全 文 ：2001-06-04收稿。
* 国家中医药管理局中医药科学技术研究基金资助项目 (国中医药
科 00-01L ( M ) ) 和广西青年科学基金资助项目 (桂科青 0007025)。
* * 广西中医学院药学系。
广西科学 Guangxi Sciences 2002, 9 ( 1): 57～ 59, 63
广西藤茶总黄酮保肝作用的实验研究*
Experimental Research on Total Flavone of
Ampelopsis grossedentata from Guangxi in Liver Protection
钟正贤　　　　覃洁萍* * 　　周桂芬　　　陈学芬
Zhong Zhengxian　 Qin Jiepin　 Zhou Guifen　 Chen Xuefen
(广西中医药研究所　南宁市东葛路 20-1号　 530022)
( Guangxi Institute of Traditional M edical and Pharmaceutical Sciences,
20-1 Donggelu, Nanning , Guangxi, 530022, China)
摘要　为了解广西藤茶总黄酮 ( GXTF) 的保肝作用 , 进行 GX TF对四氯化碳 ( CCL4 )、 D-半乳糖胺和异硫氰
酸萘酯 ( AN IT )致小鼠急性肝损伤保护试验、 单核巨噬细胞吞噬功能试验、 免疫低下小鼠溶血素生成试验和毒
性试验。各试验用小鼠 50只 , 体重 23～ 25 g , 雌雄兼用 , 其中单核巨噬细胞吞噬功能试验用鼠 40只 ; 毒性试
验用鼠 20只 , 雌雄各半。血清中的 ALT、 AST、 T-BIL含量作为测定指标。结果: 与 CCL4模型组相比 , GXTF
( 0. 1 g /kg ) 显著降低 ALT、 AS T、 T-BIL含量 (P < 0. 05) ; 与 D-半乳糖胺和 ANIT模型组相比 , GX TF ( 0. 1
g /kg , 0. 05 g /kg ) 显著降低 ALT、 AST、 T-BIL含量 (P < 0. 05)。单核巨噬细胞吞噬功能试验表明 , GXTF
( 0. 1 g /kg ) 显著提高单核巨噬细胞吞噬指数 (P < 0. 05)。溶血素生成试验表明 , GXT F ( 0. 1 g /kg, 0. 05 g /
kg ) 显著提高免疫低下小鼠溶血素含量 (P < 0. 05)。毒性试验表明 , 小鼠最大耐受量为 22. 5 g /kg。提示 , 广
西藤茶总黄酮具有保肝降酶和退黄 , 提高免疫功能作用。
关键词　藤茶　总黄酮　保肝　退黄　免疫功能
中图法分类号　 Q949. 756. 3; R967
Abstract　 To study effect of the total f lav one of Ampelopsis grossedentata f rom Guangxi ( GXT F)
on liv er protection, the mouse models induced by carbon tet rachlo ride ( CCL4 ) , D-galactosamine
( D-Gla ) and naphthyl isothiocyanate ( ANIT ) are used. The assay of mononuclear macrophage
phagocytosis and hemolysin formation in immune-low ering mice and toxicity test are also
conducted. Each test has 50 mice wi th body w eight of 23 to 25 g , male and female together, ex cept
fo r 40 mice for assay of mononuclear macrophage phagocy tosis, and 20 mice for toxici ty test wi th
half female. Alt , AST and T-BIL are tested as indicators. Compared with CCL4 models, GXTF at
0. 1 g /kg can decrease the contents of ALT, AST and T-BIL at P < 0. 05. Compared wi th D-Gla
and AN IT models, GX TF at 0. 1 g /kg and 0. 05 g /kg can decrease the contents of ALT, AST and
T-BIL at P < 0. 05. GX TF at 0. 1 g /kg can increase phagocy tosis index of mononuclear
macrophages at P < 0. 05. GXT F at 0. 1 g /kg and 0. 05 g /kg can increase the content of hemoly sin
in immune-low ering mice at P < 0. 05. The fatal quanti ty of GXT F to mice is 22. 5 g /kg. It i s
suggested that GXT F could enhance immunity and protection of liver, and eliminate jaundice.
Key words　 Ampelopsis grossedentata, to tal flavone, liver protection, eliminating jaundice,
immuni ty function
　　广西藤茶系葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄
[Ampelopsis grossedentata ( Hand-Mazz)W. T. Wang ]
的茎叶 , 其性味甘淡 , 具有清热解毒功效 , 主治黄疸
型肝炎 , 感冒风热 , 咽喉肿痛 [1, 2 ]。广西藤茶总黄酮
( GXTF)是从广西瑶族藤茶中提取的有效成分 ,为双
57广西科学　 2002年 2月　第 9卷第 1期
DOI : 10. 13656 /j . cnki . gxkx . 2002. 01. 018
氢杨梅树皮素和杨梅树皮素的混合物 [3 ] ,前文 [4 ]已报
道 , GX TF具有明显的活血化瘀和抗氧化作用。从
GXTF中分离得到的双氢杨梅树皮素具有止咳、祛痰
和降血糖作用 [5, 6 ]。前人的研究也证明 ,黄酮类化合物
对心血管、呼吸、消化等系统具有广泛的生理活性 [ 7]。
为此 ,本文试图寻找抗肝炎药物 ,对 GX TF进行了保
肝作用实验研究。
1　实验材料
1. 1　药物及试剂
　　广西藤茶总黄酮 ( GXTF) 为微黄粉末结晶 , 由
广西中医学院药学系提供。使用时加数滴吐温 -80研
磨成乳浊液供实验用。联苯双酯 ,北京协和药厂产品。
盐酸左旋咪唑片 , 桂林制药厂产品。 D-半乳糖胺 ,
Sigma公司产品。异硫氰酸萘酯 , Sigma公司产品。丙
氨酸氨基转移酶 ( ALT) , 天冬氨酸氨基转移酶
( AST) , 总胆红素 ( T-BIL) 等试剂盒均为上海荣盛
生物技术有限公司产品。
1. 2　动物
昆明种小鼠 , 体重 23～ 25 g , 雌雄兼用 , 由广西
医科大学实验动物中心提供。
1. 3　仪器
722型光栅分光光度计 , 上海分析仪器三厂。
2　方法与结果
2. 1　对小鼠 CCL4致急性肝损伤的保护作用 [8 ]
　　取小鼠 50只 , 分为 5组。设对照组、 CCL4模型
组、 阳性药联苯双酯 ( 0. 1 g /kg )组、 GXT F大小剂
量 ( 0. 1 g /kg和 0. 05 g /kg ) 组。用药组每天胃灌给
药 ( ig ) 1次 ,对照组和模型组给予等体积蒸馏水 ,连
续 7 d。末次给药约 10 h, 除对照组外 , 其他各组小
鼠腹腔注射 ( ip) 0. 1% CCL4液体石蜡油溶液 10 ml /
kg,同时禁食 ,自由饮水。16 h后由眼眶静脉丛取血 ,
分离血清 , 采用试剂盒测定血清 ALT、 AST和 T-
BIL, 并取肝组织按常规作病理学检查。结果见表 1。
GX TF大小剂量组和联苯双酯组能明显抑制 CCL4
致急性肝损伤小鼠血清中 ALT和 AST活性升高 ,并
对 T-BIL含量有一定的降低作用 , 减轻肝组织的变
性和坏死 , GX TF大剂量组肝组织的坏死程度与
CCL4模型组比较具有显著性差异 ( P < 0. 05) ,显示
保肝降酶作用。
2. 2　对 D-半乳糖胺致小鼠急性肝损伤的保护作
用 [ 8]
　　取小鼠 50只 , 分空白对照组、 模型组、 联苯双
酯 ( 100 mg /kg ) 组、 GXT F大小剂量 ( 0. 1 g /kg和
0. 05 g /kg) 组。分别 ig给药 , 每天 1次 , 空白对照
组和模型组给予等量蒸馏水 , 连续用药 8 d。末次给
药 1 h后 ,除空白对照组外 ,其他各组腹腔注射 D-半
乳糖胺 650 mg /kg, 20 h后 , 摘除小鼠眼球取血 , 分
离血清 ,按试剂盒方法测定 AST、 ALT和 T-BIL, 并
取肝组织按常规作病理学检查 , 结果见表 2。 GXTF
大小剂量组和联苯双酯组能明显抑制 D-半乳糖胺致
急性肝损伤小鼠血清中的 ALT和 AST活性的升高 ,
并对 T-BIL有明显的降低作用 , 减轻肝组织的变性
和坏死 , GXTF大小剂量组肝组织的坏死程度与
CCL4模型组比较具有显著性差异 ( P < 0. 05) ,显示
保肝降酶作用。
表 1　 GXTF对小鼠 CCL4致急性肝损伤的保护作用 (n= 10, x-± s )
Tabl e 1　 Effect of GXTF on liver protection of mice induced by carbon tetrachloride (n= 10, x-± s)
组别 Group 剂量 Dosage ( g /kg ) ALT ( u) AS T ( u) T-BIL (μmo l /L)
对照组 Cont rol 24. 3± 7. 3 122. 6± 25. 3 2. 51± 1. 18
模型组 Model 203. 0± 18. 3 259. 5± 33. 6 6. 01± 1. 91
联苯双酯 Bifenda te 　　　 0. 1 126. 5± 54. 1* * 212. 3± 52. 4* 4. 65± 2. 83
GX TF 0. 1 167. 7± 50. 6* 215. 0± 60. 7* 3. 78± 2. 52*
GX TF 0. 05 175. 5± 43. 8* 226. 4± 39. 5* 4. 35± 2. 31
与模型组比较 Compared with model: * P < 0. 05;* * P < 0. 01
表 2　 GXTF对 D-半乳糖胺致小鼠急性肝损伤的保护作用 (n= 10, x-± s)
Tabl e 2　 Effect of GXTF on liver protection of mice induced by D-galactosamine (n= 10, x± s)
组别 Group 剂量 Dosage ( g /kg ) 　 ALT ( u) AS T ( u) T-BIL (μmo l/ L)
对照组 Cont rol 25. 6± 6. 4 121. 6± 22. 2 2. 43± 1. 21
模型组 Model 232. 2± 22. 8 252. 6± 17. 7 6. 15± 3. 81
联苯双酯 Bifenda te 　　　 0. 1 60. 2± 39. 5* * 215. 4± 47. 6* 2. 60± 2. 36* *
GX TF 0. 1 207. 7± 20. 6* 220. 2± 24. 1* 2. 86± 1. 29* *
GX TF 0. 05 210. 4± 21. 3* 235. 4± 31. 5 3. 24± 2. 34*
与模型组比较 Compared with model: * P < 0. 05;* * P < 0. 01
58 Guangxi Sciences, Vol. 9 No. 1, Februar y 2002
2. 3　退黄试验 [ 9]
　　分组同 2. 1, 连续 ig给药 6 d, 第 7天除对照组
外 , 其余各组 ig 0. 6%异硫氰酸萘酯 ( ANIT , 90 mg /
kg ) 中毒 , 中毒后继续给药 2 d, 对照组和模型组给
予同体积蒸馏水。各组于中毒 48 h后摘眼球取血 ,分
离血清 , 同上述方法测定 ALT和 T-BIL, 结果见表
3。 GX TF大小剂量组和联苯双酯组能明显抑制
AN IT致急性肝损伤小鼠血清中的 ALT升高和降低
T-BIL含量 , 显示保肝降酶退黄作用。
表 3　 GXTF对小鼠 ANIT致急性肝损伤的保护作用
Tabl e 3　 Effect of GXTF on l iver protect ion of mice induced
by naphthyl isothiocyanate
组别
Group
剂量
Dosage
( g /kg )
动物数
Animal
(只 Indiv idual)
　　 ALT　 ( u, x-± s)
　 T-BIL
(μmo l /L, x-± s)
照组 Cont rol 10 23. 4±5. 8 　 2. 34± 1. 16
模型组 M odel 10 428. 4±46. 3 119. 74± 23. 16
联苯双酯
Bifenda te
　　　 0. 1 10 158. 0±73. 4* * 87. 80± 25. 68* *
GXTF　　 0. 1 10 336. 8±87. 1* 90. 37± 30. 03*
GXTF　　 0. 05 10 354. 3±69. 4* 98. 45± 36. 52*
与模型组比较 Compa red with model: * P < 0. 05;* * P < 0. 01
2. 4　对单核巨噬细胞吞噬功能实验
　　取小鼠 40只 , 分对照组 , 左旋咪唑 ( 0. 05 g /
kg )组 , GX TF大小剂量 ( 0. 1 g /kg和 0. 05 g /kg )组。
连续 ig给药 7 d, 末次给药 1 h后 , 于尾静脉注入印
度墨汁 0. 1 ml /10 g体重 , 分别在注射后 2 min和 10
min, 从眼眶静脉丛取血 20μl, 置于 2. 0 ml 0. 1%
NaCO3溶液中摇匀 , 722型分光光度计 600 nm处比
色测定 OD值 ,按公式: K = logOD1 - logOD2 /t1 - t2
计算吞噬指数 K值 , 结果见表 4。GX TF大剂量组和
左旋咪唑组均能明显提高单核巨噬细胞吞噬指数 K
值 , 提示 GX TF具有提高非特异性免疫功能作用。
表 4　 GXTF对单核巨噬细胞吞噬功能影响
Tabl e 4　 Ef fect of GXTF on mononucl ear macrophage
phagocytosis
组别
Group
剂量
Dasage
(g /kg)
动物数
Animal
(只 Individ nal)
　吞噬指数
Phagocytosis
　 index　K (x-± s )
对照组
Cont rol
10 0. 031± 0. 009
左旋咪唑
L-imidazole
0. 05 10 0. 052± 0. 008*
GX TF 0. 1 10 0. 042± 0. 007*
GX TF 0. 05 10 0. 032± 0. 008
与对照组比较 Compared w i th Cont rol: * P < 0. 05
2. 5　对免疫功能低下小鼠溶血素生成的影响 [8 ]
　　取小鼠 50只 , 分为正常对照组、环磷酰胺组、左
旋咪唑 ( 0. 05 g /kg )组、 GX TF大小剂量 ( 0. 1 g /kg
和 0. 05 g /kg )组。连续 ig给药 10 d,第 5天每鼠 ip 5%
鸡血红细胞混悬液 0. 2毫升 /只 ,同时 ,除正常对照组
外 , 其他 5组均皮下注射环磷酰胺 ( CY) 20 mg /kg 1
次。免疫第 4天后 ,摘除眼球取血 , 测定各组血清溶血
素水平 (OD )值 ,结果见表 5。GXTF大小剂量组和左
旋咪唑组均能明显提高免疫功能低下小鼠溶血素含
量 , 提示 GX TF具有体液免疫增强作用。
表 5　 GXTF对免疫功能低下小鼠溶血素生成的影响
Table 5　 Effect of GXTF on hemolysin formation in immune-
lowering mice
组别
Group
剂量
Dosage
( g /kg)
动物数
Animal
(只 Indiviual)
　溶血素
　 Hemolysin
(OD, x-± s)
对照组 Con trol 10 0. 344± 0. 109
环磷酰胺 ( cy)
Cycloph os-
ph amide
10 0. 297± 0. 113
左旋咪唑+ cy
L-imidazole
0. 05 10 0. 423± 0. 070* *
GX TF+ cy 0. 1 10 0. 429± 0. 106*
GX TF+ cy 0. 05 10 0. 395± 0. 092*
与环磷酰胺组比较 Com pared w ith cyclophosphamide: * P < 0. 05;
* * P < 0. 01
2. 6　急性毒性试验
　　用小鼠预试后 ,另取小鼠 20只 ,雌雄各半。GXTF
以最大浓度和最大体积 ( 0. 3 ml /10 g) ,给小鼠 ig给
药 , 24 h连续用药 3次 ,连续观察 7 d,记录动物体重、
死亡及毒副反应情况。结果小鼠全部存活 , 体重正常
增长 ( 24% ) , 计算其最大耐受量为 22. 5 g /kg。表明
GX TF毒性很小。
3　讨论
　　现代医学认为 , CCL4进入肝细胞后 ,经还原活化
产生自由基 ,通过脂质过氧化物的破坏 ,使线粒体膜
脂质溶解 , 影响线粒体结构和功能 ,使酶蛋白合成减
少 ,造成酶的破坏 ,因而影响代谢功能和能量的生成 ,
致使肝细胞变性坏死。而 D-Gla为肝细胞的磷酸尿嘧
啶核苷的干扰剂 ,可造成肝弥漫性坏死和炎症与临床
病毒性肝炎的肝脏病理变化极为相似 [ 10]。GX TF大
小剂量组均能显著地抑制 CCL4和 D-Gla所致急性肝
损伤小鼠血清中 ALT、 AST和 T-BIL的升高 , 减轻
肝组织的病理损害程度 ,其改善肝功能可能与抗氧化
作用有关 [4 ]。ANIT主要是损害肝内胆管上皮细胞 ,
产生胆汁郁积性黄疸 ,出现高胆红素症和胆汁分泌减
少 , 因此 , 治疗黄疸与胆汁的排泄 , 尤其是与胆红素
排泄有着密切的关系 , GX TF能降低 AN IT所致总胆
红素和 ALT的升高 , 显示有一定的退黄作用。
　　检测小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能和用环磷酰
胺复制免疫功能低下模型检测溶血素生成 ,观察药物
对免疫功能影响的实验表明 , GXTF可促进单核巨噬
(下转第 63页 Continue on page 63) 　　
59广西科学　 2002年 2月　第 9卷第 1期
5　结语
　　综上所述 ,转基因植物药物的开发研究还刚刚起
步 , 还有许多具体问题有待于解决和规范化 , 相信 ,
随着人们对植物再生系统、基因转移系统的完善和基
因表达调控机制的深入了解 ,转基因植物药物的开发
研究会在新的世纪里获得更大的发展。
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(责任编辑:蒋汉明 )　　
(上接第 59页 Continue from page 59)
细胞的吞噬作用和提高免疫功能低下小鼠溶血素含
量 ,显示其能增强小鼠非特异性免疫功能和体液免疫
功能 ,因而起到保肝作用。以上结果为 GX TF的临床
应用提供了依据。
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(责任编辑:蒋汉明 )　　
63广西科学　 2002年 2月　第 9卷第 1期