全 文 ：收稿日期：2010-07-15
基 金 项 目 ： 广 东 省 科 技 计 划 项 目 （2006B035530008；
2008B030301195）；广东省自然科学基金（9151063201000036）
作者简介 ：杨燕军 ，女 ，硕士 ，主任药师 ，电话 ：020-8854995，E-mail:
ngyj@gdyzy.edu.cn
HPLC法测定五指毛桃中补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素的含量
杨燕军 1，代 军 2（1广东食品药品职业学院，广东 广州 510520；2浙江华海药业公司，浙江 临海 317024）
摘要：目的 建立同时测定五指毛桃中补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素含量的高效液相色谱方法。 方法 应用 Hypersil
C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇－水（60:40），流速为 1.0 ml/min，检测波长为 268.7 nm，柱温为 30℃。
结果 补骨脂素的线性范围为 10.0~30.0 μg/ml（r=0.9998），样品的加样回收率为 99.7%，RSD 1.99%；佛手柑内酯的线性
范围为 15.0~45.0 μg/ml（r=0.9998），样品的加样回收率为 99.9%，RSD 1.71%；芹菜素的线性范围为 5.0~15.0 μg/ml（r=
0.9992），样品的加样回收率为 100.3%，RSD 1.78%。 结论 本方法简便快速，回收率、重复性良好，可用于五指毛桃中补
骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素的含量分析。
关键词：五指毛桃；补骨脂素；佛手柑内酯；芹菜素；高效液相色谱法
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2010）11-2565-03
High-performance liquid chromatography for determination of psoralene, bergapten and
apigenin in Ficus hirta Vahl
YANG Yan-jun1, DAI Jun2
1Guangdong Food and Drug Vocational College, Guangzhou 510520, China; 2Zhejiang Huahai Pharmaceutical Company, Linhai 317024,
China
Abstract: Objective To establish a high-performance liquid chromatography (HPLC)-based method for determining the
contents of psoralene, bergapten and apigenin in Ficus hirta Vahl. Methods A Hypersil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5
μm) was used with the mobile phase of methanol-water (60:40), flow rate of 1.0 ml/min, detection wavelength of 268.7 nm
and column temperature of 30 ℃. Results The calibration curve was linear within the range of 10.0-30.0 μg/ml for psoralene
(r= 0.9998), 15.0-45.0 μg/ml for bergapten (r=0.9998) and 5.0-15.0 μg/ml for apigenin (r=0.9992). The average recovery of
psoralene was 99.7% (RSD=1.99%), that of bergapten was 99.9% (RSD=1.71%) and that of apigenin was 100.3% (RSD=
1.78%). Conclusion The method is simple, economic and accurate with good reproducibility for the contents of psoralene,
bergapten and apigenin.
Key words: Ficus hirta Vahl; psoralene; bergapten; apigenin; high-performance liquid chromatography
五指毛桃(Ficus hirta Vahl)为岭南习用草药，以
桑科(Moraceae)榕属(Ficus)植物粗叶榕(F. hirta)的根
入药，其性平，味甘、辛，有健脾补肺、补气、利湿舒筋
之功，用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、风湿痹痛
等症［1］。 此外，五指毛桃又是一食药同源的植物，在广
东地区民间用来煲汤，称之为“南芪”。应用历史悠久，
保健作用广为认可。 据文献［2-4］及我们的前期研究
工作可知其主要有效成分为补骨脂素、 佛手柑内酯、
芹菜素等香豆素、黄酮类成分，其煲汤香气主要源自
于其中所含香豆素类化学成分。近来一些作者对广东
不同地区野生或市售五指毛桃中中补骨脂素的含量
进行了测定，还同时测定了五指毛桃中补骨脂素和芹
菜素的含量 ［5-6］，另有作者对五指毛桃药材进行了指
纹图谱的实验研究［7］。 本实验首次就五指毛桃中补骨
脂素、佛手柑内酯、芹菜素的提取和含量测定方法进
行了研究，建立了同时测定以上 3种成分含量的高效
液相色谱方法。
1 仪器和试剂
美国 Waters alliance 2695 型高效液相色谱仪，
Waters 2996 型 PDA 检测器 、EMPOWER 色谱工作
站。 BP211D型分析天平（德国 Sartorius），HS10260D
型超声波清洗器（天津恒奥科技发展有限公司）。对照
品补骨脂素（批号 110739-200511）购自中国药品生
物制品检定所，佛手柑内酯和芹菜素均为本实验室自
制 [采用 EI-MS 结合 1H-NMR (DMSO) 和 13C-NMR
(DMSO)的方法鉴定二者的结构，纯度 >98%]。五指毛
桃来源于广东河源金源绿色生命有限公司五指毛桃
GAP种植基地。药材经广东省中药研究所蔡岳文主任
中药师鉴定为粗叶榕 Ficus hirta Vahl.的根。 色谱纯
甲醇购自 Tedia公司，其他试剂均为分析纯。
2 方法
2010;30(11) 南方医科大学学报(J South Med Univ) 2565· ·
图 1 五指毛桃 HPLC 色谱图
1 号峰为补骨脂素；2 号峰为佛手苷内酯；3 号峰为芹菜素
2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00
t/min
图 2 补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素对照品 HPLC
色谱图
1 号峰为补骨脂素；2 号峰为佛手苷内酯；3 号峰为芹菜素
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00
t/min
2.1 检测波长的选择
各取对照品溶液经过紫外全波长扫描，补骨脂素
在 254 nm 左右吸收比较强，佛手柑内酯在 268.7 nm
及 312.6 nm 处吸收较强；芹菜素的最大吸收在 267.5
和 338.9 nm 处，三者都在 268.7 nm 处有较强的紫外
吸收，故选择 268.7 nm作为三者的共同检测波长。
2.2 色谱条件
色谱柱为 Hypersil C18 （250 mm ×4.6 mm，5
μm）；流动相为甲醇 - 水（60:40）；流速为 1.0 ml/min；
检测波长为 268.7 nm； 柱温为 30℃； 进样量为 20.0
μl（自动进样）。 在此色谱条件下补骨脂素、佛手柑内
酯、芹菜素对照品及五指毛桃样品的色谱图见图1~2。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取 60 ℃干燥至恒重的补骨脂素对照品 2
mg、佛手柑内酯对照品 3 mg、芹菜素对照品 1 mg，至
10.00 ml容量瓶中，加甲醇约 5 ml，微热溶解，冷却室
温，加甲醇稀释刻度，摇匀，分别精密吸取 1.00、1.50、
2.00、2.50、3.00 ml 至 10.00 ml 容量瓶中，加甲醇稀释
刻度，摇匀加甲醇稀释刻度，摇匀，用 0.25 μm 微孔滤
膜过滤，即得系列对照品溶液。
2.4 五指毛桃样品溶液的制备
粉碎后的五指毛桃根 60℃干燥至恒重， 取粗粉
约 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 100
ml，精密称定重量，浸泡过夜，超声提取 40 min，放
冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，
弃去初滤液，取续滤液，用 0.25 μm 微孔滤膜过滤，作
为样品溶液备用。
2.5 标准曲线的绘制
在上述色谱条件下，补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜
素分别进样，测定峰面积，以峰面积 A 为纵坐标，以
对应的补骨脂素、 佛手柑内酯、 芹菜素进样量 X
（μg/ml）为横坐标，进行线性回归，得补骨脂素、佛手
柑内酯、芹菜素回归方程分别为：
补骨脂素：A=4951.36X-3317.6，r=0.9998；
佛手柑内酯：A=20801.25X-63359.6，r=0.9998；
芹菜素：A=9480.14X＋33786.4，r=0.9992。
3 方法学考察
3.1 精密度实验
精密吸取同一样品溶液，按上述色谱条件，连续
进样 6次，以补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素峰面积积
分值计算， 三者峰面积的 RSD依次为 0.94%、0.72%
和 1.15%，表明该方法精密度良好。
3.2 重复性实验
取同一批样品 6 份，每份约 2 g，精密称定，分别
按样品制备方法制备 6份样品溶液，以峰面积积分值
计算，补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素峰面积的 RSD
依次为 1.25%、1.36%和 1.13%，表明该方法重复性良
好。
3.3 稳定性实验
精密吸取同一样品溶液，按上述色谱条件，在 12
h内，分别于 1、2、4、8、12 h测定，测得补骨脂素、佛手
柑内酯、 芹菜素峰面积的 RSD分别为 1.17%、1.21%
和 0.91%，表明样品溶液在 12 h内稳定。
3.4 加样回收实验
精密称取样品 6份，每份约 1 g，依次精密加入补
骨脂素对照品溶液（0.8 mg/ml）1 ml，佛手柑内酯对照
品溶液（0.9mg/ml）1ml，芹菜素对照品溶液（0.5 mg/ml）
1 ml，按样品制备方法制备样品溶液，按上述色谱条
件进行测定，计算回收率。 补骨脂素、佛手柑内酯、芹
菜素平均加样回收率分别为 98.7%（RSD=1.99%）、
99.6 %（RSD=1.71%）和 100.30%（RSD=1.78%），表明
本方法准确可靠。
4 样品测定
分别精密吸取 “2.3” 项下方法制备的对照品溶
液、按“2.4”项下方法制备的样品溶液各 20 μl，按上
述色谱条件，测定广东河源金源绿色生命有限公司提
供五批样品中补骨脂素、 佛手柑内酯及芹菜素的含
南方医科大学学报(J South Med Univ) 第 30 卷2566· ·
树龄 补骨脂素（mg/g） RSD(%) 佛手柑内酯(mg/g) RSD(%) 芹菜素(mg/g) RSD(%)
1 年 1.01 1.45 1.23 1.23 0.41 1.43
2 年 1.32 1.34 1.39 1.67 0.45 1.73
3 年 1.51 1.59 1.71 1.51 0.51 1.85
表 2 生长年龄对五指毛桃质量的影响（n=3）
样品批号 补骨脂素（mg/g） RSD(%) 佛手柑内酯(mg/g) RSD(%) 芹菜素(mg/g) RSD(%)
060512 1.25 1.58 1.63 1.95 0.51 1.81
060530 1.32 1.62 1.59 1.43 0.48 1.93
060601 1.51 1.39 1.71 1.51 0.63 1.68
000715 1.62 1.47 1.93 1.59 0.71 1.74
060920 1.65 1.24 1.62 1.83 0.69 1.92
表 1 五指毛桃中补骨脂素、佛手柑内酯及芹菜素含量测定结果（n=5）
量，结果见表 1。 比较生长期第 1 年、第 2 年、第 3 年
采收五指毛桃的补骨脂素、佛手柑内酯及芹菜素的含
量，证明第 3年采收的样品质量较好，结果见表 2。
5 讨论
根据前期化学成分研究所采用的提取方法结合
参考文献［8］，选用超声提取的方法进行含量测定研
究。 取同一批样品，浸泡过夜，然后分别超声 20、30、
40、60 min 以及不浸泡直接超声 60 min，比较两种提
取方式峰面积，实验结果表明浸泡过夜后超声提取有
利于有效成分的溶出， 超声 40 min 以后有效成分溶
出的量不再增加，因此确定样品的提取方法为浸泡过
夜超声提取 40 min。 香豆素及黄酮均为五指毛桃的
主要化学成分类别，为了有效控制药材质量，本文在
同一色谱条件下测定了五指毛桃中补骨脂素、佛手柑
内酯、芹菜素的含量，目前尚未见文献报道。
参考文献：
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［2］ 赵丽萍,狄 斌,冯 锋.五指毛桃的化学成分［J］. 药学与临床研究,
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（编辑：黄开颜）
杨燕军,等.HPLC 法测定五指毛桃中补骨脂素、佛手柑内酯、芹菜素的含量第 11 期 2567· ·