全 文 ：　　辽宁大学学报
　　　自然科学版
第 35卷　第 2期　 2008年
JOURNALOFLIAONINGUNIVERSITY
　　　　　NaturalSciencesEdition
　　　　　　Vol.35　No.2　 2008
土槿皮多糖的体外抗氧化作用研究
回　晶＊ ,李其久 ,孟宪焘
(辽宁大学 生命科学院 ,辽宁 沈阳 110036)
摘　要:目的:研究土槿皮多糖的体外抗氧化作用.方法:采用还原 K3Fe(CN)6法对土槿皮多糖的还原力
进行了测定 , 用水杨酸法研究土槿皮多糖清除· OH的效果 , 用硫代巴比妥酸法测定小鼠肝组织中丙二醛
(MDA)含量 ,用分光光度法测定小鼠肝线粒体肿胀程度.结果:土槿皮多糖具有较好的还原力 ,可以清除
· OH自由基 ,抑制自发性和 Fe2+-Cys所致 MDA的产生 ,减轻肝线粒体肿胀程度.结论:可以认为土槿皮
多糖具有明显的抗氧化作用.
关键词:土槿皮;多糖;抗氧化.
中图分类号:Q599　　文献标识码:A　　文章编号:1000-5846(2008)02-0155-03
　　土槿皮(PseudolarixkaempferiGord),又名土
荆皮 、金钱松 、水松皮 、荆树皮 ,来源于松科植物金
钱松的根皮和近根树皮.最早见于清代赵学敏所
著 《本草纲目拾遗 》,性辛 、温 、有毒 、止痒杀虫 ,用
于治疗癣症.经研究发现 ,其含有二萜类 、三萜类 、
三萜内酯及甾醇类等成分.现代药理实验表明 ,其
具有抗真菌 、抗生育 、抗肿瘤等作用 [ 1] .为更好地
开发和利用该植物资源 ,我们对其体外抗氧化作
用进行了研究 ,现将结果报道如下.
1　材料与方法
1.1　材料
土槿皮饮片 ,购至东北大药房 ,干燥粉碎过筛
备用.
昆明种小鼠 ,购至辽宁中医药大学.
化学试剂为国产分析纯.
1.2　土槿皮多糖的提取
取适量土槿皮于 20倍量蒸馏水中 , 95 ℃水
提 4 h, 4 000r/min,离心 10min,上清液减压浓缩
后加 3倍量的无水乙醇 , 4 ℃醇沉过夜 , 次日 4
000r/min,离心 10min,沉淀干燥 [ 2] ,即得土槿皮
粗多糖.
1.3　相对还原力的测定
取 2.5mL样品于试管中 ,依次加入 2.5 mL
pH6.6　0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液和 2.5 mL
1%K3Fe(CN)6溶液 ,于 50℃水浴中保温 20 min
后快速冷却 ,再加入 2.5 mL10%三氯醋酸溶液 ,
以 3 000r/min的转速离心 10 min,取上清液 2.5
mL,依次加入 2.5mL蒸馏水 , 0.5 mL0.1%FeCl3
溶液 ,充分混匀 ,静置 10 min后 ,在 700 nm下测
定其吸光度值 ,以蒸馏水作对照 ,以 VC作标样 ,
操作同上[ 3] .
1.4　羟自由基清除能力的测定
3 mL反应液中含 0.15 mol/LFeSO4 1 mL, 6
mmol/LH2O2 0.7 mL, 2 mmol/L水杨酸 0.3 mL
和不同质量浓度的样品 1 mL,最后加 H2O2启动
反应 , 37℃反应 1 h,测 510 nmOD值 [ 2] .用{[ A0
-(Ai-A0i)] /A0}×100%计算· OH的清除率 ,
其中 A0为对照不加样品;Ai为某质量浓度的样
品时的吸光值 , A0i为无水杨酸时样品的吸光值.
1.5　过氧化脂质生成的影响
1.5.1　小鼠自发性脂质过氧化
＊ 作者简介:回　晶(1977-),女 ,河北枣强县人 ,讲师 ,从事天然产物的研究.
　收稿日期:2007-09-11
小鼠禁食 12 h后脱颈椎处死 ,迅速取出肝
脏 ,在 4 ℃下用生理盐水制成 2%的肝匀浆.各管
分别加入 2%肝匀浆 2 mL,不同浓度的样品 1
mL,对照加 1 mL生理盐水.置于 37 ℃水浴加热
1.5h,取出加 2 mL10%三氯乙酸终止反应 ,再加
入 2 mL0.6%硫代巴比妥酸(TBA),沸水浴显色
15 min,冷却后 , 4 500 r/min离心 15 min.取上清
液于 532 nm处比色 , 计算 抑制率 (%)=
(MDA对照 -MDA样品)/MDA对照 ×100%[ 2] .
1.5.2　Fe2+ -Cys诱导小鼠肝脂质过氧化
取 2%肝匀浆 2 mL,再分别加入不同浓度的
样品 1 mL,对照加 1 mL生理盐水.再分别加入
0.01mol/LCys50μL和 0.001 mol/LFeSO4 100
μL,摇匀 ,接上述操作测 OD值.
1.6　对 FeSO4 -VC引起的小鼠肝线粒体肿胀度的
抑制作用
迅速去血后的小鼠肝 ,用冷生理盐水洗净后
称重 ,冰浴下用 0.25 mol/L蔗糖制成 10%匀浆
液 , 1 000r/min离心 20 min,上层液 10 000 r/min
离心 20 min,沉淀用 pH7.4的 20 mmol/LTris-
HCl缓冲液洗涤两次后 ,配成含蛋白质 0.5 mg/
mL线粒体悬浮液 ,冷藏保存.用生理盐水配成吸
光值为 0.5 ～ 0.6的肝线粒体悬浮液.由 FeSO4 -
VC产生 ·OH,取 2.5 mL悬浮液各加不同质量浓
度的样品 , 1mmol/LFeSO4 50μL和 1 mmol/LVC
50 μL,在 520 nm处每隔 1min测定吸光值 [ 4] .
2　结果
2.1　土槿皮多糖相对还原力的测定
采用还原 K3Fe(CN)6法对土槿皮多糖样品
的还原力进行了测定 ,并与标准物抗坏血酸进行
图 1　土槿皮多糖的相对还原力比较
了比较.测得土槿皮多糖与抗坏血酸在不同浓度
的相对还原力如图 1.
由图 1可知 ,在本试验所测定的浓度范围内 ,
土槿皮多糖与抗坏血酸的还原力均随其浓度的增
大而增大 ,但标准物抗坏血酸的变化趋势明显强
于土槿皮多糖.
2.2　土槿皮多糖清除羟自由基能力的测定
采用水杨酸法 ,固定反应时间测定土槿皮多
糖样品对· OH的清除作用.结果如表 1,土槿皮
多糖在 0.313 mg/mL浓度时 ,对 · OH就有一定
的清除能力 ,在一定浓度范围内 ,随浓度的增大而
增大.在浓度为 5 mg/mL时 ,对羟自由基的清除
能力己达到 80.91%,数据差异达极显著水平 ,说
明土槿皮多糖具有较强的 ·OH清除作用.
表 1　土槿皮多糖清除羟自由基能力的测定 ( x±s)
样品浓度(mg/mL) n OD510nm 清除率 /%
0(Control) 3 0.440±0.022 -
0.313 3 0.248±0.026a 43.64
1.25 3 0.185±0.018b 57.95
5 3 0.084±0.020b 80.91
a:P<0.05,与对照组相比;b:P<0.01,与对照组相比
2.3　土槿皮多糖过氧化脂质生成的影响
2.3.1　小鼠自发性脂质过氧化
利用组织匀浆在体外温育自氧化产生 MDA,
用 TBA法对土槿皮多糖样品的抑制过氧化脂质
生成的能力进行了测定.测定结果如表 2,在所测
定的浓度范围内 ,土槿皮多糖的抑制率随浓度的
增大而增大 ,数据差异达极显著水平 ,可见土槿皮
多糖对自发性脂质过氧化具有显著的抑制作用.
2.3.2　Fe2+ -Cys诱导小鼠肝脂质过氧化
由表 2可知 ,在所测定的浓度范围内 ,土槿皮
多糖对 Fe2+ -Cys诱导的小鼠肝脂质过氧化的抑
制作用随浓度的增大而增大 ,并且小于相同浓度
时 ,对小鼠自发性脂质过氧化的抑制率 ,与对照组
比较 ,差异显著 ,说明土槿皮多糖对 Fe2+ -Cys诱
导小鼠肝脂质过氧化也具有较好的抑制作用.
2.4　土槿皮多糖对小鼠肝线粒体肿胀度的影响
各组在 520 nm吸光值下降 ,见图 2,说明线
粒体膜被氧化损伤而发生了肿胀 ,其中对照组下
降幅度最大 ,说明 · OH诱导加速了氧化损伤 ,肿
胀严重.加土槿皮多糖组与对照组相比下降趋势
156 辽宁大学学报　　自然科学版　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2008年　　　　　　
减缓 ,表明土槿皮多糖可抑制 · OH所致氧化损
伤程度 ,肿胀减轻.而且土槿皮多糖高浓度组损伤
程度低于低浓度组 ,这表明土槿皮多糖的作用效
果呈剂量依赖关系.
表 2　土槿皮多糖过氧化脂质生成的影响( x±s)
样品浓度
/mg/mL n
自发性脂质过氧化产物 MDA生成 Fe2+-Cys诱导后 MDA生成
OD532nm 抑制率 /% OD532nm 抑制率 /%
0(Control) 3 0.361±0.019 - 0.593±0.025 -
0.2 3 0.135±0.026a 62.60 0.510±0.021b 14.00
0.4 3 0.116±0.012a 67.87 0.491±0.016b 17.20
0.8 3 0.088±0.022a 75.62 0.445±0.018b 25.04
a:P<0.01,与对照组相比;b:P<0.05,与对照组相比
图 2　土槿皮多糖对小鼠肝线粒体肿胀度的影响
3　讨论
药物还原力的大小在一定程度上反映了其预
防性抗氧化功能的强弱[ 5] .本实验结果表明 ,土槿
皮多糖具有较强的还原力 ,其供应的电子除了使
Fe3+还原为 Fe2+外 ,也可参与自由基反应使自由
基成为稳定的物质.机体过量的自由基可以引发
生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化 ,使膜的完
整性受损 ,造成如红细胞溶血和线粒体肿胀等现
象的发生 [ 6] .本实验证明土槿皮多糖可以有效地
清除 · OH,具有防止膜脂质过氧化的作用 ,减轻
线粒体肿胀的发生 ,从而保护膜系统免受损伤.这
一结论对于土槿皮的开发利用及多糖类抗氧化作
用机制的研究有一定参考价值.
参 考 文 献 :
[ 1] 　宋永锋 ,陈　虹 , 李灵芝.土槿皮的研究进展 [ J] .天
津药学 , 2001, 13(6):9-10.
[ 2] 　回　晶,宋雅娜,孙秀娟 ,等.桦褐孔菌多糖的体外抗氧
化作用研究[ J] .食用菌学报, 2006, 13(2):29-31.
[ 3] 　吕晓玲 ,朱惠丽 , 姜平平 ,等.紫苏提取物抗氧化活性
体外实验研究 [ J] .中国食品添加剂 , 2003, (5):22
-25.
[ 4] 　路雪雅.抗坏血酸和硫酸亚铁诱导鼠肝线粒体损伤
的实验研究 [ J] .生物化学与生物物理研究进展 ,
1989, 16(5):327-774.
[ 5] 　向志军 ,赵广荣 , 元英进 , 等.复方丹参的体外抗氧
化活性研究 [ J] .中草药 , 2006, 37 (2):211-213.
[ 6] 　杨建雄 ,朱淑云 , 李发荣.连翘叶茶的体外抗氧化活
性 [ J] .食品科学 , 2002, 23(12):120-123.
InVitroAntioxidantActivityofPolysaccharides
fromPseudolarixkaempferiGord
HUIJing, LIQi-jiu, MENGXian-tao
(ColegeofLifeScience, LiaoningUniversity, Shenyang110036, China)
Abstract:　Objective:Tostudytheanti-oxidativeefectofpolysaccharidesfromPseudolarixkaempferi
Gord.Methods:ThereducingpowerwasresearchedbyreducingK3Fe(CN)6;thescavengingefectonhy-
droxylradical(·OH)wasstudiedbysalicylicacidmethod;thecontentofMDAinmiceliverwasmeasured
byTBAassay;theswelingofmitochondriawasdetectedbyspectrophotometricmethods.Results:Polysac-
charidesfromPseudolarixkaempferiGordshowedstrongreducingpowerandhadthe·OHscavengingactivi-
ty.ItcouldinhibitthegenerationofMDA, soastodecreasetheswelingofmitochondriainducedby· OH.
Conclusion:PolysaccharidesfromPseudolarixkaempferiGordhadtheefectofanti-oxidation.
Keywords:　PseudolarixkaempferiGord;polysaccharides;antioxidant. (责任编辑　李　超)
157　　　　　　第 2期　　　　　　　　　回　晶 ,等:土槿皮多糖的体外抗氧化作用研究