全 文 ：［收稿日期］ 20110721(001)
［第一作者］ 邸学，在读硕士，实验师，从事中药品种鉴定评价
研 究，Tel:15942491966，E-mail: dix _ email
@ 163. com
［通讯作者］ * 翟延君，博士，教授，从事中药品种鉴定与质量
标准 研 究，Tel:13019499386，E-mail:lnzyzyj @
sohu． com
HPLC测定藤梨根中熊果酸、齐墩果酸的含量
邸学1，王海波1，2，翟延君1* ，潘蕾1
(1. 辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600;2. 沈阳药科大学中药学院，沈阳 110016)
［摘要］ 目的:建立藤梨根药材中熊果酸、齐墩果酸的含量测定方法，对不同品种、产地药材进行测定。方法:采用反向
高效液相色谱法，色谱柱为 ZORBA × 300SB-C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 5%醋酸胺(76∶ 24) ，流速为 1. 0 mL·
min － 1，柱温 25 ℃，检测波长 210 nm。结果:熊果酸在 0. 492 ～ 2. 460 μg 线性关系良好(r = 0. 999 7) ，平均回收率为 97. 6%，
RSD 1. 8%;齐墩果酸在 0. 448 ～ 2. 240 μg 线性关系良好(r = 0. 999 9) ，平均回收率为 98. 7%，RSD 0. 6%。结论:该方法简单、
准确并且专属性强，可作为藤梨根药材质量控制方法。
［关键词］ 藤梨根;熊果酸;齐墩果酸;高效液相色谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)01-0066-03
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in
Radix Actinidiae by RP-HPLC
DI Xue1，WANG Hai-bo1，2，ZHAI Yan-jun1* ，PAN Lei 1
(1. School of Pharmaceutical Sciences，Liaoning University of Traditional Chinese
Medicine，Dalian 116600，China;2. School of Traditional Chinese Medicines，
Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
［Abstract］ Objective:HPLC method was established for determination of ursolic acid and oleanolic acid in
Radix Actinidiae． Method:HPLC was carried out on ZORBA × 300SB-C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)at 25 ℃
using methanol-0. 5% ammonium acetate (76∶ 24)as mobile phase with a flow rate of 1. 0 mL·min － 1 and detection
wavelength was at 210 nm． Result:Linear correlation (r = 0. 999 7)of the peak area and the concentration of
ursolic acid over the concentration range 0. 492-2. 460 mg·L － 1 was obtained． Linear correlation (r = 0. 999 9)of
the peak area and the concentration of oleanolic acid over the concentration range 0. 448-2. 240 mg·L － 1 was
obtained． The average recovery was 97. 6%，98. 7% and RSD was 1. 8%，0. 6% ． Conclusion:The method is
simple，rapid and accurate． It can be used for the quality control of Radix Actinidiae．
［Key words］ Radix Actinidiae;ursolic acid;oleanolic acid;RP-HPLC
藤梨根为猕猴桃科猕猴桃属植物中华猕猴桃或
软枣猕猴桃的根。分布在长江流域以南各地，具清
热解毒、活血散结、祛风功效，用于风湿性关节炎、淋
巴结核、跌打损伤、痈疖等［1］。我国民间常用藤梨
根治疗癌症，有一定的疗效［2］。文献记载藤梨根为
临床常用抗癌中药，目前尚缺少相应的质量评价方
法。熊果酸、齐墩果酸为本品的主要有效成分，它们
的含量直接影响藤梨根药材的质量。本研究对自采
的来源于软枣猕猴桃的藤梨根及商品药材藤梨根中
的熊果酸和齐墩果酸进行含量测定，为藤梨根药材
的质量控制提供科学依据。
1 仪器与试药
1100 Series高效液相色谱仪(美国 Agilent 公司) ，
ACCULAB ALC-110. 4 1 /万 天 平 (SARTORIUS) ，
CP225D 1 /10 万天平(SARTORIUS) ，KQ5200DB 型数
·66·
第 18 卷第 1 期
2012 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 1
Jan．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.01.029
控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。熊
果酸(成都曼思特生物科技有限公司) ，齐墩果酸
(成都曼思特生物科技有限公司) ，经检验纯度均超
过 98. 0%;试验中所用甲醇为色谱纯，水为娃哈哈
纯净水，其他试剂均为分析纯。所有溶液使用前均
由 0. 45 μm 孔径的滤膜过滤。自采药材经辽宁中
医药大学药学院翟延君教授鉴定为来源于软枣猕猴
桃 Actinidia arguta(Sieb． ＆ Zucc．)Planch． ex Miq．
的根，商品药材为来源于中华猕猴桃 A． chinensis
Planch．的根。
2 方法与结果
2 ． 1 色谱条件 色谱柱为 ZORBA × 300SB-C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 5%乙酸
铵(76∶ 24) ，流速 1. 0 mL·min － 1，柱温 25 ℃，检测波
长 210 nm，见图 1。
1. 齐墩果酸;2. 熊果酸;A. 对照品;B. 供试品
图 1 藤利根 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸、齐墩果
酸适量，加甲醇制成含熊果酸0. 090 4 g·L － 1，齐墩
果酸 0. 112 g·L － 1的溶液，摇匀即得。
2. 3 供试品溶液的制备 分别称取样品粉末各 3
g，精密称定，置于 100 mL 具塞锥形瓶中，加入 80%
乙醇 25 mL 超声 40 min(2 次)取续滤液，合并滤液，
水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至 5 mL 棕色量瓶
中，摇匀，用微孔滤膜(0. 45 μm)过滤，取续滤液备
用。进样量为 20 μL。
2. 4 标准曲线的绘制 分别精密吸取 0. 123 g·L － 1
的熊果酸和 0. 112 g·L － 1的齐墩果酸(4，8，12，16，20
μL)对照品溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱
条件下测定峰面积。以峰面积为纵坐标，以对照品
的量为横坐标，分别绘制标准曲线。得回归方程分
别为熊果酸 Y = 27. 899X － 76. 707，r = 0. 999 7;齐墩
果酸 Y = 17. 645 － 37. 39，r = 0. 999 9。熊果酸、齐墩
果酸分别在 0. 492 ～ 2. 46，0. 448 ～ 2. 24 μg 呈良好
线性关系。
2. 5 精密度试验 分别精密吸取同一熊果酸、齐墩
果酸对照品溶液各 10 μL，分别重复进样 6 次，测定
峰面积，RSD 分别为 1. 5%，1. 4%，表明仪器精密度
良好。
2. 6 重复性试验 分别取同一样品，按 2. 3 项下制
备方法，分别制备 5 份供试品溶液，按 2. 2 项下测定
条件分别测定熊果酸、齐墩果酸的含量，RSD 分别
为 1. 1%，1. 5%。表明方法重复性较好。
2. 7 稳定性试验 分别精密吸取同一熊果酸、齐墩
果酸测定供试品溶液 10 μL，分别于 0，2，4，6，8，10，
12 h 注入高效液相色谱仪，分别测定熊果酸、齐墩
果酸峰面积，其 RSD 分别为 1. 3%，1. 3%，表明样品
中熊果酸、齐墩果酸均在 12 h 内稳定。
2. 8 加样回收率试验 分别取已知含量的样品 6
份，精密称定，分别加入一定量的熊果酸和齐墩果
酸，测定熊果酸、齐墩果酸的含量，计算加样回收率，
结果见表 1，RSD 均 ＜ 2%，表明方法具有良好的准
确度。
2. 9 样品含量测定 分别取不同产地 8 批样品，按
2. 3 项下方法制备供试品溶液和 2. 2 项色谱条件下
进行测定，用外标法计算样品中熊果酸和齐墩果酸
含量，结果见表 2。
3 讨论与结论
3. 1 提 取 溶 剂 的 选 择 考 察 了 甲 醇、乙 醇
(100% ，95% ，80% )、乙醚、氯仿各溶剂超声、回
流、索氏提取 3 种提取方法。确定其最佳提取工
艺参数为 80% 乙醇超声提取 40 min，有利于藤梨
根中熊果酸和齐墩果酸的含量测定，可有效减少
干扰物质。
3. 2 检测波长的选择 由于熊果酸、齐墩果酸两者
是同分异构体，给分离带来一定难度，且两者无共轭
体系，紫外吸收波长较短，而在 210 nm 处两者灵敏
度较高，其他色谱峰干扰较少，分离最为理想，因此
本试验选 210 nm 测熊果酸、齐墩果酸的含量。
3. 3 流动相的选择 参考有关文献［3-4］，对甲醇-
1%醋酸体系、乙腈-0. 1%磷酸体系、甲醇-磷酸三乙
胺体系、甲醇-乙酸铵体系作为流动相，按不同比例
进行研究，经过优化、筛选而确定的。采用甲醇-
·76·
邸学，等:HPLC 测定藤梨根中熊果酸、齐墩果酸的含量
表 1 熊果酸、齐墩果酸加样回收率试验
成分
样品量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
熊果酸 1． 503 1 0． 067 0 0． 06 6 0． 133 5 100． 7 97. 6 1. 8
1． 502 3 0． 067 1 0． 06 8 0． 132 5 96． 1
1． 503 6 0． 067 2 0． 06 5 0． 132 0 99． 7
1． 501 6 0． 066 9 0． 06 7 0． 131 5 96． 4
1． 502 1 0． 067 2 0． 06 5 0． 132 0 99． 7
1． 503 2 0． 066 9 0． 06 6 0． 131 4 97． 7
齐墩果酸 1． 501 2 0． 078 1 0． 07 7 0． 155 3 100． 2 98． 7 0． 6
1． 502 5 0． 078 0 0． 07 6 0． 155 0 101． 2
1． 501 4 0． 077 9 0． 07 8 0． 154 4 98． 1
1． 501 7 0． 078 2 0． 07 7 0． 154 6 99． 2
1． 502 6 0． 078 1 0． 07 8 0． 155 2 98． 8
1． 502 2 0． 078 3 0． 07 7 0． 155 6 100． 4
表 2 藤梨根中熊果酸、齐墩果酸的含量(n = 3) mg·g － 1
No． 样品产地 /收集地 品种 熊果酸 齐墩果酸
1 千山中沟 藤梨根(软枣猕猴桃) 0. 287 0. 645
2 千山南沟 藤梨根(软枣猕猴桃) 0. 122 0. 456
3 牡丹江林场 藤梨根(软枣猕猴桃) 0. 279 0. 618
4 牡丹江二林场 藤梨根(软枣猕猴桃) 0. 450 0. 510
5 陕西西安 藤梨根(软枣猕猴桃) 0. 317 0. 236
6 安徽亳州 藤梨根(中华猕猴桃) 0. 235 0. 378
7 河北安国 藤梨根(中华猕猴桃) 0. 286 0. 504
8 湖北宜昌 藤梨根(中华猕猴桃) 0. 247 0. 527
0. 5%乙酸胺(76∶ 24) ，基线平稳，峰形、分离度效果
较佳，可以对熊果酸、齐墩果酸准确定量。
齐墩果酸具有消炎，增强免疫力，抑制血小板聚
集，降血糖等多方面的临床药理作用，是治疗急性黄
疸型肝炎和慢性病毒性肝炎较理想的药物，且毒性
低，不良反应少，而熊果酸具有多种生物活性，尤其
在抗肿瘤、抗氧化、抗炎保肝、降血脂方面的作用显
著。采用 HPLC 对藤梨根中熊果酸、齐墩果酸的含
量进行了测定，结果显示自采药材的含量普遍高于
商品药材的含量，提示应关注市售的藤梨根饮片的
质量。各种样品的含量差异可能与藤梨根品种、产
地、采收季节等因素有关，可为藤梨根的品种鉴定、
采收时间及质量评价研究提供参考。
［参考文献］
［1］ 中国药典 ．一部［S］． 1978:552．
［2］ 王铁僧，朱玉芳，王铁明，等 ． 江、浙地区民问及临床常
用抗癌中草药的原植物整理和应用介绍［J］． 中药材，
1992，15(1) :16．
［3］ 李喜凤，郝哲，邱天宝，等 ． 反相高效液相色谱法测定
蒲公英中齐墩果酸的含量［J］． 中国实验方剂学杂志，
2010，16(5) :52．
［4］ 陈宝龙，冯坤，郑朝华，等 ． 山楂中齐墩果酸和熊果酸
的测定［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(5) :73．
［责任编辑 蔡仲德］
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第 18 卷第 1 期
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