全 文 ：42 CHINA MEDICINE AND PHARMACY
2011年9月第1卷第17期·药品鉴定·
不同产地铁苋菜中总黄酮的含量测定
葛任新 李月娥
广东省高州市中医院，广东高州 525200
[ 摘要 ] 目的 测定不同产地铁苋菜中总黄酮的含量。 方法 采用乙醇溶剂浸提，结合超声波辅助提取铁苋菜中总黄酮。
对提取温度、料液比、乙醇浓度进行 L9（33）正交选择试验。 结果 最佳提取条件：提取温度 60℃，料液比 1 g ︰ 40 mL，
乙醇浓度 70%。4 个不同产地药材，以徐州产铁苋菜中总黄酮含量最高，为 5.4646 mg/g。 结论 铁苋菜中总黄酮的含量
因产地不同而存在一定的差异。
[ 关键词 ] 铁苋菜；总黄酮；正交试验；含量测定
[ 中图分类号 ] S896.1 [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 2095-0616（2011）17-42-02
铁苋菜为一年生草本，高 30～ 50 cm。叶互生，薄纸质，椭圆
形、椭圆状披针形或卵状菱形，基部有 3 出脉，长 2.5 ～ 8 cm，
宽 1.5 ～ 3.5 cm，两面被稀疏柔毛或无毛；叶柄长 1 ～ 3 cm。
花单性，雌雄同序，无花瓣；穗状花序腋生；雌花萼片 3，子房 3
室，被疏毛，生于花序下端的叶状苞片内；苞片开展时肾形，长
约 1 cm，合时如蚌，边缘有锯齿；雄花多数生于花序上端，花萼
4 裂，裂片镊合状；雄蕊 8，花药长圆筒形，弯曲；无退化子房及
花盘。蒴果小，钝三棱状，直径约 3 ～ 4 mm[1]。
铁苋菜生于旷野、路边较湿润的地方。分布黄河流域中下
游及长江以南各地，主产于江苏、广东、广西、福建、四川、江西、
安徽等地。铁苋菜主要含有黄酮、生物碱、鞣质、铁苋菜素、没
食子酸、胡萝卜苷、谷甾醇等有效成分。临床主要用于热毒泻
痢、血热出血、外伤出血等症。
含铁苋菜的制剂：止泻定胶囊系福建省立医院儿科叶孝礼
主任医师 30 多年来治疗湿热泄泻的经验方，它由中草药铁苋
菜（Acalypha australis L.）与盐酸黄连素、甘草等组成，由福州中
药厂研制成胶囊剂，并经临床研究，取得较满意的疗效 [2]。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
铁苋菜药材（产地：江苏徐州、河南柳州、湖北神农架、河
北邯郸）；芦丁、生化试剂购自广东省药品检验所；乙醇、醋酸
钠、冰醋酸、AlCl3 均为分析纯；蒸馏水。
1.2 主要设备
MODEL HN1006 超声波清洗机来自中国华南超声设备厂；
Unico 柯尼龙 WFZ UV-2100 紫外可见分光光度计来自上海仪
器有限公司；电热恒温水浴锅；流水式中药粉碎机来自温岭市
大德中药机械有限公司。
2 方法与结果
2.1 工作曲线回归方程的建立
2.1.1 标准溶液的配制 精确称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁对
照品10 mg，至 100 mL 容量瓶中，加体积分数 70％乙醇适量，超声
处理 5 min 使溶解，用70％乙醇定容至刻度，摇匀，即得（每1毫升
含无水芦丁0.1 mg）。
2.1.2 显色剂的配制 称取 AlCl3 1.34 g ，乙醇定容至 100 mL，
配成 0.1 mol/L 的溶液。称取醋酸钠2.72 g，蒸馏水溶解至100 mL，
配成0.2 mol/L 的溶液。称取1.15 mL冰醋酸，蒸馏水溶解至100 mL，
配成 0.2 mol/L 的溶液。
2.1.3 标准曲线的制作 精密量取对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、
4.0、5.0，平行两份（差示法），分别置于 10 mL容量瓶中，第 1份直
接加入 2 mL 0.1 mol/L AlCl3 溶液，乙醇定容，充分显色 20 min。第
2份加入 pH为 5.2 的 NaAc-HAc缓冲溶液（0.8 mL 0.2 mol/L 醋酸
钠溶液 +2 mL 0.2 mol/L 醋酸溶液），乙醇定容。以第 2 瓶为参比
（差示法扣除背景干扰），用可见分光光度计在 415 nm 波长处测
定其吸光度（ΔA）。以差示吸光度ΔA为纵坐标，浓度为横坐标，
计算回归方程。
2.2 总黄酮的提取和测定方法
2.2.1 总黄酮的提取 精密称取样品 1.5 g 置于 50 mL 锥形瓶
中，加一定体积分数乙醇若干毫升（按正交试验做），于超声波
反应器中（控制好温度），提取 30 min（15 min，10 min，5 min），
滤过，洗涤，滤液用蒸馏水定容于 100 mL 容量瓶中，得到黄酮
提取液，待测。
2.2.2 总黄酮含量的测定方法 精密吸取提取液 1.0 mL 置于
5 mL 容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，依法显色，测定吸
光度ΔA，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。
2.3 正交试验
正交选用江苏徐州铁苋菜药材。然后以最佳提取条件按
相同方法测定其他产地的铁苋菜。利用正交试验考察提取温
度、料液比、乙醇浓度这 3 个因素对提取效果的交互影响。试验
用 L9（33）正交表，研究提取条件对提取效果的影响的大小，并
确定最佳工艺。设3因素3水平正交试验，3因素分别为温度A、
料液比 B、乙醇浓度 C。见表 1。
表1 试验因素水平
组别
因素
温度（℃） 料液比（g︰mL） 乙醇浓度（%）
1 45 1︰30 50
2 60 1︰40 60
3 75 1：50 70
注：料液比项中，分 3 次加乙醇提取：
1︰ 30（25 mL，10 mL，10 mL） ，1︰ 40（30 mL，15 mL，15 mL），
1 ︰ 50（30 mL，30 mL，15 mL）
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表2 正交试验设计及结果分析
序号
A
温度
B
料液比
C
乙醇浓度
吸光度
总黄酮含量
（mg/g）
1 1 1 1 0.170 2.7340
2 1 2 2 0.201 3.2680
3 1 3 3 0.166 2.6718
4 2 1 2 0.254 4.2259
5 2 2 3 0.323 5.3495
6 2 3 1 0.190 3.1067
7 3 1 3 0.168 2.7192
8 3 2 1 0.143 2.2861
9 3 3 2 0.177 2.8597
K1 8.6738 9.6791 8.1268
K2 12.6821 10.9036 10.3536
K3 7.8650 8.6382 10.7405
k1 2.8913 3.2264 2.7089
k2 4.2274 3.6345 3.4512
k3 2.6217 2.8794 3.5802
R 1.6057 0.7551 0.8713
由极差分析可知，各因素对提取效果影响的大小顺序是：
A ＞ C ＞ B，即提取温度＞乙醇浓度＞料液比 。从正交试验设
计及结果分析表可得出最优化组合为 A
2
B
2
C
3
，即提取温度为
60 ℃，料液比为 1 g ： 40 mL，乙醇体积分数为 70%。
2.4 结果
420nm标准曲线 y = 19.291x + 0.0103
R2 = 0.9992
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
mg / ml
吸
光
度
图 1 标准曲线及回归方程
2.5 方法学考察
以下实验均按最佳提取条件提取总黄酮，药材均为江苏徐
州铁苋菜。
2.5.1 精密度试验 精密量取 3.0 mL 项下的芦丁标准液连续
重复测定吸光度 6 次。计算得 RSD=0.106%，结果表明该议器
测量精密度优良。
2.5.2 重现性试验 称取江苏徐州产的铁苋菜药材粉末 6 份，
按样品溶液制备方法处理（分出两份，一份作为差示法的参比
溶液），依法显色，在 415 nm 处测定吸光度。计算相对标准偏
差 RSD=1.842%，结果表明该方法重现性良好。
表3 不同产地铁苋菜药材总黄酮的含量
产地 吸光度ΔA 浓度c（mg/mL） 含量（mg/g） 平均含量（mg/g）
神农架 0.238 0.01180 3.9143 4.0721
0.244 0.01214 4.0448
0.257 0.01279 4.2571
柳州 0.345 0.01735 5.7538 5.4452
0.329 0.01652 5.5056
0.315 0.01579 5.2919
邯郸 0.259 0.01289 4.2795 4.6124
0.285 0.01424 4.7451
0.289 0.01445 4.8125
徐州 0.327 0.01642 5.4624 5.4646
0.318 0.01595 5.3181
0.336 0.01688 5.6132
2.5.3 稳定性实验 精密量取江苏徐州产地的铁苋菜药材样
品溶液 1.0 mL，60 min 内每隔 5 min 测定一次吸光度。计算相
对标准偏差RSD。
2.5.4 加样回收率试验 精密移取样品溶液 1.0 mL（6 份），分
别加入 0.1 mg/mL 芦丁标准品溶液 0.16 mL（加入与药材总
黄酮原有量相当的量 mg），摇匀，依法（各平行 2 份，以第 2 份
作为参比）显色，依法测定吸光度，计算平均回收率为 99.63%，
以及 RSD=0.54%。结果表明，方法分析误差较小，操作计程
中损失少，回收率高，方法可靠。
3 讨论
超声波提取法是近年来被用于中药提取的一项新技术，它
是利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、
搅拌等作用，加速药物有效成分进入溶剂 [3-4]，较其他方法简单
快速，且反应液测定时干扰因素少，结果可靠准确 [5]。因此本
研究采用超声波分别用 3种方法提取铁苋菜中的总黄酮，结果显
示最佳提取条件为：提取温度 60 ℃，料液比 1 g ︰ 40 mL，乙醇浓
度 70%。进一步研究表明，3 个影响因素基本无交互作用，因
此选用正交表安排试验，提高总黄酮的提取率，减少高温对成
分的破坏。
本实验以紫外可见分光光度法测定铁苋菜中总黄酮的含量，
方法简便易行，专属性强，结果稳定，重现性好。4个不同产地药材，
结果以徐州产铁苋菜中总黄酮含量最高，为5.464 6 mg/g。结果表明
铁苋菜中总黄酮的含量因产地不同而存在一定的差异。
黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中，具有多种生
物学活性，是中药材药物内的一类重要化学成分，具有多种药
理作用，诸如抗炎、抗氧化、抗癌和抗肿瘤作用等。上述实验
表明，铁苋菜中含有极为丰富的黄酮类物质，但不同产地的铁
苋菜中所含有的总黄酮成分存在较大的差异，这可能与药材
的生长环境、采收季节、提取方法以及贮藏条件等都有一定的
关系。
（下转第 53 页）
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（上接第 46 页）
4 讨论
《中国药典》对半夏及其炮制品只作了水溶性浸出物的规
定。本实验对各个品种在测定采用水溶性浸出物的基础上，增
加了醇溶性浸出物的含量测定，用 95% 乙醇为溶剂。目的是充
分提取脂溶性成分，较全面地检测半夏的化学成分含量。从实
验结果看：水溶性浸出物中，清半夏含量最高。其中冷水浸出
物为 26.5%，热水浸出物为 30.8%；生半夏含量最低，其中冷水
浸出物为 23.2%，热水浸出物为 26.3%；醇溶性浸出物中，法半
夏含量最高，其中冷醇浸出物为 28.9%，热醇浸出物为 31.5%；
生半夏含量最低，其中冷醇浸出物为 24.2%，热醇浸出物为
26.5%。这些数据为更好地控制半夏及其炮制品的质量提供了
参考依据。
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（收稿日期：2011-07-08）
塞的骨缝隙中渗漏。多看正侧位片确保探针的正确位置，造影
时如发现任何血管填充，应拔出探针不要注入骨水泥。注入骨
水泥过程中，一定要适时透视，持续性低压缓慢注入，导管保持
在椎体的中央，骨水泥围绕导管聚集。若骨水泥已充满椎体的
前 2/3，注入时有骨水泥渗漏，停止观察后再注入仍有骨水泥渗
漏，骨水泥向后流入椎管，均应停止操作。骨水泥漏至椎间孔
处，常激惹神经根引起强烈的放射痛。可以用局部封闭的方法
治疗。如伴运动障碍的征象，则应进行外科干预。如骨水泥较
多漏入椎管，压迫硬膜囊，应立即行开放性减压手术，降低神经
病损的程度。骨水泥毒性反应可能在术中导致患者血压骤降，
故术中应密切观察患者血压的变化情况。要严格掌握骨水泥
的调配时间，不能过稠或过稀，过稠无法注入椎体，过稀容易发
生骨水泥渗漏或引起肺栓塞等并发症。一过性的并发症是骨
水泥聚合产热引起炎症反应所致发热和疼痛。在骨水泥注入
过程结束后，应旋转骨水泥注入装置数周，使其在骨水泥注入
装置前缘断开，防止在软组织内遗留坚硬的骨水泥“尾巴”造
成疼痛症状。病理性骨折较椎体压缩性骨折发生神经根痛或
脊髓损伤的可能性大。脊柱后凸成形术患者术后嘱其最初几
个星期不要提重物，X 线和临床随访至少 1 年。
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（收稿日期：2011-07-21）
（上接第 43 页）
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（收稿日期：2011-06-27）