性对照组 0.1 61.75±15.43★★ 45.31±12.86★★
AE低剂量组 0.2 69.18±11.53★★ 36.71±5.36
AE中剂量组 0.8 63.32±8.27★★ 40.29±9.38★
AE高剂量组 2.4 63.72±6.99★★ 45.66±8.62★★
2
新疆中医药 2009年 第 27卷 第 4期(总第 122期)
素具有抗脂质过氧化、清除自由基等作用 [11],并推
测,AE中发挥抗衰老作用的主要是含有紫草素的萘
醌类成分。
参考文献
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质过氧化损伤的作用 [J]. 中国公共卫生学报,1998,17(6):
330- 332.
(收稿日期:2008-09-25;修回日期:2008-12-02)
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布亚胶囊为新疆药物研究所研制的抗乙肝新
药,该制剂以新疆地产维吾尔药材布亚乌热克(苦
豆子)中提取分离的抗病毒有效部位为原料,制成
肠溶胶囊,拟用于慢性乙型肝炎的抗病毒治疗。我
们对其进行体外抗乙肝病毒实验研究,为临床应用
提供药理学依据。
1 材料
1.1 药品及试剂
布亚胶囊,15mg(提取物)/粒,由新疆药物研究
所研制,批号061010,用细胞培养液配成8mg(提取
物)/mL的原溶液,过滤除菌后于4℃保存,临用时以
培养液稀释成所需浓度给药;阳性对照药拉米夫
定,葛兰素威康制药公司产品,批号05110011,以细
胞培养液配成所需浓度给药。MEM培养基,GiBco,
Invitrogen Corporation;胰酶,北京三博远志生物技
术有限公司;小牛血清、HEPES,中国医科院生物医
学工程研究所;乙肝病毒核酸定量检测试剂、
cPCR—荧光探针,中山大学达安基因股份有限公
司。
1.2 细胞株
布亚胶囊抗乙肝病毒作用的实验研究*
黄 华1, 王歆君2, 杨巧丽1, 刘 燕1
(1.自治区药物研究所药理室,新疆 乌鲁木齐 830004; 2.新疆制药厂,新疆 乌鲁木齐 830032)
摘 要 目的:观察布亚胶囊体外给药对乙肝病毒复制的抑制作用。方法:在2.2.15细胞培养中加样,第8天取
细胞培养上清,测定乙肝病毒DNA表达量,观察药物对病毒复制的影响。结果:布亚胶囊在2.2.15细胞培养中对乙肝
病毒DNA的复制有明显的抑制作用,两批实验其半数抑制浓度分别为62.5μg/mL和65.8μg/mL,选择指数为26.1和
24.8。结论:布亚胶囊具有明显的抗乙肝病毒作用。
关键词 布亚胶囊;乙肝病毒
*基金项目:新疆维吾尔自治区科技攻关和重点科技项目“创新药物研究与开发”(200533120)子课题“布亚胶囊的临床前研究”
(20053312003)。
作者简介:黄华(1965-),女,医学硕士,副研究员,硕士生导师。主要从事抗病毒中药、民族药的药效筛选研究及新药临床前药效研究。
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