全 文 ：热 带 农 业 科 技 2013,36(2）
Tropical Agricultural Science & Technology
暗褐网柄牛肝菌［Phlebopus portentosus（Berk.
& Broome）Boedijn]，隶属于小牛肝菌科 Boletinellace-
ae，脉柄牛肝菌属 Phlebopus[1]，主要分布在斯里兰
卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利
亚、新西兰等国家，在我国主要分布在云南、海南、
广西等地[2-7]，属典型热带牛肝菌。暗褐网柄牛肝
菌营养丰富、味道鲜美，是云南西双版纳重要的野
生食用菌之一。云南省热带作物科学研究所已在
暗褐网柄牛肝菌人工、半人工栽培方面取得突破，
成功栽培出子实体，产生了一定的经济效益和社
会效益。深层发酵培养是扩大菌种的主要方式之
一，目前在国内尚未见有关暗褐网柄牛肝菌深层
发酵培养的报道。本试验旨在通过对其深层发酵
培养的适宜发酵培养基和发酵条件的研究，为暗
褐网柄牛肝菌的开发利用提供参考，并为暗褐网
柄牛肝菌的人工、半人工栽培提供菌种支持。
1 材料和方法
1.1 材料
暗褐网柄牛肝菌子实体，采自云南省景洪市的
西双版纳热带花卉园。暗褐网柄牛肝菌由云南省
热带作物科学研究所植病与微生物研究室保存。
1.2 培养基
母种培养基：葡萄糖 20.0 g，马铃薯 200.0 g，
KH2PO4 1.0 g，MgSO4·7H2O 1.0g，酵母膏 2 g，琼脂
18 g，pH自然，水 1 000 mL。
1.3 方法
1.3.1 菌种活化
暗褐网柄牛肝菌菌丝深层发酵培养试验
王文兵，张春霞，何明霞，刘 静，纪开萍*
（云南省热带作物科学研究所，云南 景洪 666100）
摘要：深层发酵培养是扩大菌种的主要方式之一，采用摇瓶法对暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portento-
sus）适宜的碳源、氮源、发酵条件进行研究，筛选出适合暗褐网柄牛肝菌生长的最佳碳源为甘露醇，
其菌丝生物量平均为 40.3 g/L，最佳氮源为酵母膏，其菌丝生物量平均为 95.8 g/L；发酵条件为：震荡
速度 130 r/min，培养温度 28℃，接种量在 250 mL 三角瓶装液量 100 mL 的情况下为 1.62cm2，培养周期
10 d。
关键词：暗褐网柄牛肝菌；深层发酵；菌丝体
中图分类号：S567.3 文献标识码：A 文章编号：1672-450X（2013）02-0028-03
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Studies on Submerged Fermentation of Phlebopus portentosus Mycelium
WANG Wen-bing，ZHANG Chun-xia，HE Ming-xia, LIU Jing, JI Kai-ping *
Yunnan Tropical Crops Research Institute, Jinghong 666100, China
Abstract: Submerged fermentation is one of the main ways of expanding strains. Suitable carbon source, nitrogen source, fermen-
tation conditions of Phlebopus portentosus were studied using the shake flask method. The results show that the best carbon
source is mannitol, mycelia biomass average for 40.3g / L. The best nitrogen source is yeast extract, mycelia biomass average for
95.8g / L. The fermentation conditions are as follows: the shaker rotation speed is 130r/min, the temperature is 28 ℃，the opti-
mal culture media capacity is 100ml in 250ml-flask, mycelium block is 1.62㎝2, culture period is 10 days.
Key words: Phlebopus portentosus; submerged fermentation; mycelium
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收稿日期：2012－11－22
基金项目：国家自然科学基金资助项目（31060271),
农业科技成果转化资金项目（2011GB2F300004）,云南省农垦集团项目（298）
*通讯作者：jkpcnlc@126.com
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DOI:10.16005/j.cnki.tast.2013.02.011
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将暗褐网柄牛肝菌菌种接入母种培养基中，放
置平皿，在 28℃下活化培养，待菌丝长满备用。
1.3.2 液体培养
配制液体培养基，在 250 mL 三角瓶装液量
100 mL，在 124℃下灭菌 20 min，待冷却后接入菌
种，在 130 r/min，28℃条件下振荡培养 10 d。
1.3.3 试验观察
以 KH2PO4 1.0 g，MgSO4·7H2O 1.0 g，酵母膏 2.0 g
为单因子基础培养基，分别以 20 g 白糖、葡萄糖、
麦芽糖、果糖、甘露醇为碳源处理，每个处理 5个重
复，测定不同碳源对暗褐网柄牛肝菌菌丝体生长
的 影 响 ；以 甘 露 醇 20.0 g，KH2PO4 1.0 g，MgSO4·
7H2O 1.0 g 为基础培养基，分别以 2 g 酵母膏、牛肉
膏、蛋白胨，酒石酸铵、硝酸铵为氮源处理，每个处
理 5个重复，测定不同氮源对暗褐网柄牛肝菌菌丝
生长的影响；将菌种接种于 250 mL 三角瓶装液量
100 mL 的三角瓶中，然后分别置于 90、110、130、
150、170 r/min 不同振荡速度，28℃条件下振荡培养
10 d，测定不同振荡速度对暗褐网柄牛肝菌菌丝生
长的影响；将已接种的摇瓶分别放置于 18、21、23、
25、27、29、30℃不同温度，130 r/min 振荡培养 10 d，
测定不同培养温度对暗褐网柄牛肝菌菌丝球生长
的影响；分别将 0.81、1.62、2.43 cm2 的菌块接入
250 mL 三角瓶装液量 100 mL 的三角瓶中，观察不
同接种量对菌丝球生长的影响；接种于 250 mL 三
角瓶装液量 100 mL，28℃，130 r/min 振荡培养，测定
不同培养时间对暗褐网柄牛肝菌菌丝球生长的影
响。
1.3.4 菌丝体生物量测重
将发酵后的菌丝体利用真空泵滤去菌液，在
45℃烘干，用天平精确称重。
2 结果与分析
2.1 不同碳源对菌丝体生长的影响
由图 1可以看出，暗褐网柄牛肝菌对不同碳源
的利用情况不一样，其中以甘露醇最好，菌丝体生
物量平均为 40.3 g/L，而且菌丝体生长均匀、密度
高，其它依次为麦芽糖、白糖、葡萄糖、果糖。综合
观察分析得出，甘露醇为暗褐网柄牛肝菌菌丝体
培养的最佳碳源。
2.2 不同氮源对菌丝体生长的影响
由图 2可以看出，虽然暗褐网柄牛肝菌对不同
氮源都可以利用，但以酵母膏最好，菌丝体生物量
平均为 95.8 g/L，且菌丝体生长快、均匀，其次为牛
肉膏和硝酸铵。通过综合观察分析得出，酵母膏
为暗褐网柄牛肝菌菌丝体培养的最佳氮源。
2.3 不同振荡速度对菌丝生长的影响
试验结果（表 1）表明，不同振荡速度对暗褐网
柄牛肝菌菌丝体生物量有明显的影响：随着振荡
速度加快，菌丝球数量不断增多，当振荡速度达到
130 r/min 时，菌丝体生物量达到顶峰 48.8 g/L，随后
表1 振荡速度对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的影响
摇床转速
/r·min
-1
菌丝体生物量
/g·L
-1
菌丝球生长情况
90 35.8 菌丝球生长缓慢，小、数量少
110 48.5 菌丝球生长稍快，菌丝球细而密
130 48.8 菌丝球生长较快，菌丝球细而密
150 48.3 菌丝球生长较快，菌丝球细而密
170 47.7 菌丝球生长较快，菌丝球细而密
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
酵母膏 酒石酸铵 蛋白胨 牛肉膏 硝酸铵
氮源
菌
丝
球
生
物
量
/
g
·
L
-
1
图2 不同氮源对菌丝生长的影响
图1 不同碳源对菌丝生长的影响
0
10
20
30
40
白糖 葡萄糖 麦芽糖 果糖 甘露醇
碳源
菌
丝
球
生
物
量
/
g
·
L
-
1
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逐步减少。暗褐网柄牛肝菌菌丝球生长的最佳振
荡速度为130 r/min。
2.4 不同培养温度对菌丝体生长的影响
试验结果（表 2）表明，不同培养温度对暗褐网
柄牛肝菌菌丝体生长有明显的影响，生物量随着
温度的升高而明显增多，菌丝体在 18～30℃范围
内都能生长，18～24℃范围内菌丝体生长缓慢，
26～30℃明显加快，且在 28℃菌丝体最好，菌丝体
生物量最高。暗褐网柄牛肝菌菌丝球生长最适温
度为28℃。
2.5 不同接种量对菌丝体生长的影响
暗褐网柄牛肝菌菌丝体生物量随着接种量的
加大而增多，由图 3可知，接种量加大，菌丝体生物
量增大，为了节约成本宜选用1.62 cm2的接种量。
2.6 不同培养时间对菌丝体生长的影响
观察发现，暗褐网柄牛肝菌经过 5 d 培养出现
菌丝球，菌丝球黄色，菌液褐色。图 4结果表明，暗
褐网柄牛肝菌菌丝球数量在一定时间范围内随着
培养时间延长而增多，到了顶峰后不再增多，接着
出现自溶现象，所以 1～5 d为适应期，5～10 d为增
殖期，10 d以后为衰老期。
3 小结
试验表明，暗褐网柄牛肝菌对供试碳源、氮源
都有不同程度的利用，其中以甘露醇为最佳碳源，
其生物量平均为 40.3 g/L；酵母膏为最佳氮源，其生
物 量 平 均 为 95.8 g/L。 发 酵 条 件 为 震 荡 速 度
130 r/min，培养温度 28℃，接种量在 250 mL 三角瓶
装液量 100 mL的条件下为 1.62 ㎝ 2，培养周期 10 d。
参考文献：
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栽培及“宿主树”根系上菌丝生长的持续性［Ｊ］．微生物
学通报，2009，36（3）：377-382．
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
5 6 7 8 9 10 11
培养时间/d
菌
丝
球
生
物
量
/
g
·
L
-
1
图4 培养时间对暗褐网柄牛肝菌菌丝体生长的影响
表2 培养温度对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的影响
培养温度
/℃
菌丝体生物量
/g·L
-1
菌丝球生长情况
18 5.8 菌丝球生长慢，几乎不生长
22 21.3 菌丝球生长慢，菌丝球小
24 32.1 菌丝球生长慢，菌丝球小
26 43.1 菌丝球生长稍快，菌丝球小而密
28 48.8 菌丝球生长较快，菌丝球小而密
30 48.7 菌丝球生长较快，菌丝球小而密
图 3 不同接种量对菌丝体生物量的影响
0
10
20
30
40
50
60
70
0.81 1.62 2.43
接种量/cm
2
菌
丝
球
生
物
量
/
g
·
L
-
1
-- 30