全 文 ：173
王晶晶1，孟宪军2
(1.辽宁医学院食品学院，辽宁锦州 121001;
2.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳 110161)
摘 要:以无梗五加果为原料，提纯获得多糖 ASP，分析其理化性质，并采用琼脂扩散滤纸片法比较纯化前后的多糖对
供试菌抑菌效果的影响。结果表明:无梗五加果多糖 ASP对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及根霉均有明显的抑制作用，未
纯化粗多糖仅对枯草芽孢杆菌及根霉有一定的抑制作用，两种多糖对金黄色葡萄球菌和黑曲霉均没有抑制作用。
关键词:无梗五加，多糖，抑菌活性
Effect of purification of polysaccharides from
Acanthopanax Sessiliflorus Seem.fruits on bacteriostasis activity
WANG Jing－jing1，MENG Xian－jun2
(1.Food Science College of Liaoning Medical University，Jinzhou 121001，China;
2.Food Science College of Shenyang Agricultural University，Shenyang 110161，China)
Abstract:A kind of extracted and purified polysaccharide ASP from Acanthopanax sessiliplorus fruits was got.
Comparing purified polysaccharide，which physical and chemical properties firstly were analyzed，with unpurified in
antibacterial activity to bacteriums tested by the method of filter paper disk .The results indicated that ASP had
evident antibacterial activity to Escherichia coli，Bacillus subtilis and Ahizopus. Unpurified polysaccharides also
showed some degree of antibacterial activity to Bacillus subtilis and Ahizopus.And neither had antibacterial activity
to Staphylococcus and Aspergillus niger.
Key words:Acanthopanax Sessiliflorus Seem.;polysaccharides;antibacterial activity
中图分类号:TS201.2 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2011)12－0173－02
收稿日期:2010－12－03
作者简介:王晶晶(1979－) ，女，硕士研究生，讲师，研究方向:食品营
养与安全。
无梗五加［1］［A.sessiliplorus(Ruqr.et Maxim.)Seem.］
是五加科五加属一种重要的药用植物，自古作为补
益强壮的药物，用于治疗阳痿、神经性消化不良、妊
娠疼痛、伤风及风湿症等。已有报道说明多糖具有
不同程度的抑菌作用:如鱼腥草多糖［2］，对葡萄球菌、
变形杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌具有抑制作用。但
关于纯化对多糖的抑菌活性影响的研究比较少。本
文以无梗五加果为原料，对纯化前后多糖对供试菌
的抑菌圈大小进行测定，初步评价了脱蛋白、脱色等
纯化处理对无梗五加果多糖的抑菌性能的影响。为
进一步研究无梗五加果多糖的抑菌活性提供科学的
理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
无梗五加 人工栽培无梗五加果实采于辽宁省
内，自然干燥;粗多糖、精多糖 ASP 自制;大肠杆菌
(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus)、黑曲霉(Aspergillus
niger)、根霉(Rhizopus) 沈阳农业大学土地与环境
学院菌种保藏室;牛肉膏，蛋白胨，生理盐水(0.9%
NaCl) ，琼脂，葡萄糖，苯甲酸钠 6%等。
超净工作台 苏州安泰空气技术有限公司设备
厂;手提式不锈钢蒸汽消毒器 上海三申医疗器械
有限公司;电热干燥培养箱 南京实验仪器厂;
DZF6050 真空干燥箱 上海一恒科技有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 培养基的配制［3］ 细菌培养基(牛肉膏蛋白
胨) :牛肉膏 0.3%，蛋白胨 1%，NaCl 0.5%，后放琼脂
1.5%～2.0%，水 1000mL，pH7.4～7.6，121℃灭菌 20min。
霉菌培养基［马铃薯培养基(PDA) ］:马铃薯
20%，葡萄糖 2%，琼脂 1.5%～2%，水 1000mL，pH 自
然。将马铃薯去皮、切成小块，蒸馏水冲洗无淀粉，
加蒸馏水(100g加至 400mL)煮开 25min，5min 后，将
马铃薯液 4 层纱布过滤。121℃灭菌 20min。
1.2.2 菌悬液的制备［4］ 预先将 5 种供试菌种接入
相应的斜面培养基进行活化，细菌在 37℃恒温培养
箱中培养 24h，霉菌置于 28℃恒温培养箱中培养
48h。然后分别挑取 1 环已经活化好的菌种放入 9mL
无菌生理盐水中，振荡均匀，制成一系列含菌量约为
105～106CFU /mL的菌悬液。
1.2.3 无梗五加果粗多糖及多糖 APS 的制备 将干
燥粉碎后的试材用石油醚回流一夜，60℃烘干备用。
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2011.12.149
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表 1 精多糖 ASP理化性质
性质 方法及现象 结论
性状 观察 淡黄色粉末
溶解度
冷水 难溶
热水、稀酸、稀碱 可溶
乙醇、丙酮、乙醚、正丁醇 不溶
粘度 观察 一般
紫外图谱 260、280nm处无吸收 不含核酸、蛋白
硫酸－咔唑反应 + 含有糖醛酸
碘－碘酸钾及三氯化铁反应 － 不含淀粉;非酚类物质
双缩脲及茚三酮反应 － 不含多肽;不含氨基酸
黄蛋白及费林试剂反应 － 不含苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸;不含还原糖
称取 2g脱脂试材，按照料水比 1∶70，80℃下浸提 3h，
浸提一次。浸提液经过滤后旋转蒸发浓缩到原体积
的 1 /5，5 倍醇沉，静置过夜，9000r /min，离心 15min，
然后 60℃干燥得到粗多糖。将粗多糖复溶先进行酶
解，然后经三氯乙酸 － Sevag 法脱蛋白一次，再用
Sevag法脱蛋白处理约 8 次，中间层无变性蛋白出
现。将脱除蛋白的多糖液经 30% H2O2脱色后蒸馏
水透析 48h，醇沉后将醇沉物用无水乙醇、乙醚、丙酮
反复洗涤，真空干燥得到淡黄色粉末状多糖 ASP。
1.2.4 多糖 ASP 理化性质分析［5］ 取适量纯化后的
ASP多糖溶液，观察其形态，进行紫外扫描，并进行
一系列的理化性质实验。其结果见表 1。
1.2.5 抑菌活性测定［6－7］ 选择吸水性强的滤纸，采
用琼脂扩散滤纸片法来测定不同浓度的粗多糖和精
多糖 ASP对供试菌的抑菌圈大小，了解其抑菌强度。
将粗多糖和精多糖 ASP 分别配制成浓度为
0.5%、1%、1.5%的样品溶液。用打孔器将新华 1 号
定性滤纸打成直径 6mm 的圆形纸片，分装于洁净干
燥的小培养皿内，160℃干热灭菌 2h，分别加入样品
溶液 0.5mL，让每张滤纸片都浸透样品，制成样品滤
纸片。
将灭菌的培养基分别倒入无菌培养皿中，每皿
15～20mL。待凝固后，用无菌吸管吸取 0.1mL被试菌
液，加到平板上，用玻璃棒把菌液涂布均匀，制成含
菌双碟平板。最后用无菌镊子夹取样品滤纸片，放
在含菌双碟平板上，每皿 3 片，细菌 37℃ 24h，霉菌
28℃ 48h培养后测定抑菌圈直径。
2 结果与分析
2.1 多糖 ASP的理化性质
由表 1 的分析可知，经过纯化的多糖 ASP 为一
种微溶于冷水，可溶于热水、稀酸、稀碱，不溶于乙
醇、丙酮、乙醚、正丁醇等有机溶剂，粘度一般，非淀
粉、非酚类物质，不含还原糖、蛋白质、核酸及氨基酸
的淡黄色粉末状酸性多糖。
2.2 无梗五加果粗多糖及精多糖 ASP 的抑菌活性
研究
采用滤纸片法研究无梗五加多糖对枯草芽孢杆
菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉以及根霉的
抑制效果，以抑菌圈直径的大小为评价指标。抗菌
素抑菌圈实验结果的判定标准为:抑菌圈直径 ＞
15mm为最敏感，10～15mm为中度敏感，7～9mm 时为
低度敏感，无抑菌者为不敏感［9］。实验结果见表2。无
梗五加粗多糖对枯草芽孢草杆菌及根霉有抑制作用，且
多糖浓度与抑菌圈直径呈现一定的线性关系。对大肠
杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉均没有抑制作用。
表 2 无梗五加果多糖的抑菌活性(mm)
被试菌
粗多糖(%) 精多糖(%)
0.5 1.0 1.5 0.5 1.0 1.5
大肠杆菌 － － － 9 11 13
枯草芽孢杆菌 7 12 13 11 14 17
金黄色葡萄球菌 － － － － － －
黑曲霉 － － － － － －
根霉 8 11 12 8.5 14 16
由表 2 可知，相对粗多糖而言，经过脱色、脱蛋
白简单纯化处理后的无梗五加精多糖 ASP不仅对枯
草杆菌及根霉高度敏感，抑菌圈直径明显扩大，且对
大肠杆菌也呈现中度敏感，但对金黄色葡萄球菌和
黑曲霉仍然没有抑制作用。
3 结论
无梗五加果粗多糖和多糖 ASP都对枯草芽孢杆
菌及根霉菌有一定的抑制作用，但就敏感度而言，提
纯后的精多糖 ASP 其抑菌效果明显提高，同时对大
肠杆菌也呈现出良好的抑制作用。这说明纯化可提
高多糖对某些供试菌的敏感度。两种多糖在所选择
的浓度范围内对金黄色葡萄球菌和黑曲霉都没有抑
制作用，其机理有待进一步研究。
参考文献
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