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藤梨根提取液对小鼠染色体DNA抗诱变作用研究



全 文 :北京中医药 2010 年 3 月 第 29 卷 第 3 期 Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine,March,2010. Vol. 29,No.3
藤梨根是植物猕猴桃科猕猴桃属 Actinidia Chi-
nensis Planch.的根,又名阳桃根。 性平,味咸酸、涩,性
凉,无毒,主要功效为清热解毒、祛风除湿、利尿止血。
现代药理研究表明藤梨根有抗肿瘤作用,常用于消化
道肿瘤,如胃癌、食管癌、肠癌等,亦用于其他肿瘤的
治疗,在很大程度上改善了患者体征。 国内应用藤梨
根进行抗癌治疗的临床及基础研究的报道也日益增
多,如邹益友等[1]采用 MTT法研究中华猕猴桃根乙酸
乙酯提取物(主要含蒽醌类化合物)的抗癌活性,发现
其对白血病细胞的抑制率为 54.2%,对结肠低分化腺
癌细胞抑制率为 60.1%,提示藤梨根提取液对肿瘤细
胞有直接杀灭作用。 但是藤梨根对 DNA的抗诱变作
用及机制尚未见报道。 本实验拟从细胞、染色体角度
对藤梨根预防肿瘤的机制进行研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物:清洁级昆明种小鼠,雌雄各半,体
重(20±2)g,购于中国人民解放军军事医学科学院实
验动物中心[许可证号:SCXK-(军)-2002-001]。
1.1.2 药物:藤梨根购于晨益饮片药材公司,经中国
中医科学院广安门医院药检室鉴定为植物猕猴桃科
猕猴桃属 Actinidia Chinensis Planch.的根。 将 300 g
藤梨根用清水浸泡 12 h,以煎煮法煎煮 4~6 h,浓缩
至 100 mL。 小鼠给药量以 30 g(生药)·kg-1·bw-1为
低剂量,60 g(生药)·kg-1·bw-1 为高剂量,根据所需
浓度以蒸馏水调配藤梨根提取液。 环磷酰胺(cy-
clophosphamide,CP。山西普德药业有限公司提供,批
号 20061102)。
1.1.3 主要仪器:Olympus Vanox 万能显微镜 (日本
Olympus公司),LD4-2型离心机(北京医用离心机厂)。
1.2 方法
1.2.1 分组:将小鼠随机分为 6 组,即空白对照组、
环磷酰胺组、低剂量 I 组、低剂量 II 组、高剂量 I 组、
高剂量 II组,每组 7只,雌雄各半。
1.2.2 给药情况:各组小鼠灌胃给药,空白对照组、
环磷酰胺组每日给予蒸馏水 0.4 mL/只;低剂量组和
高剂量组每日分别给予低剂量或高剂量藤梨根提取
液 0.4 mL/只。
1.2.3 实验方法:于给药第 2天,予环磷酰胺组、低剂
量 I组、高剂量 I组小鼠腹腔注射 CP40 mg·kg-1·bw-1。
给药第 4天脱颈椎处死各组小鼠,取双侧股骨于 37℃
生理盐水中剪碎、研磨,吸取细胞悬液,1000 r·min-1
离心 5 min,弃上清液,轻吹后再次 1000 r·min-1 离
心 5 min,弃上清,涂片。 待玻片干燥后,浸于甲醇中
固定 10 min, 取出, 以扣染法 Giemsa 染色15 min,
PBS缓冲液洗片。 在 100 倍光镜下观察记录各组小
鼠产生微核 (micronucleus,MN) 的嗜多染红细胞
(polychromatic erythrocyte,PCE) 数, 每只小鼠记录
1000个 PCE,并计算各抗诱变组的 MN 抑制率。 MN
抑制率=[(环磷酰胺组 MN 细胞数-抗诱变组 MN 细
·方药经纬·
藤梨根提取液对小鼠染色体 DNA抗诱变作用研究 *
刘 欢 1 郭 雁 1 崔向清 1 陈维志 1 夏 彤 2 夏 冰 1 景 晨 2 黄梅花 1 马海强 1 杨向竹 1
【摘要】 目的 观察藤梨根提取液对小鼠染色体 DNA 抗诱变作用。 方法 将清洁级昆明小鼠随机分为空白对照组、环磷酰
胺组、低剂量 I组、低剂量 II组、高剂量 I组、高剂量 II 组 6 组,分别予蒸馏水、低剂量藤梨根提取液、高剂量藤梨根提取液灌胃;
除高剂量 I 组、高剂量 II 组外,于给药第 2 天予各组小鼠腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)诱变,给药第 4 天处死各组
动物。 通过小鼠骨髓细胞嗜多染红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)微核(micronucleus,MN)的发生情况,观察藤梨根的抗诱
变作用。 结果 低、高两种剂量的藤梨根提取液对 CP 诱发的小鼠 MNPCE 有明显的抑制作用,低剂量、高剂量组的 MN 发生率与
环磷酰胺组比较差异有统计学意义(P <0.01,P <0.05)。 低、高两种剂量的藤梨根提取液均未显示有促进小鼠体内自发 MN 和有
抑制自发 MN 产生的作用。 结论 藤梨根提取液对诱变剂引发 DNA 的损伤具有抑制作用。
【关键词】 藤梨根;煎剂;小鼠,环磷酰胺,染色体 DNA;抗诱变
* 北京中医药大学校级科研基金项目
作者单位:1.100029,北京中医药大学基础医学院生物教研室
2.100053,中国中医科学院广安门医院药剂科
通信作者:杨向竹,Tel:(010)64286976,E-mail:xiangzhuy@sohu.com
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DOI:10.16025/j.1674-1307.2010.03.026
北京中医药 2010 年 3 月 第 29 卷 第 3 期 Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine,March,2010. Vol. 29,No.3
表 1 藤梨根提取液对小鼠体内 PC 诱导 MN 的拮抗作用
与环磷酰胺组比较,*P <0.05,**P <0.01
组别 CP(mg·kg-1) 灌胃剂量(g 生药·kg-1·bw-1) MNPCE 数 PCE 数 MN 率(‰,x±s) MN 抑制率(%)
空白组 - - 22 4353 5.05±2.10 -
环磷酰胺组 40 - 92 6000 15.33±3.12 -
低剂量 I 组 40 30 52 7000 7.43±2.02** 51.533
高剂量 I 组 40 60 59 6015 9.81±2.49* 36.008
胞数)/环磷酰胺组 MN 细胞数]×100%。
2.3 统计学方法
采用 SAS 9.0 统计软件进行数据分析, 全部数
据以均数±标准差(x±s)表示,多组间显著性检验用
SNK法。
3 结果
3.1 藤梨根提取液对小鼠体内 PC诱导 MN的影响
低、 高两种剂量的藤梨根提取液均能拮抗环磷
酰胺诱导的微核的产生, 低剂量 I 组的抑制率为
51.3 %,其 MN 发生率与环磷酰胺组比较,差异有统
计学意义(P <0.01);高剂量 I 组的抑制率为 36.0 %,
其 MN 发生率与环磷酰胺组比较, 差异有统计学意
义(P <0.05)。 见表 1。
3.2 藤梨根提取液对小鼠体内自发 MN 的影响
低、 高两种剂量的藤梨根提取液均未显示有促
进或抑制小鼠体内自发 MN 产生的作用。 见表 2。
4 讨论
多数肿瘤是由化学因素、物理因素、生物因素引
起,“诱变-基因突变-癌变”学说已被多数学者所公
认。癌的始发因素使细胞发生了从 DNA损伤到突变
形成的一系列不可逆转的本质性改变。 促癌是过度
增生的始发细胞克隆后连续增殖的过程, 只有少数
遗传稳定性较低, 并且受内外源性遗传毒性物质继
续作用的细胞,持续发生基因突变等遗传学变化,最
后才获得自主增殖能力而形成肿瘤[2]。抗诱变作用有
助于防止癌肿的发生。 本实验重点探索藤梨根提取
液在机体遭受化学诱变剂打击情况下发挥的作用。
结果表明, 两种剂量的藤梨根提取液均能拮抗 PC
诱导 MN 的产生, 低浓度藤梨根提取液对 MN 诱导
的小鼠骨髓 MNPCE 的增高具有显著的抑制作用,
提示藤梨根在提高染色体稳定性上起到一定的作
用,从而抑制促癌阶段的病变,可能有助于防止癌肿
的发生。 而高浓度藤梨根提取液抗诱变结果显示较
低浓度弱, 有可能是低浓度藤梨根提取液有较强的
DNA 损伤保护作用, 亦有可能与样本量小有关,需
在以后的实验中加大样本量进一步研究验证。
藤梨根在临床用于治疗消化道肿瘤由来已久。
近几年实验研究结果表明, 藤梨根复方制剂在体内
外均表现出抑制肿瘤转移[4]、逆转多药耐药[5]、对化疗
药物减毒增效[6]的作用。 因此,加深对藤梨根的多层
面研究,对于临床指导用药具有积极意义。
参考文献
[1] 邹益友,谭桂山.猕猴桃根抑制肿瘤细胞的实验研究 [J].
湖南中医药导报,1999,5(4):37.
[2] 鄂征.癌变机理研究[M].北京:北京出版社,1999:77.
[3] 潘云华,潘琦.复方三根制剂对 T739 小鼠肺癌转移的实
验研究[J].浙江中西医结合杂志,2005,15(2):76-78.
[4] 冯正权,郭勇,朱宁希,等 .复方三根制剂逆转多药耐药
的实验研究[J].中国肿瘤,2003,12(6):370-371.
[5] 林玲,章巧萍,俞丽霞,等.三根祛瘤方对 DNA 损伤的保
护和对化疗药减毒增效作用的研究[J].浙江中医学院学
报,1997,21(5):30-32.
[6] 孙雪飞,陈景寒,王德江,等 .藤梨根提取液抗肺癌作用
的实验研究[J].山东大学学报,2006,44(12):1268-1272.
作者简介:刘欢,女,北京中医药大学 2003 级中
西医结合方向七年制研究生。
杨向竹,女,博士,讲师。 研究方向:药物临床药
理及基础理论研究。
(收稿日期:2009-09-27)
表 2 藤梨根提取液对小鼠体内自发微核的影响
与环磷酰胺组比较,*P >0.05;与空白组比较,△P <0.01
组别 CP(mg·kg-1) 灌胃剂量(g 生药·kg-1·bw-1) MNPCE 数 PCE 数 MN 率(‰,x±s)
空白组 - - 22 4353 5.05±2.1
环磷酰胺组 40 - 92 6000 15.33±3.12
低剂量 II 组 40 30 40 7000 5.71±1.76*△
高剂量 II 组 40 60 30 7000 4.29±1.53*△
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