全 文 ：〔收稿日期〕 2003 —05 —07
〔基金项目〕 湖南省卫生厅中医药科研基金资助课题(2000 —71)
〔作者简介〕 何桂霞(1965 —),女 ,黑龙江伊春人 ,副教授 ,湖南农业大学在读博士研究生。主要从事中药及天然药物化学的教学与研究。
藤茶不同采收时期及不同部位的总黄酮考察
何桂霞1 , 杨伟丽2 , 裴　刚1 , 彭竹仪1
(1.湖南中医学院药学院 , 湖南 长沙 410007;　2.湖南农业大学食品科技学院 , 湖南 长沙 410128)
　　〔摘要〕目的对不同产地不同采收期藤茶的叶 、茎中的总黄酮进行含量测定。方法 采用差示分光光度
法测定总黄酮含量 。结果 5月份藤茶叶中总黄酮含量最高 ,为 41.2%～ 45.3%,叶中含量高于茎中 3 ～ 4倍。
结论藤茶不同采收时期及不同部位总黄酮含量有差异 。
〔关键词〕藤茶;总黄酮;差示分光光度法;含量测定
〔中图分类号〕 R 284.2　〔文献标识码〕A　〔文章编号〕 1000 —5633(2004)01 —0013 —03
An Investigation on the Content Distribution of Total
Flavonoids in Various Parts of Ampelopsis Grossedentala
Collected in Different Seasons
He Guixia , Yang Weili , Pei Gang , et al
(Pharmaceutical Faculty , TCM Univ.of Hunan , Changsha , 410007)
　　〔Abstract〕Objective To investigate the content distribution of total flavonoids in various parts of Am-
pelopsis grossedentala collected in different seasons for a comparative analysis.Methods Differential spec-
trophotometry was used to determine the content of total flavonoids at the wavelength of 318 nm.Results The
content of total flavonoids was the highest in Ampelopsis grossedentala collected inMay , reaching at the ratio of
41.2%～ 45.3%.Furthermore , the content of this component in the leaves of plant was 3 ～ 4 times that of
stem.Conclusion The content of total f lavonoids is changeable in various parts of Ampelopsis grossedentala
collected in different seasons ,with the highest content distribution in the leaves of this plant collected inMay.
〔Key words〕 Ampelopsis grossedentala;Total flavonoids;Differential;spectrophotometry;Content
determination
　　藤茶 , 又名显齿蛇葡萄 Ampelopsis grossedentala(Hand.-
Mazz.)W.T.Wang 是葡萄科蛇葡萄属的一种野生藤本植
物[ 1] 。近年来的大量研究表明 ,藤茶中含有大量黄酮类有效
成分[ 2] 。药理实验表明 , 藤茶总黄酮具有消炎 、抑菌 、止咳 、
镇痛 、护肝 、消脂等功效[ 3] 。为合理开发和利用这一资源 , 本
文采用差示分光光度法 ,以二氢杨梅素为对照品 ,对湖南张家
界、江华 、株洲三个地区藤茶从芽期 4 月到落叶期 11 月的茎 、
叶作了总黄酮的含量测定 , 以对藤茶最佳收采时间 、合理用
药、质量控制及其黄酮类成分的进一步研究提供参考和启示。
1　实验材料
1.1　仪器与试剂
岛津 UV —265FW分光光度计 ,WFZ800-D3B 紫外可见分
光光度计(北京瑞利分析仪器公司), Scout百分之一电子天平
(梅特勒-托利多常州衡器有限公司), FA2104 万分之一电子
天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)。所用化学
试剂均为国产分析纯。
1.2　药材
藤茶产于湖南江华县贝江区 、张家界永定区 、株洲县八
斗乡 , 从芽期 4月到落叶期 11月每月中旬采集藤茶的茎 、叶 ,
并经我院彭菲教授鉴定。二氢杨梅素对照品为从湖南江华产
藤茶中分离得到 ,经 UV , IR、MS 、1H —NMR光谱分析鉴定结构 ,
逆流色谱法纯化处理 ,归一化方法检测 ,含量在 99.0%以上。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　供试品溶液的制备　精密称取藤茶茎 、叶样品(过 40
目筛)0.5 g , 置 50 mL 圆底烧瓶中 , 用 95%乙醇回流提取 3
13
2004年 2月第 24卷第 1期
Feb.2004 Vol.24 No.1
湖南中医学院学报
Journal of TCM Univ.of Hunan
次 ,第 1、2 次加 20 mL 95%的乙醇提取 1 h , 第 3 次加 10 mL
95%的乙醇提取 0.5 h , 将提取液定容至 50 mL ,取此溶液 2.5
mL定容至 10 mL备用。
2.1.2　对照品溶液的制备　精密称取二氢杨梅素 20.0 mg ,
置 50 mL容量瓶中 , 加 95%的乙醇定容至刻度。制成 0.4 mg
/ mL的对照品溶液。
2.2　薄层层析条件
吸附剂:硅胶 G —CMC —Na薄层板(105 ℃活化0.5 h)。展
开剂为甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(10∶8∶5), 上行展开 ,展距 15 cm。
显色剂:1%FeCl3乙醇溶液。结果见图 1。
图 1　藤茶薄层层析图
2.3　测量波长的选择
参考文献[ 4] 的方法 , 吸取 0.4 mg/mL 的二氢杨梅素对
照品溶液 1.5 mL 2 份 ,分置于 50 mL容量瓶中。一份加 95%
乙醇稀释至刻度;一份加 2%ZrOCl2.8H2O 甲醇溶液 2.0 mL ,
再加 95%乙醇定容至刻度。室温避光放置 1 h 后 ,前者置于
参比池 ,后者置于样品池 , 于 200～ 400 nm 波长范围内扫描测
定 ,记录对照品络合前后的吸收度差值 , 结果在 318 nm 处有
最大差示吸收度值 ,且在室温下 1 ～ 3 h内差示吸收度值基本
保持不变。
另取供试品溶液0.8 mL 2份 ,同法操作 ,可见供试品溶液
络合前后的差示吸收光谱与对照品基本一致, 均在 318 nm 处
有最大差示吸收度值(见图 2), 故选择 318 nm作为测定波长。
2.4　线性关系的考察
取0.4 mg/mL的二氢杨梅素对照品 0.5、1.0、1.5、2.0、
2.5 mL各 2 份。一份加 95%乙醇至 50 mL;一份加 2%ZrOCl2
·8H2O甲醇溶液2 .0mL , 再加95%乙醇定容至50mL 。室温
图 2　藤茶紫外光谱图
避光放至 1 h后 ,在 318 nm 波长处测量不同浓度的对照品溶
液络合前后的吸收度差值(ΔA), 结果表明 ,二氢杨梅素对照
品浓度在 4.0 ～ 20.0μg/mL范围内与 ΔA 呈良好的线性关
系。回归方程为:
A=0.022 C+0.009 , 相关系数 r=0.999 6
2.5　稳定性试验
将配好的样品溶液室温下避光放置不同时间 , 在 318 nm
波长处测量其络合前后的差示吸收度值 ,结果表明 , 1 h 后其
差示吸收度值可达到稳定 ,且在 3 h内基本保持不变。
2.6　回收率试验
精密称取 6 份已知含量的藤茶茎细粉约 0.25 g 置于 50
mL圆底烧瓶中 , 分别准确加入一定量的二氢杨梅素对照品
溶液 ,按照试验方法测定回收率 , 结果见表 1。
表 1　样品回收率试验
样
品
含黄酮量
(mg)
加入二氢杨
梅素量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 66.5 10 73.9 96.1
2 64.5 10 74.8 97.8
3 66.1 10 77.2 100.9 99.1 2.31
4 65.8 10 78.4 102.5
5 62.4 10 75.0 98.0
2.7　样品含量的测定
分别精密吸取已制备好的各种藤茶供试液 0.8 mL, 每种
供试液分别取 2 份。 一份加 95%乙醇至 50 mL;1 份加 2%
ZrOCl2·8H2O甲醇溶液 2.0 mL , 再加 95%乙醇定容至 50 mL。
室温避光放置 1 h 后 ,在 318 nm 波长处测量其吸光度。然后
计算各种藤茶每克干药材样品中黄酮的含量 ,结果见表 2。
表 2　各地不同月份采收藤茶样品中黄酮含量测定结果 (mg/ g)
产　地 4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月 11月
株　洲(叶) 303.9 412.2 404.1 357.4 302.5 224.8 213.0 190.8
株　洲(茎) 114.4 146.2 135.9 115.4 92.7 76.0 56.8 43.9
张家界(叶) 314.3 437.8 429.4 370.0 334.5 245.1 235.8 196.7
张家界(茎) 112.3 148.6 139.4 116.5 102.2 76.4 65.6 48.88
江　华(叶) 453.9
江　华(茎) 144.2
14 湖南中医学院学报 2004年第 24卷
3　讨论
从图 1的展开情况看 , 藤茶中黄酮类成分主要是二氢杨
梅素 ,另外还含有其他成分 , 但含量均很低 , 而且通过图 2 可
知 ,藤茶样品和二氢杨梅素锆盐的紫外光谱图基本一致 , 故
本实验采用以二氢杨梅素为指标对藤茶茎 、叶中总黄酮进行
含量测定 ,结果准确可靠。由于藤茶中黄酮类成分主要为含
有 5-羟基的二氢黄酮醇和黄酮醇类可与锆离子络合在 318
nm 处产生较强吸收 , 所测得的络合前后的吸收度差值与黄
酮类成分浓度在一定范围内成线性关系 , 可很好地扣除叶绿
素等背景的干扰 ,结果准确 , 精密度好。实验结果表明 , 相同
采集时间 、地点的藤茶中总黄酮含量叶高于茎 3～ 4 倍 , 全年
5 、6月份的含量高于其他月份;同年 5 月份中 ,江华产藤茶总
黄酮含量略高于张家界 ,株洲产稍低。
近年研究发现 , 黄酮类具有较强的抗自由基作用 , A 环
上5 , 7 —二羟基是其活性必需基团 ,且消除游离基活性大小与
B 环上羟基取代数目有关 , 数目越多活性越强[ 5] 。二氢杨梅
素正符合5 , 7 位有 2个羟基而且 B 环羟基数目多的特性 , 故
推测以二氢杨梅素为主要成分的藤茶总黄酮类是一种较好
的天然抗氧化剂。 经测定藤茶中总黄酮的含量在春夏季含
量高达约 40%左右 , 因此藤茶药材具有重要的开发利用价
值。
参考文献:
[ 1] 　中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(二册)补编[M] .
北京:科学出版社 ,1883.349 —356.
[ 2] 　何桂霞 ,何　群,裴　刚 ,等.瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量
测定[ J] .湖南中医药导报 , 1999 ,5(12):30 —31.
[ 3] 　张友胜 ,杨伟丽,熊皓平.类茶植物显齿蛇葡萄的研究利用现状
[ J] .茶叶通讯 , 2001 ,(1):19 —23.
[ 4] 　覃洁萍 ,梁山淡,何翠薇.差示分光光度法测定广西瑶族藤茶中
黄酮类成分的含量[ J] .中草药 , 2000, 33(7):607 —609.
[ 5] 　刘诗平.槲皮素及其衍生物的生物活性研究进展[ J] .中草药 ,
1991 , 22(4):183 —185.
(上接第 3页)止血的目的。NO 是体内调节血管舒张功
能的活性物质 ,置器后Cu —IUD压迫内膜组织致局部坏死
及无菌性炎症可刺激内皮细胞和巨噬细胞产生大量的 NO ,
可引起子宫螺旋动脉异常舒张 ,是置器后子宫异常出血的原
因之一[ 6] 。炎症局部在致炎物和炎症介质诱导下 NO 的合成
和释放增加 ,通过增加局部血流而促进血浆的渗出和形成水
肿致使月经增多。 iNOS 是在炎症中被诱导产生 , 生成大量
NO ,促进炎症反应 , 诸如血管扩张充血 、水肿 、细胞毒性以及
细胞因子依赖过程的间接作用。本研究结果显示宁环片能
降低置 Cu — IUD家兔子宫局部升高的 NOS 含量 , 调节血管的
收缩功能 ,减少炎症渗出 , 并间接地降低前列腺素的合成和
释放 , 提高溶酶体膜的稳定性等途径而使子宫异常出血减
少。
根据大量的临床研究 ,我们发现阴虚血瘀是置器后子宫
异常出血的主要病机之一 ,据此创立了以滋阴化瘀立法的宁
环片。本方由旱莲草 、阿胶 、炒蒲黄等组成 , 具有滋阴祛瘀止
血之功。方中以旱莲草为君 ,其归肝 、肾经 ,具有滋补肝肾 、
凉血止血之功。本品现代药理研究证明本品具有止血 、抗菌
消炎 、抗癌作用。方中以阿胶 、蒲黄为臣药 , 阿胶性甘 、平 ,质
地滋润 ,源于血肉 , 化于精血 ,既能补血 ,又可止血 , 是为血虚
诸证之要药 ,兼有出血者则更为适宜 。现代研究证实本品能
促进血中红细胞 、血红蛋白的组成 , 作用优于铁剂 , 能改善动
物体内钙平衡 ,增加钙的吸收和在体内的潴留。蒲黄为“蒲
之精华所聚” , 味甘无峻烈之弊 , 性平无寒热之偏 , 因其体轻
气香 , 故能“通经脉” 、“消瘀血” ,“导瘀结而治气血凝滞” , 具
有凉血止血 、活血散瘀 、利尿通淋之功用 , 现代实验研究表
明 , 本品有促凝血作用 , 能缩短凝血时间 , 增加血小板数目。
诸药配伍 , 共奏滋阴祛瘀止血之功。滋阴化瘀法能有效地治
疗置宫内节育器所致子宫异常出血 ,但其具体作用机制还有
待于进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　唐良萏 ,刘淑文.宫内节育器的并发症及其防治[ J] .中国实用
妇科与产科杂志, 2001 , 17(9):523.
[ 2] 　尤昭玲.全国高等中医药院校中西医结合专业系列教材 ,中西
医结合妇产科学[M] .北京:中国中医药出版社, 2000.434.
[ 3] 　尤昭玲.宫内节育器引起异常子宫出血中医治疗评述[ J] .湖
南中医药导报 , 1998 , 4(3):10 —11.
[ 4] 　尤昭玲 , 付灵梅.益气化瘀法对置Cu — IUD家兔子宫组织 6 —K —
PGF1α和TXB2 含量的影响[ J] .中国中医药科技 ,2000 , 7(5):322 —
323.
[ 5] 　尤昭玲 , 付灵梅 ,雷　磊 ,等.宫环止血片对置铜宫内节育器家
兔子宫匀浆中一氧化氮及一氧化氮合酶的影响[ J] .湖南中医
学院学报 , 2001 ,21(4):12 —14.
[ 6] 　许爱菊.带铜 T型宫内节育器致月经过多妇女经血NO 含量的
测定[ J] .中国卫生检验杂志 , 1999 , 9(4):封 2.
15第 1期 何桂霞 ,等　藤茶不同采收时期及不同部位的总黄酮考察