全 文 ：［收稿日期］ 2009-12-10
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(30560059);自治区自然
科学基金项目(200821170)
［通讯作者］ * 王芳，Tel:0991-8762261，E-mail:wangfang1hao@
126. com
·化学与分析·
高效液相色谱法测定新疆紫草毛状根中乙酰紫草素的含量
贺金华1，芦韦华2，王芳2*
(1. 新疆维吾尔自治区药物研究所，乌鲁木齐 830004;
2. 新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830052)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定新疆紫草毛状根中乙酰紫草素含量的方法。方法:采用 YMC ODS-A C18
色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水-甲酸(700∶ 300∶ 0. 5);检测波长 275 nm;流速 1. 0 mL·min － 1;柱温 35 ℃。
结果:乙酰紫草素对照品在 51. 55 ～ 1 031. 0 mg·L － 1与峰面积线性关系良好，相关系数 r = 0. 999 9，平均回收率为 99. 81%，
RSD 2. 00%(n = 9)。结论:高效液相色谱法操作简单快速，重复性好，可用于新疆紫草毛状根中乙酰紫草素含量的测定。
［关键词］ 新疆紫草;毛状根;紫草色素;高效液相色谱法
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903(2010)10-0039-03
HPLC Determination of Acetylshikonin in Hairy Roots of Arnebia euchroma
HE Jin-hua1，LU Wei-hua2，WANG Fang2*
(1. Xinjiang Institute of Materia Medica，Urumqi 830004，China;
2. College of Agronomy ，Xinjiang Agricultural University ，Urumqi 830052，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for the determination of acetylshikonin in the Hairy Roots of
Arnebia euchroma (Royle)Johnst. Method:The RP-HPLC system consisting of YMC-Pack ODS-A C18 column
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)and a mixture of acetonitrile solution and water solution and formic acid solution(700∶
300∶ 0. 5)as the mobile phase was adopted;the detection wavelength was 275 nm;the flow rate was set at 1. 0 mL
·min － 1 and the column temperature was at 35 ℃ . Result:The linear range of acetylshikonin was 51. 55-1 031. 0
mg·L － 1(r = 0. 9 999). The average recovery (n = 9)was 99. 81% . Conclusion:The method is quick，simple and
reproducible for the determination of acetylshikonin in Hairy roots of A. euchroma.
［Key words］ Arnebia euchroma (Royle)Johnst;hairy roots ;shikonin;HPLC
紫草 Arnebia euchroma (Royle)Johnst.是我国民
间常用的中草药，以根入药，富含萘醌类化合物。此
类化合物具有显著的抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种药理
活性，在传统的中药处方中用做抗炎药，退热药和抗
菌药 ［1-4］。但由于大量采挖使这一天然资源日益贫
乏，加之化学合成工艺繁杂、收率低、成本高，采用毛
状根培养获得有用的化合物是解决资源匮乏、克服
化学合成困难的重要途径。本文报道新疆紫草毛状
根化学成分的含量测定，为紫草的应用提供科学
依据。
1 材料
日本岛津 LC 2010C 液相色谱仪和 CLASS-VP
V6. 14 SP1 数据工作站。新疆紫草干燥根及毛状根
株系 Aehr07 由本课题组提供。对照品乙酰紫草素
由新疆维吾尔自治区药物研究所自制，采用 UV，
IR，1H-NMR，13 C-NMR 和 MS 法鉴定结构，经 HPLC
法检查，纯度大于 98%。乙腈为色谱纯，甲酸、甲醇
均为分析纯，水为纯蒸水。
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2010 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16，No. 10
Aug.，2010
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2010.10.058
2 方法与结果
2. 1 色谱条件［5］ 色谱柱为 YMC-Pack ODS-A C18
柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm);流动相为乙腈-水-甲酸
(700 ∶ 300 ∶ 0. 5);检测波长 275 nm;流速 1. 0 mL·
min － 1;柱温 35 ℃，进样量 10 μL。此色谱条件下，对
照品和毛状根样品的色谱图如图 1 所示。
图 1 对照品(A)、毛状根(B)和新疆紫草根(C)色谱图
1. 乙酰紫草素
2. 2 紫草素 M9 液体培养基悬浮培养 100 mL 玻
璃三角烧瓶中添加 50 mL M9 液体培养基，在超净工
作台中添加经过继代培养的新疆紫草毛状根 3 g，培
养温度 25 ℃，转速 120 r·min － 1，培养 30 d 后，50
℃烘干毛状根待测。
2. 3 溶液制备
2. 3. 1 对照品溶液 称取乙酰紫草素对照品约 25
mg，精密称定，置于 25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定
容至刻度，摇匀，即得 1. 031 g·L － 1的对照品溶液。
2. 3. 2 供试品溶液 称取新疆紫草原植物干燥根
和毛状根各 10 g，精密称定，分别用石油醚回流提
取，共提取 2 次，每次溶剂用量为 100 mL，提取液合
并，减压浓缩干燥，得原植物根提取物和毛状根提取
物。原植物根提取物用甲醇溶解，置 100 mL 量瓶
中，并加甲醇定容至刻度，摇匀，精密移取 1. 2 mL，
置 10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取
续滤液，即得。毛状根提取物用甲醇溶解，置 25 mL
量瓶中，并加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2. 4 线性关系考察 精密吸取乙酰紫草素对照品
溶液 0. 5，1. 0，2. 5，5. 0，7. 5，10. 0 mL 置于 10 mL 棕
色量瓶中，用流动相定容，摇匀。精密吸取上述溶液
各 10 μL 注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品
浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。结
果表明乙酰紫草素在 51. 55 ～ 1 031. 0 mg·L － 1线性
关系良好。回归方程为 Y = 9. 77 × 106X + 1. 67 ×
104(r = 0. 999 9)。
2. 5 回收率试验 称取已知含量的毛状根供试品
约 5 g，精密称定，分别加入乙酰紫草素对照品
2. 835，3. 610，4. 383 mg，依毛状根供试品溶液的制
备方法制备低、中、高 3 个浓度的供试品溶液，按 2. 1
项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表 1。
表 1 毛状根中乙酰紫草素加样回收率测定
No.
称样量
/ g
样品中
含量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 5. 160 63 3. 612 44 2. 835 6. 416 0 98. 89
2 5. 142 81 3. 599 97 2. 835 6. 359 8 97. 35
3 5. 155 64 3. 608 95 2. 835 6. 342 7 96. 43
4 5. 180 60 3. 626 42 3. 610 7. 280 8 101. 23
5 5. 170 93 3. 619 65 3. 610 7. 196 4 99. 08 99. 81 2. 00
6 5. 152 26 3. 606 58 3. 610 7. 234 6 100. 50
7 5. 140 59 3. 598 41 4. 383 8. 082 7 102. 31
8 5. 193 74 3. 635 62 4. 383 8. 061 6 100. 98
9 5. 184 94 3. 629 46 4. 383 8. 080 8 101. 56
2. 6 精密度试验 称取新疆紫草毛状根约 10 g，精
密称定，依供试品溶液制备方法制备，同一供试品溶
液，重复进样 6 次，每次 10 μL，注入液相色谱仪，记
录乙酰紫草素色谱峰面积，RSD 为 0. 59%。
2. 7 重复性试验 取同一批的新疆紫草毛状根供
试品 6 份，每份约 10 g，精密称定，依供试品溶液制
备方法制备 6 份供试品溶液，进样 10 μL，注入液相
色谱仪，记录乙酰紫草素色谱峰面积，计算含量，
RSD 为 0. 41%。
2. 8 供试液稳定性试验 同一批供试品，按照
2. 3. 2 项下制备，室温放置，分别于 0，2，4，8，10，12，
24 h 进样，进样量 10 μL，记录乙酰紫草素色谱峰面
积，24 h 内样品含量稳定，RSD 为 0. 85%。
(下转第 43 页)
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16，No. 10
Aug.，2010
多糖含量存在差异，在 12 个不同产地药材中，湖北
宜恩最高为 1. 85 %，湖北惠始最低为 1. 22 % ;同
产地不同采收期药材中，5 月份最低 0. 91%，9 月份
最高 1. 37%。文献报道新鲜紫萁根茎粗多糖(总糖
含量为 95. 8%)得率为 2. 8% ［5］。经比较，发现文献
报道的鲜品紫萁贯众药材中多糖的含量明显高于本
实验方法测定的干品，因此采收加工方法对药材多
糖含量及药材质量的影响有待进一步研究。
［参考文献］
［1］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］. 一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:321，232.
［2］ 陶海南，刘辉，薛喜文，等 .紫萁的多糖抗菌活性的初步
研究［J］.南昌大学学报(理科版)，1996，20(4):306.
［3］ 戴金凤，李磊，刘辉，等 . 紫萁的研究进展［J］. 中草药，
1999，30(9):717.
［4］ 丁玲，王东，张中林，等 .不同商品地山药多糖含量的分
析［J］.辽宁中医药大学学报，2009，11(4):187.
［5］ 李磊，陶海南 . 紫萁多糖 POJI 的分离纯化和基本性质
研究［J］.食品科学，1999，6(11):11.
［责任编辑 顾雪竹
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
］
(上接第 40 页)
2. 9 样品含量测定 在前述色谱条件下，对新疆紫
草原植物根和不同培养条件的 3 批新疆紫草毛状根
中乙酰紫草素进行定量测定，计算新疆紫草原植物
根和毛状根中乙酰紫草素的含量，结果见表 2。
表 2 乙酰紫草素含量测定 %
No. 样品名 乙酰紫草素
1 毛状根 1 0. 070
2 毛状根 2 0. 139
3 毛状根 3 0. 197
4 原植物根 1. 084
3 讨论
曾分别用无水乙醇和石油醚提取新疆紫草毛状
根中的紫草素，提取 2 次，合并提取液，滤液浓缩至
干，残渣用甲醇溶解，并定量转移至 25 mL 量瓶中，
以甲醇稀释至刻度。结果表明石油醚提取物中乙酰
紫草素的提取率最高。
曾采用 M9 液体培养基悬浮培养的培养条件，
根据含量测定的结果又进行了 2 次优化，结果发现，
在第 2 次优化的培养条件下得到的毛状根中乙酰紫
草素的含量明显提高。
本实验采用 RP-HPLC 法测定了新疆紫草毛状
根中有效成分乙酰紫草素的含量，方法简单快速，重
复性好，以期为新疆紫草毛状根建立科学合理的质
量控制方法提供一定依据。
［参考文献］
［1］ 张明远，刘蕾，卢春凤，等 .紫草大黄合剂对四氯化碳致
小鼠急性肝损伤保护作用的观察［J］. 黑龙江医药科
学，2003，26(1):4.
［2］ 王文杰，白金叶，刘大培，等 . 紫草素抗炎及对白三烯
B4 生物合成的抑制作用［J］. 药学学报，1994，29(3):
161.
［3］ 吴寿金，赵泰，秦永祺 . 现代中草药成分化学［M］. 北
京:中国医药科技出版社，2002:146.
［4］ 高菊红 .紫草的资源、化学、药理和临床研究情况［J］.
中草药，1986，17(7):30.
［5］ 国家药典委员会 . 中国药典 ［S］. 一部 . 北京:化学工
业出版社，2005:238.
［责任编辑 顾雪竹］
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