全 文 ：·制剂与技术· 2011 年 3月第 8卷第 8期
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
血经草为报春花科排草属植物狼尾珍珠菜 Lysimachia
barystachys Bunge.的全草[1]，有活血调经，散瘀消肿，利水降压
的作用，多用于治疗月经不调、痛经、咽喉肿痛等症。 研究表
明，血经草的主要成分为黄酮类物质，包括槲皮素、芦丁、山
奈酚、金丝桃苷等[2]。 目前关于血经草的相关研究较少，总黄
酮的提取工艺研究更是鲜见报道。本文通过正交试验设计考
察了回流提取法中各因素对于血经草总黄酮提取率的影响，
旨在通过确立最佳提取工艺，为血经草的进一步开发利用提
供理论依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
756MC 型紫外-可见分光光度计（上海棱光技术有限公
司）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器
厂）；UV-7504PC 紫外可见分光光度计 （上海欣茂仪器有限
公司）；ESJ 万分之一电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）。
1.2 试药
芦丁标准品 （中国药品生物制品检定所批号：100080-
200707），其他试剂均为分析纯。血经草全草采自大庆市哈尔
滨医科大学大庆校区附近，由哈尔滨医科大学大庆校区药学
系刘金杰教授鉴定为报春花科植物狼尾珍珠菜 Lysimachia
barystachys Bunge.，洗净后放入烘箱 60℃干燥，粉成粗粉，备用。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁标准品 10 mg，用 60%
乙醇溶液定溶于 50 ml量瓶中，配成浓度为 0.2 mg/ml的溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 称取血经草全草 1 g， 用 100 ml
60%乙醇回流提取 1 h，放冷，过滤，备用。
2.2 检测波长的选择
取对照品溶液 3 ml，置于 10 ml量瓶中，加 60%乙醇成 5 ml，
加 5%NaNO2 溶液 0.3 ml，放置 6 min；加 10%Al（NO3）3 溶液
0.3 ml，放置 6 min；加 1 mol/ml NaOH 溶液 4 ml，加 60%乙醇
稀释至刻度，摇匀，放置 10 min 后，在紫外可见分光光度计
上，于 400～600 nm处测定最大吸收波长，最终确定为 510 nm。
2.3 标准曲线的绘制[3]
精密量取对照品溶液 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml 于 6只
10 ml 量瓶中，分别用 60%乙醇补充至 5 ml，加 5%NaNO2溶
液 0.3 ml，放置 6 min；加 10%Al（NO3）3溶液 0.3 ml，放置 6 min；
加 1 mol/ml NaOH 溶液 4ml，加 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，
放置 10 min 后，以 0.0 ml 为空白对照，在 510 nm 处测定吸
光度。 以对照品溶液浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐
标，绘制标准曲线。 回归方程为 A=13.659C-0.0011（r=0.999 9，
n=5）。 结果表明芦丁对照品在浓度为 0.05～0.08 mg/ml 范围
内线性关系良好。
2.4 精密度试验
取上述供试品溶液，按“2.3”项下方法操作，连续测定 6次
血经草总黄酮的提取工艺研究
于春月 1，张特立 2，刘新华 1，刘金杰 1
1.哈尔滨医科大学大庆校区药学系，黑龙江大庆 163319；2.大庆市人民医院，黑龙江大庆 163316
[摘要] 目的：优选血经草中总黄酮的最佳提取工艺。 方法：以芦丁为评价指标，考察黄酮提取率，通过正交试验对回
流法提取黄酮的工艺进行优化。 结果：回流提取法的最佳工艺条件为，以 1 g 血经草为原料，100 ml 60%乙醇为溶剂
提取，提取时间为 2 h，提取次数为 1 次；在该条件下，总黄酮的提取率为 1.56%，RSD 为 1.43%（n=5）。 结论：本工艺
合理、可行。
[关键词] 血经草；分光光度法；黄酮；正交试验；提取工艺
[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）03（b）-060-02
Study on optimal technology for extracting flavonoids from Lysimachia
barystachys Bunge.
YU Chunyue1, ZHANG Teli2, LIU Xinhua1, LIU Jinjie1
1.Department of Pharmacy, Daqing Campus of Harbin in Medical University, Daqing 163319, China; 2. Peoples Hospital
of Daqing, Daqing 163316, China
[Abstract] Objective: To optimize the best extraction technology of Flavonoids in Lysimachia barystachys Bunge.. Methods:
Optimize the extraction technology on indexes of rutin content and the extraction ratio of Flavonoids by orthogonal test.
Results: The optimal condition of extraction technology as follows: 100 ml ethanol with the concentration of 60% per gram
of Lysimachia barystachys Bunge., extraction time of 2 h，extraction times of 1 time; in this condition, the extraction rate of
flavonoids was 1.56% with a RSD of 1.43% (n=5). Conclusion: The extraction technology is reasonable and practical.
[Key words] Lysimachia barystachys Bunge.; Spectrophotometry; Flavonoids; Orthogonal design; Extracting technology
[基金项目] 黑龙江省卫生厅科技项目（项目编号：2007-491）。
[作者简介] 于春月（1979-），女，硕士学历，主要从事天然药物化学成分
研究。
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2011 年 3月第 8卷第 8期 ·制剂与技术·
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吸光度，并设立空白对照，结果 RSD=0.99%，表明仪器精密
度良好。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液，按“2.3”项下方法操作，分别放置 0 min、
20 min、40 min、60 min、1 h、2 h、3 h、4 h 后测定吸光度，结果
在 1 h 内 RSD＜2%，表明样品不稳定，应在 1 h 内测量。
2.6 重现性试验
取上述药材样品，按照样品溶液制备方法平行制备 6份，
依法测定，RSD=1.91%，表明本法重现性良好。
2.7 加样回收率试验[4]
向已知质量分数的样品提取液中加入一定量的芦丁对
照品溶液进行试验， 结果显示平均回收率为 101.8%，RSD=
2.11%，表明该法回收率良好。
2.8 正交试验设计[5-6]
采用 L9（34）正交试验设计法，对回流提取法提取血经草
中总黄酮的影响因素进行了考察，见表 1。
表 1 正交试验因素水平表
Tab.1 Factors and levels of orthogonal test
2.9 样品含量测定
取血经草粉末约 1 g， 置于 100 ml 圆底烧瓶中回流提
取，按“2.8”项下方法进行正交试验。 精密吸取滤液 3 ml 于
10 ml 量瓶中，按“2.3”项下方法操作进行显色，测定吸光度，
并计算总黄酮提取率，结果见表 2。
由表 2 结果可知，以血经草为原料回流提取总黄酮各因
素对黄酮提取率的影响顺序为：D＞C＞B＞A， 即提取次数>提
取时间＞乙醇用量＞乙醇浓度。 最佳工艺为 A1B3C3D1，即 60%
乙醇 100 ml，回流提取 2 h，提取 1 次；在该条件下，黄酮提取
率为 1.56%，RSD=1.43%（n=5）。
3 讨论
正交试验部分先采用单因素法确立最佳水平范围，后采
用多因素法考察整体影响度，这样就避免了关键水平点被漏
掉的错误发生， 从而使整个实验设计更具有科学性和严谨
性。
硝酸铝显色法测定总黄酮的原理是：铝离子与黄酮母核
中的 3 位（或 5位）上的羟基和 4 位羰基配合成稳定结构，从
而可用比色法进行测量。血经草中报道的化学成分包括槲皮
素、芦丁、山奈酚、金丝桃苷以及一些黄酮苷类成分，它们结
构中都普遍具有 3 位（或 5位）羟基，因此选用此法进行含量
测定。 同时在预实验中以芦丁、槲皮素及山奈酚的混合溶液
作为对照品溶液，在血经草全草的 HPLC 图谱中显示，芦丁
含量最高且分离度好，故选用芦丁作为对照品溶液。
由于样品溶液显色后有大量絮状沉淀出现，故采用先过
滤后测定的方法进行含量测定，但显色后稳定性稍差，建议
在 1 h 内测量完成。
[参考文献]
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（收稿日期：2011-01-10）
1
2
3
水平
60%
70%
80%
50 ml
80 ml
100 ml
1 h
1.5 h
2 h
1 次
2 次
3 次
因素
乙醇浓度（A） 乙醇用量（B） 提取时间（C） 提取次数（D）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
K1
K2
K3
R
水平
1
1
1
2
2
2
3
3
3
2.329
2.238
1.865
0.776
0.746
0.622
0.155
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1.929
2.031
2.472
0.643
0.677
0.824
0.181
1
2
3
2
3
1
3
1
2
1.797
2.195
2.440
0.599
0.732
0.813
0.214
1
2
3
3
1
2
2
3
1
2.624
2.121
1.687
0.875
0.707
0.562
0.312
总黄酮（%）
0.749
0.748
0.832
0.539
0.967
0.732
0.641
0.316
0.908
因素
A B C D
表 2 正交试验设计及结果
Tab.2 Design and results of orthogonal test
(36):2845-2846.
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（收稿日期：2011-01-12）
（上接第 59页）
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