全 文 ：［收稿日期］ 20131019(001)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81202885);国家科技部“十二五”重大新药创制项目(2011zx09102-007-03) ;广东省科技计划项目
(2011A030100013) ;广州市科技计划项目(12A062131631) ;广东省科技厅科技计划项目(2010B030700044)
［第一作者］ 张慧，在读硕士，从事中药及复方化学成分研究，Tel:13760689572，E-mail:zhanghui2950@ 163. com
［通讯作者］ * 沈志滨，博士，教授，从事中药及复方化学成分研究，Tel:13724866019，E-mail:szb8113@ 126. com
鸭脚木皮中总三萜的提取工艺优化
张慧，尹永芹，汤文伟，黄永昌，贾丽娜，杜冠峰，沈志滨*
( 广东药学院中药学院，广州 510006)
［摘要］ 目的:建立鸭脚木皮中总三萜的含量测定方法并优选其提取工艺。方法:采用香草醛-高氯酸-浓硫酸法测定总
三萜含量，检测波长 540 nm。以总三萜提取率为指标，通过正交试验考察料液比、提取时间和提取次数对鸭脚木皮中总三萜
提取工艺的影响。结果:以齐墩果酸为对照品，线性范围 0. 083 2 ～ 0. 280 02 mg，加样回收率 99. 36%。最佳提取工艺为加 10
倍量水煎煮提取 3 次，每次 1 h;总三萜平均提取率 2. 94%，ＲSD 0. 5%。结论:建立的总三萜含量测定方法稳定可靠，优选的
提取工艺合理可行，为鸭脚木皮有效部位的开发提供参考。
［关键词］ 鸭脚木皮;总三萜;香草醛-高氯酸-浓硫酸法;正交试验;提取工艺
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284． 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)08-0005-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfix． 2014080005
Optimization of Extraction Technology for Total Triterpenoids from
Bark of Schefflera octophylla
ZHANG Hui，YIN Yong-qin，TANG Wen-wei，HUANG Yong-chang，JIA Li-na，DU Guan-feng，SHEN Zhi-bin*
(School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:To establish a determination method of total triterpenoids in bark of Schefflera
octophylla and optimize its extraction technology． Method:Vanillin-perchloric acid-concentrated sulfuric acid
method was adopted to determine the content of total triterpenoids with detection wavelength of 540 nm． Based on
single-factor tests，L9 (3
4)orthogonal test was designed to investigate effects of solid-liquid ratio，extracting time
and times on extraction technology by taking yield of total triterpenoids as index． Ｒesult:With oleanolic acid as
the reference substance，there was a good linear relationship in 0. 083 2-0. 280 02 mg，the average recovery was
99. 36% ． Optimal extraction process was as follows:extracted thrice with 10 times the amount of water，1 h for
each time;Under these conditions，average extraction ratio of total triterpenoids was 2. 94% with ＲSD of 0. 5% ．
Conclusion:This established method for determination of total triterpenoids was stable and reliable，optimized
extraction technology was reasonable and feasible，which could provide theoretical basis for development of
effective parts from bark of S． octophylla．
［Key words］ bark of Schefflera octophylla; total triterpenoids; vanillin-perchloric acid-concentrated
sulfuric acid method;orthogonal test;extraction technology
鸭脚木主要分布于云南、广东、广西等地，主要
含五环三萜及其苷类成分，目前已分离出 100 多种
化合物［1］，具有抗肿瘤、抗病毒、镇痛抗炎等药理活
性［2］，民间多用于治疗风湿骨痛、跌打肿痛、驳骨止
血、咽喉肿痛等。前期研究发现鸭脚木皮乙醇提取
物的三氯甲烷萃取部位具有明显的镇痛抗炎作用，
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第 20 卷第 8 期
2014 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 8
Apr．，2014
通过对该部位进行分离鉴定，发现大部分为五环三
萜类成分。近期研究发现鸭脚木皮的水提液中含有
大量萜类成分，富集纯化使总三萜纯度 ＞ 50%，药效
学试验验证该部位具有显著的镇痛抗炎作用。本实
验拟建立一种紫外比色法测定鸭脚木皮中总三萜含
量，结合预试验和前期研究，采用正交试验优选鸭脚
木皮中总三萜的提取工艺，为鸭脚木皮有效部位的
开发研究提供参考。
1 材料
UV-2450 型紫外-可见分光光度计(日本岛津)，
XP6 型 1 /100 万电子天平(梅特勒-托利多公司)，
TP-602 型电子天平(丹佛仪器北京有限公司)。鸭
脚木皮购于广州市清平药材市场，经广东药学院刘
基柱副教授鉴定为鸭脚木 Schefflera octophylla
(Lour．)Harms的树皮;齐墩果酸对照品(中国药品
生物制品检定所，批号 110709-200505)，香草醛(天
津市福晨化学试剂厂)，试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照
品 5. 022 mg 置于 50 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻
度，摇匀，即得。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取鸭脚木粉末
(过 60 目筛)1. 00 g，置于 100 mL具塞锥形瓶中，加
入 95%乙醇 50 mL，称定质量，超声提取 30 min，补
足失重，过滤，取续滤液 30 mL，蒸干，加甲醇溶解定
容至 25 mL量瓶中，摇匀，即得。
2. 3 检测波长的选择 取一定量对照品溶液和供
试品溶液分别置于 10 mL 具塞试管中，水浴蒸干溶
剂，加入 1%香草醛-高氯酸溶液 0. 5 mL，60 ℃水浴
加热 15 min，立即冰水浴 2 min，加入 77% 硫酸
5 mL，摇匀，以空白试剂为对照，利用紫外-可见分光
光度计在 200 ～ 800 nm 进行全波长扫描［3］，结果发
现二者均在 540 nm处有最大吸收，故确定检测波长
540 nm。
2. 4 显色条件考察 通过预试验考察香草醛-高氯
酸溶液的浓度及用量、显色时间和显色温度等条件，
确定最佳显色条件为取适量对照品溶液或供试品溶
液置于具塞试管中，水浴蒸干，加入 1. 5%香草醛-高
氯酸溶液 0. 6 mL，于 70 ℃水浴加热 15 min，立即冰
水浴 2 min，加入 77%浓硫酸 5 mL，摇匀，以空白试
剂为对照，于 540 nm处测定吸光度(A)。
2. 5 标准曲线的绘制 精密量取齐墩果酸对照品
溶液 0. 8，1. 2，1. 6，2. 0，2. 4，3. 2 mL，分别置于
10 mL具塞试管中，按 2. 4 项下显色条件测定 A［4］，
以质量为横坐标，A 为纵坐标，得回归方程 Y =
3. 533 5X － 0. 055 9 (r = 0. 999 1)，线性范围
0. 083 2 ～ 0. 280 02 mg。
2. 6 方法学考察［5］
2. 6. 1 稳定性试验 精密吸取供试品溶液
0. 3 mL，按 2. 4 项下显色条件测定，每隔 30 min 测
定 1 次 A，测定 5 次，结果发现供试品溶液在 120
min内稳定性良好，ＲSD 1. 65%，即样品宜在显色后
120 min内测定。
2. 6. 2 精密度试验 精密吸取供试品溶液
0. 3 mL，按 2. 4 项下显色条件平行测定 6 次，结果
ＲSD 2. 67%，表明仪器精密度良好。
2. 6. 3 重复性试验 称取药材粉末 6 份(过 60 目
筛)，每份 1. 00 g，按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，
按 2. 4 项下显色条件测定，计算 ＲSD 2. 81%，表明
该方法重复性良好。
2. 6. 4 加样回收率试验 精密称取鸭脚木皮药材
粉末(过 60 目筛)约 0. 5 g，共 6 份，各精密加入齐墩
果酸对照品 0. 702 8 mg，按 2. 2 项下方法制备供试
品溶液，按 2. 4 项下方法测定，结果见表 1。
表 1 鸭脚木皮中总三萜含量测定的加样回收率试验
No．
称样量
/ g
样品中
质量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
1 0. 500 2 15. 32 16. 02 99. 60
2 0. 500 9 15. 35 16. 04 98. 18
3 0. 500 5 15. 33 16. 07 105. 30
99. 36 3. 56
4 0. 500 2 15. 32 15. 99 95. 33
5 0. 500 5 15. 33 16. 04 101. 00
6 0. 500 7 15. 34 16. 02 96. 76
2. 7 提取工艺优选 预试验确定采用水煎煮法提
取，选取料液比、提取时间、提取次数为考察因素，以
总三萜提取率为指标，采用 L9(3
4)正交表进行试
验，因素水平见表 2。称取同批鸭脚木皮药材 9 份，
每份 50 g(过 60 目筛)，试验安排及结果见表 3，方
差分析见表 4。
表 2 鸭脚木皮中总三萜提取工艺正交试验因素水平
水平 A料液比 / g·mL －1 B提取时间 /h C提取数 /次
1 1∶ 8 1 1
2 1∶ 10 2 2
3 1∶ 12 3 3
由直观分析可知，各因素对鸭脚木皮中总三萜
含量的影响顺序为 C ＞ A ＞ B。方差分析表明 A，C
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 8
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因素对总三萜含量的影响具有显著性差异，B 因素
则无显著性影响，结合生产效率等考虑，确定最佳工
艺条件为 A2B1C3，即加 10 倍量水煎煮提取 3 次，每
次 1 h。
表 3 鸭脚木皮中总三萜提取工艺正交试验安排及直观分析
No． A B C D(空白) 总三萜提取率 /%
1 1 1 1 1 1. 14
2 1 2 2 2 2. 17
3 1 3 3 3 2. 73
4 2 1 2 3 2. 22
5 2 2 3 1 2. 96
6 2 3 1 2 1. 34
7 3 1 3 2 2. 92
8 3 2 1 3 1. 62
9 3 3 2 1 2. 46
K1 6. 04 6. 28 4. 10 6. 56
K2 6. 52 6. 75 6. 85 6. 43
K3 7. 00 6. 53 8. 61 6. 57
Ｒ 0. 96 0. 47 4. 51 0. 14
表 4 提取工艺方差分析
方差来源 SS f F P
A 0. 154 2 38. 50 ＜ 0. 05
B 0. 037 2 9. 25 ＞ 0. 05
C 3. 444 2 861. 00 ＜ 0. 01
D(误差) 0. 000 2
注:F0. 05(2，2)= 19，F0. 01(2，2)= 99。
2. 8 验证试验 精密称取同一批鸭脚木皮药材粉
末 3 份，每份 50 g(过 60 目筛)，按优选的工艺条件
提取，计算总三萜提取率 2. 94%［6］，ＲSD 0. 5%，表
明该工艺方法稳定可靠。
3 讨论
总三萜的含量测定多采用香草醛-高氯酸-冰醋
酸法，但预试验对该方法进行考察时发现稳定性较
差，经调整发现香草醛-高氯酸-浓硫酸法的稳定性
很好，且具有较高的精密度、准确性和重复性。试验
过程中发现样品中含有水分会影响结果的准确性，
故样品显色前务必蒸干。由于未考察显色剂中香草
醛-高氯酸溶液的稳定性，为保证结果的准确性，显
色剂均现配现用。
［参考文献］
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然产物研究与开发，2006，18(5):873．
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［责任编辑 仝燕
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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