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复方藤梨根制剂体外对MDR细胞株K562/ADR和K562/VCR细胞积聚和外排阿霉素(ADR)的影响研究



全 文 :因此 ,考虑用抗氧化剂来防止 AS 的进一步发展就有了可能。
VEC 是衬附于血管腔内面的细胞 ,对维持血管结构和功
能的完整性具有重要的作用 ,并参与多种机能活动 , 它不仅
具有屏障及转运功能 ,而且还参与机体的凝血 、免疫 、炎症过
程中白细胞的粘附 , 血管的紧张性 , 平滑肌细胞(SMC)的增
生及生物活性物质的释放和血管舒缩功能的调节等生命重
要过程。因此保护 VEC 免遭损伤对防止和缓解 AS 的形成
具有重要意义。本实验证明山楂叶总黄酮能抵抗氧自由基
对 VEC 的伤害 ,这为进一步开发利用山楂叶资源提供了广
阔前景。
参考文献
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收稿日期:2001-04-12
国家中医药管理局课题(编号:95C015),获浙江省中医药科技进步二等奖
复方藤梨根制剂体外对MDR细胞株 K562/ADR和 K562/VCR细胞积
聚和外排阿霉素(ADR)的影响研究
郭 勇 谢长生 冯正权(杭州 310006 浙江中医学院附属医院)
摘要 目的:探讨复方藤梨根制剂(FFTLG)对肿瘤化疗增敏的作用机理。方法:以 MTT 法观察 FFTLG 对 MDR细胞的逆转
作用 ,以 FCM 技术测定 FFTLG 作用 MDR 细胞后对阿霉素的积聚和外排影响。结果:10mg/ ml和 20mg/ml 的 FFTLG 对
K562/ ADR 的逆转倍数是 7.53 和 10.31倍(P<0.05);20mg/ml的 FFTLG 对K562/ VCR 的逆转倍数是 6.18 倍;10mg/ ml和
20mg/ ml的 FFTLG可增加K562/ ADR和 K562/ VCR细胞内 ADR的积聚分别是 77.6%, 80.1%和 50.9%, 45.2%, 且可减少
ADR的外排。结论:FFTLG通过增加 MDR细胞内的 ADR积聚及减少外排机制而实现对化疗的增敏作用。
关键词 多药耐药;复方中药;作用机制
The study of effects on accumulation and efflux of intracellular adrimycine with FFTLG for multidrug resistant
cell l ines K562/ADR and K562/VCR in vitro
Guo Yong , Xie Changshang , Feng Zhengquan(The attach hospital of zhejiang college of TCM , Hangzhou 310006)
ABSTRACT OBJECTIVE:To investigate the mechanism of enhance sensitivity fo r chemotherapy of cancer with FFTLG.
METHOD:Using te trazolium dye assay , reversal effect of FFTLG on multidrug resistant cell lines K562/ADR and K562/ VCR.The
accumulation and efflux of intracellular adriamycine were assayed by FCM.RESULTS:The reversal times of 10mg/ ml and 20mg/ml
FFTLG were 7.53 and 10.31 in K562/ ADR(P<0.05), respectively;that of 20mg/ml is 6.18 in K562/VCR.The accumulay ion
·268· Chin JMAP , 2002 August , Vol.19 No.4               中国现代应用药学杂志 2002年 8月第 19卷第 4期
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2002.04.007
of intracellular ADR in 10mg/ml and 20mg/ ml FFTLG were 77.6%, 80.1% and 50.9%, 45.2% for K562/ADR and K562/ VCR ,
respectiv ely.The efflux of ADR w ere reduced.CONCLUSION:The mechanism of enhancing the sensitivity of FFTLG for chemo ther-
apy of cancer is to increase accumulation and decrease efflux of intracellular ADR in MDR cells.
KEY WORDS multidrug resistance, compound Chinese medicine , mechanism
  肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance, M DR)现象
长期以来是肿瘤化疗过程中的一个棘手问题 ,是恶性肿瘤治
疗中的一大障碍。复方藤梨根制剂(FFTLG)为复方中药制
剂 ,我们前期临床发现它对部分恶性肿瘤的化疗有一定的增
敏作用 ,但其增敏作用机制尚不清楚 ,为此我们进行研究 , 主
要观察该制剂对耐药细胞积聚和外排阿霉素(ADR)的影响
程度 ,结果报告如下:
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞株 K562:人红白血病细胞株(敏感株), 由浙江
大学肿瘤研究所提供;K562/ADR:由 K562 细胞株经 ADR
抗药诱导得到 ,由浙江大学肿瘤研究所提供;K562/ VCR:由
K562 细胞株经 VCR抗药诱导得到 ,由浙江大学肿瘤研究所
提供。
1.1.2 药物:速溶性阿霉素(Adriamycine , ADR):意大利
FARMITALIA CARLO ERBA 公司产品;硫酸长春新碱
(Vincristine , VCR):杭 州 民 生 药 厂 产 品;维 拉 帕 米
(Veral1amll , VER):江苏盐城新曹制药厂产品;复方藤梨根
制剂(FFTLG):由浙江中医学院制剂室提供。
1.1.3 主要试剂:RPMI-1640 培养基:GIBC0BRL 公司产
品;小牛血清:上海华美生物工程公司产品;四氮甲基唑蓝[ 3
(4 , 5-dimethy l-2- thiazoly l)-2 , 5-diphenyl-2Htetrazolium-
bronide , M TT] :Sigma产品;其它试剂均为国产分析纯。
1.1.4 主要仪器设备:二氧化碳孵箱:BB16 型 , 上海 Her-
aeus 公司产品;倒置显微镜:Olympus PH-2 型 , 日本 OLYM-
PUS 公司产 品;比色 计:VICTOR 1420 M ULTILABEL
COUNTER,芬兰 WALLAC 公司产品;流式细胞仪:FAC-
Scan ,美国 BECT0N DICK lNS0N 公司产品。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养:细胞 K562 、K562/ ADR、K562/VCR常规
培养于 RPMI-1640 完全培养液中(含 15%小牛血清 , 青霉素
100u/ ml ,链霉素 100u/ml)。
1.2.2 细胞抗药性试验-MTT 法 [ 1 、2]取对数生长期细胞接种
于 96 孔培养板内 , 每孔 1×104(100ul/孔), 分别加入抗癌药
或 FFTLG、VER(100ul/孔), 置于二氧化碳孵箱中 , 37℃, 培
养 72h 后 , 每孔加入 1mg/ml的 MTT 50ul , 再 5%C02 , 37℃
置6h ,平板离心机 2000rpm 离心 , 倾去上清液 , 每孔加入二甲
基亚枫 100u1 , 微量振荡器振荡 ,待蓝色结晶完全溶解后 , 用
VICT0R 1420 M ULTILABEL COUNTER 比色计 570nm 波
长处比色 ,求出半数抑制浓度 IC50及抗药倍数(Resistant Fac-
tor , RF).[ RF= IC50(抗药细胞株)/(敏感细胞株)] 。
1.2.3 细胞抗药性逆转试验 方法与细胞抗药性试验相同 ,
只是在加入抗癌药物前 15 min 分别加入 VER(6ug/ml 或
3ug/ml)、FFTLG 2.5-20mg/ml ,分别计算逆转倍数(Reversal
Index , RI)[ RI=IC50(逆转剂)/ IC50(阴性对照)] , 实验重复
3次。
1.2.4  细胞内药物的积聚 [ 3 、4 、5]将 1 ×106/ml 细胞与 ADR
(10ug/ ml), 37℃,摇床温育 120min , 以 PBS 洗 2 次 , 收集细
胞 , 配成 1 ×106/ ml 细胞悬液 , 用 FACScan 流式细胞仪
(FCM)测定细胞内ADR 荧光强度 , 以其荧光强度任意单位
表示相对细胞内 ADR 浓度 ,实验重复三次。
1.2.5 FFTLG 对细胞内药物积聚的影响 实验步骤与测定
细胞内药物的积聚试验基本相同 , 只是在加入 ADR 前
15min , 加入各种浓度的逆转剂。
1.2.6 FFTLG 对细胞内药物外排的影响 将 1 ×106/ ml细
胞与 ADR(10ul/ ml), 37℃, 摇床温育 120min , 用 PBS 洗 2
次 ,加入 FFTLG 后 , 分别在 0 min、 15min、 30min、 60min、
90min时点 ,用 FCM 测定细胞内 ADR荧光强度 , 方法同上。
1.2.7 统计学处理:均数比较用 t检验。
2 结果
2.1 K562/ADR及 K562/ VCR细胞株的耐药特性
表 1.示 K562/ ADR 和 K562/ VCR 耐药株对蒽环类
(ADR)和植物碱类(VCR)2 种主要 MDR药物的抗药性 , 以
及 FFTLG 的细胞毒性 ,其中 VCR的抗药性很强 , 两株耐药
细胞的 IC50均大子 50ug/ ml ,耐药倍数(Resistant Factor , RF)
大于 8197 倍。对 ADR 的抗药性 , K562/ ADR 耐药株为 90.
34 倍 , K562/VCR耐药株为 42.24 倍。 而 FFTLG 对三株细
胞的 IC50均约在 40mg/ ml左右(生药浓度),无耐药性。
表 1 K562/ADR及 K562/ VCR耐药株的抗药性
细胞株 IC 50 RI(倍数)+ADR(ug/ml) +VCR(ug/ml) +FFT LG(ug/ml) +ADR +VCR +FFT LG
K562 0.058±0.014 0.0061±0.0001 43.92±4.92 - - -
K562/ADR 5.24±0.070 〉50 41.10±1.73 90.34 〉8197 -
K562/VCR 2.45±0.99 〉50 42.91±2.43 42.24 〉8197 -
RF=IC50(耐药株)/ IC50(敏感株)
·269·中国现代应用药学杂志 2002年 8月第 19卷第 4期               Chin JMAP , 2002 August , Vol.19 No.4
表 2 FFTLG 对 K562细胞株的逆转作用
浓度(mg/ml) IC50(ug/ml) RI(倍数)+ADR +VCR +ADR +VCR
0 0.058±0.014 0.0061±0.0001 1.0 1.0
2.5 0.047±0.008Δ 0.0061±0.0006Δ 1.23 1.0
5.0 0.047±0.003Δ 0.0059±0.0006Δ 1.23 1.03
10.0 0.045±0.001Δ 0.0060±0.0006Δ 1.29 1.02
20.0 0.049±0.006Δ 0.0059±0.0005Δ 1.18 1.03
VER 3ug/ml 0.050±0.018Δ 0.0059±0.0002Δ 1.16 1.03
VER 6ug/ml 0.056±0.005Δ 0.0053±0.0004Δ 1.04 1.15
ΔP〉0.05
RI=IC50(逆转剂)/ IC50(阴性对照)
2.2 FFTLG 和 VER对 K562 细胞株的影响
表 2中不同浓度的 FFTLG:0 、2.5、5 、10、 20(mg/ml)及
VER:3 、6(μg/ ml)浓度对敏感株 K562 的 ADR 和 VCR毒性
作用的影响不明显 ,与 0 孔比较 , 无统计学意义(P>0.05)。
2.3 FFTLG 和 VER对耐药细胞 K562/ADR的逆转作用
表 3所示 , 低浓度(2.5 及 5mg/ml)的 FFT LG 对 K562/
ADR耐药株的逆转作用不明显(P >0.05), 而在 10mg/ ml、
20mg/ ml浓度时 , 对 K562/ ADR 耐药株的 ADR抗药性有明
显的逆转作用 , 其 IC50 分别为 0.74ug/ml和 0.54ug/ml , 逆
转倍数(RI)分别在 7.53倍和 10.31倍 , 与阴性对照(0 孔)比
较 ,差异显著(P <0.05), 而阳性对照 VER 3ug/ ml、6ug/ml
浓度也显示了相似的逆转作用 , 但 FFTLG 和 VER 对 VCR
抗药性均无明显逆转作用 , 其半数抑制浓度均 IC50>50ug/
ml。
2.4 FFTLG 和 VER对 K562/VCR耐药株的逆转效果
表 4示 FFTLG 在 10mg/ ml、 20mg/ ml浓度时对 K562/
VCR耐药株的 ADR抗药性有不同程度的逆转作用 , 其逆转
倍数分别达 1.88 倍和 6.18倍 , 其中 20mg/ ml浓度时逆转作
用明显 , 与阴性对照组比较 , 具有统计学意义(P<0.05), 在
低浓度(2.5 、5mg/ml)时均无逆转效果 , 而阳性对照组 VER
在 3ug/ml和 6ug/ml浓度均对 ADR抗药性有明显的逆转作
用(P <0.05), 尤在 6ug/ml浓度时 , 逆转倍数达 27.80 倍 ,
具有很好的逆转效果。但它们对 VCR 抗药性除 VER 在
6ug/ ml时有 >4.24 倍的逆转倍数外 , 其它均无明显逆转作
用 ,其 IC50均大于 50ug/ ml。
2.5 FFTLG 对细胞内药物积聚的影响
表5 反映了 3 株细胞在加入 FFTLG 10mg/ ml、 20mg/
ml及阳性对照 VER 6ug/ml 后测定的细胞内 ADR 荧光强
度 , 10mg/ml 、20mg/ml组对 K562 细胞内 ADR的积聚无明
显改变(P>0.05), 而对 K562/ADR及 K562/ VCR耐药株摄
取 ADR的能力有明显的增加(P <0.05), 而且 6ug/ml的维
拉帕米对 K562/ADR及 K562/VCR 耐药株积聚 ADR 的增
强作用更加明显(P<0.05).该结果与 MT T 法测定的逆转
效果和对 ADR 的耐药情况基本相符 , 即 K562 及 K562/
VCR、 K562/ADR细胞内积聚ADR的能力与其对 ADR的耐
药性相一致。
2.6  FFT LG 对 K562、K562/ ADR、K562/VCR 细胞外排
ADR的影响
表 3 FFTLG 对 K562/ADR耐药株的逆转作用
浓度(mg/ml) IC50(ug/m l) RI(倍数)+ADR +VCR +ADR +VCR
0 5.57±0.24 〉50 1.0 -
2.5 4.84±0.22 〉50 1.15 -
5.0 5.19±1.65 〉50 1.07 -
10.0 0.74±0.08* 〉50 7.53 -
20.0 0.54±0.06* 〉50 10.31 -
3ug/ml 0.69±0.28* 〉50 8.07 -
6ug/ml 0.46±0.13* 〉50 12.11
P〉0.05
表 4 FFTLG 对 K562/ VCR耐药株的逆转作用
浓度(mg/ml) IC50(ug/m l) RI(倍数)+ADR +VCR +ADR +VCR
0 2.78±0.90 >50 1.0 -
2.5 3.17±1.01 >50 - -
5.0 2.90±0.18 >50 - -
10.0 1.48±0.86 >50 1.88 -
20.0 0.45±0.20* >50 6.18 -
3ug/ml 0.26±0.28* >50 10.69 -
6ug/ml 0.10±0.07* >50 27.80 >4.24
*P<0.05
表 5 FFTLG 对细胞内 ADR积聚的影响
浓度(mg/ml) 细胞内ADR浓度(相对荧光强度) 细胞内ADR的积聚(%)
K562 K562/ADR K562/VCR K562/ADR K562/VCR
0 191.97±28.33 86.34±24.94 105.79± 6.77 - -
10 199.16±18.98 153.30±17.13﹡ 159.61±11.69﹡ 77.6 50.9
20 171.24±22.64 155.53± 6.32﹡ 153.63± 9.19﹡ 80.1 45.2
VER 229.88±13.82 192.67± 7.21﹡ 213.70±24.54﹡ 123.2 102.0
P<0.05
·270· Chin JMAP , 2002 August , Vol.19 No.4               中国现代应用药学杂志 2002年 8月第 19卷第 4期
表 6 FFTLG 对 K562细胞外排 ADR的影响
时 间 空白组 +FFTLG1(10mg/ml) +FFTLG2(20mg/ml) +VER(6ug/ml)
0 244.47±1.92 252.43±44.47 237.56±34.29 242.64±28.02
15 244.25±2.23 249.25±45.37 226.48±18.10 241.34±15.37
30 237.04±6.22 241.02±42.95 228.69±30.55 230.24±27.19
60 231.59±7.85 234.97±41.29 229.75±30.19 229.75±30.19
90 217.36±0.88 222.04±27.44# 223.56±30.44# 223.56±30.44#
残留 88.9% 89.00% 89.85% 92.14%
# P>0.05与空白组对照 ,下同
表 7 FFTLG 对 K562/ADR细胞外排 ADR的影响
时 间 空白组 +FFTLG1(10mg/ml) +FFTLG2(20mg/ml) +VER(6ug/ml)
0 63.98±1.22 64.48±2.62 74.82±4.42 68.52±0.66
15 61.87±2.29 64.13±1.85 77.18±6.21 67.18±0.83
30 56.99±6.22 61.46±0.49 70.94±7.66 64.94±1.39
60 54.37±1.34 58.69±0.79 69.26±5.28 63.86±2.59
90 50.68±1.51 60.01±0.83** 69.07±5.69** 63.24±2.60**
残留 79.20% 93.10% 92.30% 92.30%
**P<0.01
表 8 FFTLG 对 K562/ VCR细胞外排 ADR的影响
时 间 空白组 +FFTLG1(10mg/ml) +FFTLG2(20mg/ml) +VER(6ug/ml)
0 103.66±6.75 107.86±5.93 105.06±6.15 109.89±5.61
15 100.48±8.46 104.35±4.87 108.26±2.49 106.74±7.38
30 94.09±5.87 97.46±3.83 98.09±4.72 101.00±7.99
60 88.97±6.92 93.10±6.97 94.46±7.77 97.86±9.27
90 81.39±0.70 91.34±9.48# 91.34±7.80* 96.15±11.4*
残留 78.50% 82.20% 86.90% 87.50%
*P<0.05
  表 6、7、8示 FFTLG 及阳性对照 VER 对K562 细胞外排
ADR的影响很小 , 对 K562/ADR 和 K562/VCR 细胞外排
ADR具有不同程度的影响 , 且对 K562/ ADR 的影响较
K562/ VCR细胞略大。在 0mg/ ml、10mg/ ml、20mg/ ml浓度
的 FFTLG 和 6ug/ ml VER 的影响下 , K562/ADR 细胞外排
90min , 细胞内残留的阿霉素(以相对荧光强度表示)分别为
79.20%、 93.10%、 92.30%和 92.30%(P <0.05), 而在
K562/ VCR细胞则分别残留 78.50%、82.20%、86.90%和
87.50%(P>0.05)。
3 讨论
化疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一 , 但多药耐药性
(MDR)的产生往往是导致化疗失败的重要原因 ,引起 MDR
的机理比较复杂 ,但 mdr1 基因及其产物 Pgp 的过度表达是
其主要原因之一[ 6 、7] 。
Pgp 是一种跨膜糖蛋白 , 属于 ATPase蛋白超家族成员 ,
可降低细胞毒药物在细胞内的积聚和滞留 ,而使肿瘤细胞获
得多药抗药性[ 8] , 自 Tsuruo等(1981 年)首次报导 verapnmil
能逆转肿瘤细胞的耐药以来 ,己发现许多药物在体外具有逆
转 MDR作用 , 但目前真正能较好应用于临床的逆转剂尚不
多见。
中医药治疗恶性肿瘤具有悠久的历史 ,特别是在肿瘤的
综合治疗中的作用日渐引起了人们的兴趣。 临床广泛应用
的复方中药对化疗增敏 、减毒作用机制一直不清。本文研究
的复方藤梨根制剂(藤梨根 、水杨霉根 、虎杖根 、党参 、白术
等)是作者的经验方 , 长期的临床实践 , 发现它对恶性肿瘤的
化疗有增敏作用 ,为探索其机制 , 本文研究了 FFTLG 在体外
MDR细胞对化疗药物的增敏作用 , 证明具有一定的逆转
MDR作用。
K562/ ADR和 K562/ VCR 耐药细胞株具有较好的 M DR
特性 ,取半数抑制浓度(IC50)以下的 FFTL 4 个浓度组 , 观察
其对耐药细胞抗药性的逆转程度 , 并以 VER作为阳性对照。
实验结果显示 10mg/ ml 、 20mg/ ml FFTLG 可部分逆转
K562/ ADR耐药细胞对 ADR的抗药性 ,逆转倍数(RI)分别
为 7.08 倍 、 10.01 倍 , 与维拉帕米相似;而对耐药细胞
K562/ VCR抗药性 , 仅 20mg/ ml浓度具有一定的逆转作用 ,
RI为 6.18 倍(P<0.05), 由于 2 株细胞 VCR 均表现很高的
耐药性(均 IC50>50ug/ml), FFT LG对该细胞株的 VCR抗性
无明显逆转作用 , 与 VER作用相似。
阿霉素具有自发荧光特性[ 3 、4 、9 、10] , 流式细胞仪可直观
检测阿霉素相对含量 , 且灵敏 、准确 、能定量。本实验用该技
术 , 直接测定细胞内阿霉素(ADR)的荧光强度 , 以了解
FFTLG 对 K562及其耐药株积聚和外排 ADR的影响。实验
数据显示其耐药性为:K562/ADR>K562/ VCR>K562(荧
光强度之比为 86.34:105.79:191.97), 加用 FFTLG 后可明
显增加耐药细胞内 ADR 的积聚 , 具有逆转 MDR 作用。
FFTLG 对耐药细胞外排 ADR的影响 , 以对 K562/ADR耐药
株作用明显(P <0.01), 可减缓 K562/ADR 和 K562/VCR
(20mg/ml组 P<0.05)细胞外排加 ADR , 但对 K562 细胞外
·271·中国现代应用药学杂志 2002年 8月第 19卷第 4期               Chin JMAP , 2002 August , Vol.19 No.4
排 ADR则无明显影响(P>0.05)。
由于 MDR 机理复杂 , MDR 细胞 K562/ADR 和 K562/
VCR除 P-gp介导的机制外 , 胡汛等[ 5]报导尚有其它原因导
致 MDR ,实验结果也证实了这一点 , 实验中选用的 K562/
ADR、 K562/VCR耐药株在原有抗药性基础上 ,又经 1 年多
抗癌药物的不断冲击 、强化孵育 ,获得的耐药倍数较建株时
报导的要高[ 5 、11 、12] , 但用阳性对照维拉帕米作逆转试验时逆
转倍数反而要低[ 10] , 是否提示在与化疗药物的不断接触过
程中 ,发生非 P-gp 耐药机制的机会就增多 , 并且这与临床上
多次化疗后易产生耐药 , 尤其是治疗后复发的病人 , 再次化
疗效果更差 , 两者之间 , 是否具有相关性 , 有待于进一步研
究 、探索。
综上 , 复方藤梨根制剂(FFTLG)可增强 MDR 细胞内
ADR的积聚 , 减少 ADR 的外排 , 部分逆转 K562/ ADR 和
K562/ VCR耐药株的多药抗药性是对化疗增敏的机制之一 ,
该生物学事件可能与抑制 mdr1 基因功能有关(即对 mdr1 基
因转录 、表达的影响)。(另文报告)
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收稿日期:2002-03-29
欧瑞血活素注射液对小鼠免疫功能的影响
李静梅 许 华1(太原 030001山西医科大学基础医学院药理教研室;1通讯联系人 ,山西医科大学 523#)
摘要 目的:观察欧瑞血活素注射液对小鼠免疫功能的影响。方法:以腹腔注射方式给予昆明小鼠不同剂量的欧瑞血活素注
射液 30d , 并以生理盐水腹腔注射为阴性对照 ,干扰素腹腔注射为阳性对照。结果:欧瑞血活素注射液小 、中剂量组均具有提
高中性粒细胞的杀伤功能(P<0.05 , P<0.01);同等剂量组还可以显著地提高小鼠溶血素水平(P<0.05);小 、中 、大剂量组
均具有提高碳粒廓清指数和吞噬指数的作用 、显著地增加脾脏及胸腺的重量 , 其中以中剂量组增强单核巨噬细胞的吞噬功
能 、大剂量组增加脾脏重量 、中剂量组增加胸腺重量的作用最为显著。结论:小 、中剂量欧瑞血活素注射液可以提高昆明小鼠
的特异性免疫 、非特异性免疫以及中性粒细胞的吞噬功能。
关键词 欧瑞血活素注射液:硝基蓝四氮唑;溶血素;碳粒廓清;昆明小鼠
Effect of Blood Acting Polypeptide Injection on immunocompetence in mice
Li Jingmei , Xu Hua(Department of pharmacology , Shanxi Medical University , Taiyuan 030001)
ABSTRACT OBJECTIVE:Investiga te the effect of BAP Injection on immunocompetence in mice.METHOD:The different doses of
BAP w ere given to Kunming mice for 30 day s , ip , continuously , and the negative control g roup was ip NS , the positive control g roup
w as ip INF.RESULTS:(1)Among the different doses of BAP tested (low dose:0.05ml·10g-1·d-1 , medium dose:0.10 ml·10g-1·
·272· Chin JMAP , 2002 August , Vol.19 No.4               中国现代应用药学杂志 2002年 8月第 19卷第 4期