全 文 ：中南药学 2012 年 9 月 第 10 卷 第 9 期　Central South Pharmacy. September 2012, Vol. 10 No. 9
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[5] 王海霞，丁丽丹 .萹蓄治疗细菌性痢疾 [J].吉林医学信息，
1996，8（3）：34-35.
[6] 陈燕，兰芸 .萹蓄可治糖尿病 [J]. 湖北中医杂志，2000，22（7）：
32-34.
[7] 杨必成 .萹蓄苡仁治疗阴囊鞘膜积液 50例 [J] .浙江中医杂志，
1982，8：373.
[8] 袁呈云 .萹蓄治疗牙痛 81例 [J] .陕西中医，1986，1：48-49.
[9] 姚尊华 .中药治疗滴虫性肠炎 11例 [J] .辽宁中医杂志，1980，1：
46-47.
[10] 周海泉 .金钱萹蓄大黄汤治疗泌感 51例小结 [J].南通医药，
1982，3：62-62.
[11] 刘进财 .中医药治疗乳糜尿 30例 [J]. 陕西中医，1991，1：32.
(收稿日期： 2012-04-27； 修回日期： 2012-05-30)
2种卷柏药材中穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-
甲醚含量测定研究
邝俊维 1，徐康平 1，邹辉 1，龙红萍 1，3，喻凯 1，李静 1，权睿 1，王慧 1，谭桂山 1，2* （1.中南大学药学院，
长沙 410013；2.中南大学湘雅医院，长沙 410008；3.永州职业技术学院药学院系，湖南 永州 425100）
摘要：目的　建立同时测定穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-甲醚含量的方法，并在此基础上比较这 2种成分在翠云草
和卷柏中的含量差异。 方法　采用岛津 VP-ODS色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为乙腈 -0.2%醋酸水
溶液，梯度洗脱，流速 1.0 mL· min－ 1，检测波长为 338 nm,柱温为 30 ℃。结果　在此条件下，穗花杉双黄酮和罗
波斯塔 -4′-甲醚得到完全分离，均在 0.600～ 12.00 μg与峰面积线性关系良好（r＝ 0.999 9），平均回收率分别为
99.8%和 97.7%，RSD分别为 0.85%和 1.1%（n＝ 6）。结论　该含量分析方法操作简单、快速、准确、灵敏度高、
重现性好，为卷柏类药材中双黄酮类化合物含量测定提供参考。
关键词：卷柏；翠云草；穗花杉双黄酮；罗波斯塔 -4′-甲醚；含量测定
中图分类号：R927.2　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2012)09-0655-03
doi:10.3969/j.issn. 1672.2981.2012.09.005
Determination of amentofl avone and robustafl avone-4′-dimethyl
ether in 2 species of herbs Selaginella
KUANG Jun-wei1, XU Kang-ping1, ZOU Hui1, LONG Hong-ping1,3, YU Kai1, LI Jing1, QUAN Rui1, WANG Hui1, TAN
Gui-shan1,2* (1. School of Pharmaceutical Sciences, Central South University, Changsha 410013;2. Xiangya Hospital, Cen-
tral South University, Changsha 410008;3. Department of Pharmacy, Yongzhou Vocational and Technical College, Yongzhou
Hunan 425100)
Abstract: Objective To establish a method to determine the quantity of amentofl avone and robustafl avone-4′-dimethyl
ether in Selaginella uncinata (Desv.) Spring and Selaginella. Methods The determination was performed on a Shimadzu
VP-ODS column (4.6 mm×150 mm, 5 μm). Acetonitrile-0.2% acetic acid solution was used as the mobile phase with gra-
dient elution. The fl ow rate was 1.0 mL • min－ 1. The UV detection wavelength was 338 nm. The column oven temperature
was 30 ℃ . Results Amentofl avone and robustafl avone-4′-dimethyl ether were separated, showing good linearity at 0.646－
12.92 and 0.670 － 13.40 μg, respectively (r ＝ 0.999 9). The average recoveries were 99.8% and 97.7%, and the RSDs
were 0.85% and 1.1% (n＝ 6). Conclusion The method is accurate, simple and reproducible, and can be used to control
the quality of herbs Selaginella.
Key words: Selaginella.; Selaginella uncinata (Desv.) Spring.; amentofl avone; robustafl avone-4′-dimethyl ether; content
determination

基金项目：湖南省中医药科研计划（No.2009059）；湖南省中医药科研计划（No.2010004）；湖南省大学生创新训练（No.BY12076）。
作者简介：邝俊维，男，硕士研究生，主要从事天然药物化学研究，E-mail：kuangjunweiwill@163.com * 通讯作者：谭桂山，男，教授，
博士生导师，主要从事天然药物化学研究，Tel：13307317658，E-mail：tgs395@yahoo.com.cn
Central South Pharmacy. September 2012, Vol. 10 No.9　中南药学 2012 年 9 月 第 10 卷 第 9 期
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2.5 线性关系
分别精密吸取“2.2”项下的对照品溶液 2、4、6、8、
10、20、40 μL，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定峰面
积，以进样量 X (μg) 对色谱峰面积 Y进行线性回归求得两
者的线性方程分别为：穗花杉双黄酮：Y＝ 505.7X＋ 12.25
（r＝ 0.999 9），线性范围为 0.600～ 12.00 μg；罗波斯
塔 -4′-甲醚：Y＝ 439.4X＋ 13.66（r＝ 0.999 9）, 线性范
围为 0.600～ 12.00 μg。
2.6 加样回收试验
取穗花杉双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓
度为 0.114 g·L－ 1的溶液，作为回收试验的对照品添加溶
液。精密称取已知含量的翠云草叶 (含穗花杉双黄酮和罗波
斯塔 -4′-甲醚分别为 0.534 0、7.10 7 mg·g－ 1)粉末 2.5 g精密
加入质量浓度为 0.114 g·L－ 1的穗花杉双黄酮对照品 12.5 mL
和一定量的罗波斯塔 -4′-甲醚对照品，按“2.3”项下方法制备，
操作 6份，计算回收率，结果见表 1。
2.7 精密度、稳定性和重复性试验
在“2.1”项色谱条件下，对同一份供试品溶液重复进
样 6次，分别测得穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-甲醚的峰
面积，计算 RSD分别为 0.78%和 0.85%，表明精密度良好。
取同一份供试品溶液依次在 0、2、4、8、12、24、48 h测
定穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-甲醚的峰面积，计算 RSD
分别为 0.88%和 0.97%，表明供试品溶液在室温下 48 h内
稳定。取同一批翠云草药材，按“2.3”项下方法平行制备6份，
测定穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-甲醚的含量并计算 RSD
分别为 0.99%和 1.2%，表明该方法的重复性符合含量测定
要求。
2.8 样品分析
取各批次药材各 2 份，按“2.3”项下方法和“2.1”
项下色谱条件测定峰面积积分值，外标法计算含量，结果
见表 2。
卷柏属植物分布广泛，全世界共有 700余种，我国有
70余种，分布于全国各地 [1]。翠云草为卷柏科卷柏属植物
翠云草 [Selaginella uncinata (Desv.) Spring.]的全草，主要
分布于我国华东、中南、西南等地，其味微苦，性寒，全
草在民间作药用，具有清热利湿、止咳止血、抗菌消炎、
抗缺氧平喘以及抗肿瘤的作用 [2-4]。卷柏具活血止血之功效，
用于经闭通经、癥瘕痞块、跌打损伤 [1]。卷柏属主要化学
成分是以穗花杉双黄酮（amentoflavone）为代表的双黄酮
类化合物。研究表明，穗花杉双黄酮具有抗肿瘤、抗炎、
抗菌、血管舒张作用等生理活性 [5]。罗波斯塔 -4′-甲醚能
显著地抑制淋巴瘤 Raji和人呼吸道上皮 Calu-1肿瘤细胞的
增长 [6]。笔者建立了一种同时定量测定穗花杉双黄酮和罗
波斯塔 -4′-甲醚的分析方法。结果表明，该方法灵敏准确、
重现性高，可为卷柏类药材中双黄酮类成分的含量测定提
供参考。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1200 型高效液相色谱仪（配备低压四元泵、自
动进样器、柱温箱、DAD 检测器、ChemStations色谱工作站，
美国安捷伦科技有限公司），UVProbe-2450 紫外可见分光
光度仪（日本岛津公司）；BP211D 电子天平（0.000 01 g，
德国塞多利斯公司）。
1.2 试剂和药物
穗花杉双黄酮（amentoflavone）对照品（自制，经
HPLC检测，归一法计算纯度＞ 99.0%），罗波斯塔 -4′-
甲醚（robustaflavone-4′-dimethyl ether）对照品（自制，
经HPLC检测，归一法计算纯度＞ 99.0%）。乙腈为色谱纯，
水为纯净水并经 0.45 μm水系滤膜过滤，其余试剂为分析
纯。翠云草药材分别于 2008年采于湖南怀化和湖南永州，
经厦门大学李政基教授鉴定为 Selaginella uncinata (Desv.)
Spring.，卷柏药材于 2009年购于长沙佰佳中药饮片有限责
任公司，经中南大学李劲平副教授鉴定为 Selaginella.。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色 谱 柱 为 Shimadzu VP-ODS 柱（4.6 mm×150 mm，
5 μm）；流动相为乙腈 -0.2%醋酸溶液，梯度洗脱，0～ 25
min，乙腈 25%～ 30%，25～ 30 min，乙腈 30%～ 40%，
30～ 50 min，乙腈 40%～ 40%；流速为 1.0 mL·min－ 1；
检测波长为 338 nm；柱温为 30 ℃；进样量为 15 μL。
2.2 对照品溶液的配制
精密称取穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-甲醚各 30.00 mg，
置 100 mL容量瓶中，DMSO超声溶解并稀释至刻度，摇匀，
经 0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 供试品溶液的配制
精密称取药材粗粉（过 20目筛）5.0 g，每次加甲醇
60 mL，回流提取 3次，每次 60 min，合并提取液，滤过，
减压浓缩，转移至 50 mL容量瓶中，DMSO稀释至刻度，
摇匀，即得。
2.4 方法可行性考察
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，按“2.1”
项下色谱条件进样，穗花杉双黄酮和罗波斯塔 -4′-甲醚色谱
理论塔板数均＞ 10 000，对称因子分别为 0.965和 0.989，
与相邻杂质峰的分离度＞ 1.5，对照品穗花杉双黄酮和罗波
斯塔 -4′-甲醚以及翠云草及卷柏色谱图见图 1。
图 1 对照品（A）、翠云草（B）和卷柏供试品（C）色谱图
Fig 1 HPLC chromatogram of standard reference (A), Selaginella uncinata (Desv.) Spring sample (B) and Selaginella. sample (C)
1.穗花杉双黄酮（amentoflavone）；2.罗波斯塔 -4′-甲醚（robustaflavone-4′-dimethyl ether）
0 10 20 30 40 50
A B C
1
1
2
1
2
2
t/min t/min t/min
0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50
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表 1 加样回收试验
Tab 1 Recovery
成分
（content）
取样量
（sample
weight）/g
样品含
（sample weight）
/μg
加入量
（added amount）
/μg
实测含量
（detected amount）
/μg
回收率
（recovery）
/%
平均回收率
（average
recovery）/%
RSD
/%
穗花杉
双黄酮
2.510 1 340.3 1 425 2 780.0 101.0
99.8 0.85
2.505 1 337.6 1 425 2 755.3 99.5
2.512 1 341.4 1 425 2 775.8 100.7
2.502 1 336.0 1 425 2 743.8 98.8
2.511 1 340.8 1 425 2 755.3 99.3
2.508 1 339.2 1 425 2 758.5 99.6
罗波斯塔
-4′ -甲醚
2.510 17 838.5 17 800.3 35 232.8 97.7
97.7 1.1
2.505 17 803.0 17 820.2 35 381.5 98.6
2.512 17 852.7 17 880.6 35 515.2 98.8
2.502 17 781.7 17 800.5 35 126.9 97.4
2.511 17 845.6 17 850.7 35 258.4 97.5
2.508 17 824.3 17 870.6 35 011.7 96.2
表 2 样品测定结果
Tab 2 Sample determination
编号
（No.）
样品
（sample）
批次
（Lot No.）
采集地点
（area）
含量（content）/%
穗花杉双黄酮
（amentoflavone）
罗波斯塔 -4′-甲醚
（robustaflavone-4′-dimethyl ether）
1 翠云草 未知 湖南怀化 0.053 40 0.710 7
2 翠云草 081212-6 湖南永州 0.047 54 0.501 2
3 翠云草 080806-1 未知 0.061 96 0.841 1
4 卷柏 0906010 湖南长沙 0.151 00 –
3 讨论
3.1 对照品和供试品溶液制备溶剂选择
在供试品溶液制备的过程中，将甲醇提取液浓缩用
DMSO定容，对照品溶液制备亦采用 DMSO作为溶剂。对
照品中的穗花衫双黄酮在甲醇和 DMSO 2种溶剂中均有较
好的溶解性，罗波斯塔 -4′-甲醚在甲醇中的溶解性较差，无
法满足实验要求，因而在对照品和供试品溶液制备的过程中
均选择 DMSO作为溶剂是为了能够较好的溶解罗波斯塔 -4′-
甲醚，排除溶剂对实验的干扰。
3.2 实验意义
从表 1测定结果可以看出，2种同属植物之间既有一定
联系，也存在较大的差异：在 2种卷柏类药材中均检出花杉
双黄酮，但在含量上有一定差异，药材卷柏未检测出罗波斯
塔 -4′-甲醚。可见，同属植物之间双黄酮种类也不尽相同，
即其物质基础存在一定差异，其治疗的适应证也存在一定差
别。因此，在同属药物的相互替代上应当慎重，只有明确其
物质基础，方可进行科学替代应用。

参考文献
[1] 徐康平，申健，刘建锋，等 . 4种卷柏类药材中 2种特征性成
分研究 [J].中国药学杂志，2009，44（20）：1535-1539.
[2] 范晓磊，徐嘉成，林幸，等 . 翠云草中双黄酮类成分研究 [J].
中国药学杂志，2009，44（1）：15-19.
[3] 郑俊霞，郑扬，颜秋萍，等 .翠云草总黄酮的提取工艺研究 [J].
中药材， 2011，34（12）：1940-1942.
[4] 应华忠，王德军，徐孝平，等 .翠云草平喘作用的实验研究 [J].
江西科学，2004，22（5）：379-381.
[5] 龙红萍，徐康平，李炜，等 . 不同生长季节兖州卷柏中穗花杉
双黄酮的含量变化 [J]. 湖南师范大学学报：医学版，2011，8
（1）：76-78.
[6] Lin LC，Kuo YC，Chou CJ．Cytotoxic Biflavonoids from Selagi-
nella delicatula [J]．J Nat Prod，2000，63（5）：627-630．
（收稿日期： 2012-04-11； 修回日期： 2012-06-30）