全 文 ：中国药物应用与监测 2007年第 6期
论 著
旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究
万鲲 1,高申 2(1解放军总医院药材处,北京,100853;2第二军医大学药学院,上海,200433)
摘要 目的:观察旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:体
外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的旋复花提取物,24h后观察细胞形态学,以 LDH为指标观察细胞
毒性,用MTT法检测其增殖活性。结果:不同浓度的旋复花提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在 500μg/mL
以下无明显的细胞毒作用。结论:旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生
性瘢痕的应用前景。
关键词 烧伤;增生性瘢痕;成纤维细胞;旋复花
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1672-8157(200)06-0029-03
Study of the inhibitory effect of extraction of Flos Inulae on hypertrophic scar-derived fibroblasts
WANKun1, GAOShen2(1 Department ofPharmacy, PLAGeneral Hospital, Beijing, 100853;2 College ofPharmacy, Second MilitaryMedical U-
niversity, Shanghai, 200433)
ABSTRACT Objective:To explore the effect of Flos Inulae on postburn hypertrophic scar-derived fibroblasts.Methods:Hyper-
trophic scar-derived fibroblasts were harvested and cultured in vitro.The proliferation activity ofthe fibroblasts are examined by MTT
method.The cellular morphology, proliferation activity and the cytotoxicity of the drug were observed after 24 hours of culture.Re-
sults:The fibroblast morphology could be altered by any concentration of Flos Inulae solution.Furthermore, the cell counts and the
cellular proliferation activitywere decreased obviouslybythe treatment ofFlos Inulae.Conclusion:The cellular morphologyand pro-
liferation activity of postburn hypertrophic scar-derived fibroblasts are inhibited by Flos Inulae in dose-dependent pattern, and it
might be a potential agent for the prevention and treatment ofhypertrophic scars.
KEY WORDSBurn;Hypertrophic scar;Fibroblast;Flos Inulae
增生性瘢痕(Hypertrophic scars,HS)是烧创伤愈
合后所遗留的皮肤异常病变,它的防治尚无有效方法。
临床药物治疗主要以激素类为主,毒副作用大,疗效
欠佳。通过查阅文献,选取几十种中草药进行筛选,得
到了抑制作用较强的中草药旋复花(Flos Inulae) ,又称
欧亚旋复花(Inula Britannical) ,属菊科、多年生草本植
物,其头状花序采收晒干后既可生用也可蜜炙用,其味
辛散苦降,具有降肺胃之气和消痰止咳之功效,是治疗
因肺胃气逆而导致咳嗽、呃逆、呕吐的要药。本实验观
察旋复花提取物对增生性瘢痕成纤维细胞形态和增
殖的影响,为其在临床防治增生性瘢痕方面提供实验
依据[1]。
1材料与方法
1.1材料
旋复花(Flos Inulae)生药:北京同仁堂;DMEM、胰
蛋白酶:美国Gibco公司;胎牛血清:中国天津血清厂;
MTT:美国Sigma公司;DMSO:美国进口分装。
1.2方法[2]
1.2.1细胞培养与药物配制
手术中取下的增生性瘢痕组织,患者年龄在30岁
以下,病程半年~2年。在无菌培养皿中漂洗,去除血污
及脂肪,剪碎成约 1mm3的小块,培养于含胎牛血清
10%、100IU/L的青霉素、100!g/L链霉素的 DMEM培
养液中,置37℃CO2培养箱中培养。细胞长成致密单
[作者简介] 万鲲,男,在读博士,研究方向:药剂药理学。 Tel:(010)66939246
通讯作者:高申,男,教授,博士生导师。
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中国药物应用与监测 2007年第 6期
论 著
层后,用2.5g/L胰蛋白酶消化,以 1:3传代,第 3代~9
代细胞用于实验。旋复花生药 500g,65%的乙醇冷浸
24h,浓缩至干,称量提取物重量,每克提取物相当于生
药26.5g。
1.2.2乳酸脱氢酶(LDH)的测定
取对数生长期的细胞,以 105个/mL细胞浓度接
种于24孔培养板培养,每孔接种500!L,置CO2箱培养
7d,3d换液一次。加条件培养基分为实验组(加500μL
旋复花提取物,浓度分别为15.63、31.25、62.50、125.00、
250.00、500.00μg/mL)和对照组(加 500μL的 DMEM)
继续培养 24h,取上清液,用全自动生化分析仪测定
LDH活性值。
1.2.3细胞形态学观察
取对数生长期的细胞,以105个/mL细胞浓度接种
于 24孔培养板培养,每孔接种 500μL,置 CO2箱培养
8h后分为实验组(加 500μL旋复花提取物,浓度分别
为 15.63、31.25、62.50、125.00、250.00、500.00μg/mL)和
对照组(加 500μL的 DMEM)继续培养 24h,于倒置显
微镜下观察、照相。
1.2.4MTT比色法测定细胞增殖状况
取对数生长期的细胞,以 105个/mL细胞浓度接
种于96孔培养板培养,每孔接种 100μL,加 100μL培
养液,置 CO2箱培养 12h,吸弃上清液,按分组加条件
培养液(浓度分别为0、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00、
500.00μg/mL)200μL继续培养24h,吸弃上清液10μL,
加5g/L的MTT液10μL/孔继续培养4h,吸弃上清液每
孔加DMSO200μL,不时振荡显色,自动酶联免疫分析
仪测定吸光度A(波长492nm)。计算抑制率=(1-实验
组吸光度均值/对照组吸光度均值)×100%,实验数据
用t检验统计学方法并用Origin软件处理。
2结果
2.1旋复花提取物对人瘢痕成纤维细胞的毒性作用
由表1可见,加入旋复花提取物作用 24h后培养
上清液中乳酸脱氢酶(LDH)对照组与 A~F组无显著
性差异(P>0.05),说明药物浓度在500μg/mL以下无细
胞毒作用。
2.2旋复花提取物对人瘢痕成纤维细胞形态学的影响
由图1可见,成纤维细胞在用药前伸展良好,折光
性较弱,有方向性、呈放射状;而加旋复花提取物 24h
后(见图 2),成纤维细胞数目减少,形状变的不规则,
突起变短,细胞排列混乱,细胞内代谢产物增多。
图1空白对照组(HE×100) 图2药物组(HE×100)
2.3旋复花提取物对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响
MTT比色结果显示,旋复花提取物对增生性瘢痕
成纤维细胞生长增殖呈剂量依赖性抑制,IC50值为
75μg/mL。
图1不同浓度的旋复花提取物对人瘢痕成纤维细胞的抑制作用
3讨论
增生性瘢痕是皮肤真皮损伤后局部结缔组织增生
而形成的病理结构,是创伤后,尤其是烧伤后常见的
并发症。现代细胞生物学和分子生物学的研究认为,
成纤维细胞的大量增殖与凋亡抑制及细胞外基质中
胶原合成与降解失衡,部分细胞因子的大量产生构成
了HS的生物学基础,并且具有一定的血管依赖性。HS
病因及发病机理目前尚不完全清楚,亦未发现一种对
不同部位、面积、病程的HS都有效而又可靠的药物及
制剂。
成纤维细胞的增殖是通过细胞有丝分裂实现的,
每个细胞周期可分为分裂期(M期)和间期(包括 G1,
S,G2期),暂时不进行分裂增殖的细胞称为G0期细胞。
成纤维细胞的增殖受多种环境因素的影响,其中最重
要的已知因素为生长因子。生长因子调控细胞分裂增
殖与G0期和G1期有关。有实验提示:在G1期中间存
(下转第58页)
表1 乳酸脱氢酶(LDH)的活性(x±s,n=3)
组别 ρ(TMP)(!g/mL) Z(LDH)/(U/L)
对照组 0 25.3±2.2
A组 15.63 25.5±1.5
B组 31.25 25.7±1.2
C组 62.50 26.6±1.7
D组 125.00 26.5±1.3
E组 250.00 26.2±1.5
F组 500.00 26.1±2.1
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(上接第30页)
在一个细胞分裂的限制点,G1期细胞停留在限制点内
则处于休止状态,一旦越过限制点就进入增殖状态。而
许多生长因子包括PDGF、FGF、EGF、TGF-α及胰岛素
样生长因子都可促使G0期和G1期细胞跨越限制点,
开始分裂增殖。这种作用通常分为两类:PDGF、FGF
等推动G0期和G1期细胞进入分裂前的感受态,所以
称感受因子,而EGF、TGF-α、IGF-I等促使感受细胞进
一步发展向 S期过渡,所以称作增进因子。感受因子
和增进因子共同作用的结果就是推动细胞通过限制
点进入S期,进而完成整个细胞周期。从本实验结果来
看,药物对增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的 IC50值
为75μg/mL,效果显著,但究竟作用于细胞分裂增殖的
哪一期以及抑制哪种生长因子有待于进一步研究。
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(收稿日期:2007-09-11)
综 述
何一种药物之后,6个月内的死亡率就会有所下降。与
不服用者相比,同时服用这四类药物的病人死亡率降
低了90%,这项研究结果证实联合用药的治疗效果是
协同,而不是单纯的叠加。
有学者指出对发生缺血性事件有高风险性的患
者,仅仅加用一种治疗方案是不够的。因而,只要有可
能,病人在医院的时候就应该同时开始接受多种甚至
全部四种这类药物的治疗。他们建议将这四类治疗
ACS的药物结合起来制成一个“复合药片”,可以包含
固定剂量的阿司匹林和他汀类,再加以不同剂量的 β
受体阻滞剂和ACE抑制剂[14],这样的“复合药片”可以
提高病人的依从性,同时可以减少多种风险因子。
6中医药干预心绞痛具有发展前景
心绞痛对于中医属于“胸痹心痛”范畴[15],在病因
病机研究中讲究分型、分脏论治,近年来,中药干预心
绞痛的临床及实验研究已取得一定成果,其多靶点、
多途径、多环节的干预特点及个体化治疗优势完全符
合心绞痛的临床治疗原则。有临床研究显示,灯盏细
辛能降低C-反应蛋白,并升高密度脂蛋白,可广泛用
于USP的治疗[16]。此外,黄酮苷和银杏内酯的血管内
皮功能保护作用和抑制血小板聚集作用[17]、丹参的抗
脂质过氧化损伤作用[18]、川芎和半夏白术天麻汤的改
善血液流变学作用[19]也得到相应研究证实。
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(收稿日期:2006-11-22)
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