全 文 ：2 98 20 7, Vo L 2 .8 八or
. 仍 口品科字 浓分析检侧
无梗五加果金丝桃昔的分离制备和鉴定
冯 颖 ` , 孟宪军 ’ , 王建国 2
l(
.沈阳农业大学食品学院 , 辽宁沈阳 1 0 161 ; .2 辽宁省质量技术监督局 , 辽宁沈阳 1 以】0 3 )
摘 要 : 采用薄层层析法对树脂纯化后的无梗五加果总黄酮组成成分进行了分析 , 结果表明无梗五加果中含有药
用成分金丝桃昔 。 应用制备型高效液相色谱和聚酞胺对其进行了制备 , 采用紫外光谱、 红外光谱和核磁共振对高
效液相制备的金丝桃普进行了鉴定 。 为无梗五加果的开发利用提供了理论依据 。
关健词 : 无梗五加 ; 黄酮 ; 金丝桃昔 ; 制备
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中图分类号 : R 2 8 .4 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 2一6 3仪20 7邓一02 98一03
无梗五加为五加科五加属植物 , 长期以来 , 在东
北地区 , 将无梗五加当作刺五加药用 , 未见不良反应
报道 。 为扩大药用资源 , 无梗五加已引起国内外学者
的浓厚兴趣 。 但是长期以来人们对它的研究仅仅局限于
根 、 茎 、 叶部位 , 而对于无梗五加果实中化学成分的
研究却很少 , 对于黄酮化合物的研究未见报道川 。 本文
对树脂纯化后的无梗五加果总黄酮组成成分进行了分
析 , 发现其含有药用成分金丝桃昔 , 对其进行了分离
制备和进一步的鉴定 。
材料与方法
L l 材料与试剂
无梗五加果 丹东农科院提供 。
猪油 市售新鲜猪板油 , 文火熬制 , 过滤后备
用 。
芦丁 、 榭皮素 (生化试剂 ) 中国医药集团上海化学
试剂公司 : 金丝桃昔 D E L T A 天然有机化合物信息中
心 ; 正丁 醇 、 冰醋酸 、 甲醇 、 乙醇 、 氛化铝 、 正
收稿日期 : 20 0 6一 0 6 一 0 7
基金项目: 沈阳农业大学青年教师科研基金项目
作者简介 : 冯颖 ( 1 9 7 5 一 ) , 讲师 , 博士 , 研究方向为果蔬深加工 、 天然产物与功能食品 .
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娥分析检侧 ` 品科字 20 7, Vo L 28, 从 , . 仍 2 9 9
庚烷 、 甲酸 、 亚硝酸钠 、 硝酸铝 、 氢氧化钠 、 磷酸
和三乙胺等均为分析纯 : 十二烷基硫酸钠 s( D s) 为化学
纯 : 可溶性淀粉 ; 色谱 级甲醉 。
柱层析聚酞胺粉 ( 80 ~ 10 目) 、 薄层层析用聚酞胺薄
膜 ( 10 c m x l o c m )和制备型聚酞胺薄层色谱板 (2 0 c m x
20
c
m) 浙江台州市路桥四甲生化塑料厂 。
12 仪器与设备
U V
一
8三用紫外分析仪 无锡科达仪器厂 ; B S Z -
1 0 0 自动部分收集器 、 H L 一 2恒流泵 、 玻璃层析柱 上
海沪西分析仪器厂 ; 制备用高效液相色谱仪 L C 一 10 日
本岛津公司 : 制备柱 (x r o m a s i l , C : : , 1 0 e m X 3 0 0m m ,
s p m )
、 分析用高效液相色谱仪及 C , . 色谱柱 美国
W at er s 公司 ; 红外光谱仪 、 核磁共振仪 瑞士 B ur k er
公 司 ; 点样毛细管 、 层 析缸等 。
13 方法
1.3 1 无梗五加果总黄酮的制备
干燥的无梗五加果粉末 , 石油醚脱脂后 , 用 5 0 %
乙醉在 9 0 ℃下回流提取 4 h , 得浓缩液 (0 . s m gl m l) , 上
H PD 60 大孔吸附树脂 (上样量 (iln :) 树脂用量 (g) 为 10 : l) ,
蒸馏水冲洗至近无色 , 7 0 % 乙醉洗脱至基本无色 , 回
收乙醇 , 所得固体即为总黄酮 。
1
.
.3 2 无梗五加果总黄酮组成成分的薄层色谱分析
取无梗五加果总黄酮 10 m g , 以 s m l 甲醇溶解 , 作
为供试液 。 另配制含芦丁 Z m gl m l 、 金丝桃贰 Z m gl m l 、
搬皮素 .0 s m gl m l 的对照品溶液 。 吸取对照品溶液和供试
品溶液各 10 。 ’ l , 分别以正丁醇 : 乙酸 :水 (:4 1 : 5) 、 微乳液
为展开剂 , 在聚酞胺薄膜上进行层析 , 以 1% A IC I , 溶液
为显色剂 , 在 3 6 5 n m 下 , 观察层析结果 。
微乳 液展 开剂 的配制 : 按照 十二烷 基硫 酸钠
( s n s )
、 正 T 醇和正庚烷 、 水的质量比 , 即 1 1 . 7 : 1 5 . 6 :
2
.
7 : 7 0 的比例称取各种试剂 , 加适量水搅拌溶解 , 再加
水至足量 ,混匀后静置 2 4 h 后备用 。 向微乳液中加入 6 %
的甲酸 (体积 比) , 以抑制层析时的斑点拖尾现象 。
1.3 3 无梗五加果金丝桃普的分离制备
无梗五加果总黄酮用水溶解 , 经 乙酸乙酷萃取 ,
回收乙酸乙酷 , 所得 固体以色谱级甲醇溶解 , 以金丝
桃普标准品为对照 , 用制备型高效液相色谱法进行分离
制备 , 流动相 : 甲醇 : 水 (4 5 : 5 5) ; 流速 : 1 . 2 m l m in :
固定相 : C , . ; 检测器 : 示差折光检测器 。 采用聚酞
胺树脂对高效液相制备样品进一步纯化 。
1.3 4 无梗五加果金丝桃昔的鉴定
采用面积归一化法用高效液相色谱对制备的样品进
行纯度鉴定 2[] : 色谱柱为 G . (4 . 6 n u n x 25 0m m , s p m) 柱 ,
流动相 : V 甲献 V 。 . 02 , . ol l L二 = 5 5 : 4 5( 混合后用三乙胺调
p H 3
.
o一 3 . 2 ) , 检测波长 3 6 o n m , 流速 1 . o m l lm i n , 柱温
2 5 ℃ 。 采用薄层色 谱 、 紫外 光谱 、 红 外光谱及 核
磁共振波谱对高效液相色谱柱制备的样品进行结构
鉴 定 。
结果与分析
2
.
1 无梗五加果总黄酮组成成分的薄层色谱分析
样品自左至右依次为无梗五加总黄酮 、 无梗五加总
黄酮重复 、 金丝桃 普 、 芦丁 、 搬皮素 。
图 1 正丁醉 一 乙酸 一水为展开剂薄层色讼圈
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o f flva o n o ld s w ith b u t . n lo
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圈 2 徽乳薄层色诺圈
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.
2 M ic or e m u ls io n th in
·
l即 e r c h or m a to g ar Ph y of f lvao n o id s
由薄层色谱图 1 、 2 可知 , 无梗五加果总黄酮中不
含有芦丁 、 榭皮素 , 但谱图中有一斑点 R , 值与金丝桃
贰对照品相同 , 该斑点在紫外灯 ( 3 6 5 n m )下呈棕黄色 ,
喷显色剂后呈亮黄色 , 可见光下为黄色 , 氨气熏蒸后 ,
可见光下为黄色 , 紫外灯下为棕黄色 , 与金丝桃贰对
照品一致 , 说明无梗五加果中含有金丝桃贰 。 据文献
【3] 报道 , 金丝桃贰对钙内流有较强的选择性抑制作用 ,
能抑制脂质过氧化 , 对心肌缺血 、 再灌注损伤具有保
护作用 , 对记忆障碍也有明显的改善作用 。 此发现对
无梗五加果的开发利用提供了依据 。
22 无梗五加果金丝桃贰的分离鉴定
样品重复上样两次 , 经高效液相色谱柱制备 , 所
30 2田7, Vo L 28, 从 , . 仍 目品科字 浓分析检测
156
.
4 3 6 3 7
.
8 4
1 14
.
8 2 47 5
.
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2 7 22
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5 4 3 3
.
8 1 4 5
.
0 8
时间 (m访 )
圈 3 高效液相色语制备金丝挑普的对照品谧图
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4 7 1
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2 3
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圈 5 无梗五加果金丝桃昔的高效液相色谁制备图 (二次上柱)
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时间 (面 n )
圈 4 无提五加果金丝挑昔的高效液相色诺制备圈 (一次上柱 )
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时间 (皿 )
图 6 制备样品金丝桃昔纯度测定的 Hp LC 图
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.
6 P u d yt d e et 而 in a t jo n o f Per 四 ar 打ve hyP e d n b y H P LC
得金丝桃昔纯度为 9 2 . 8 7% (见图 6) 。 薄层层析显示除显
著的金丝桃昔斑点以外 , 还有一微弱的蓝色小斑 点 。
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( C = 0 )
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.
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,
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.
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C )
。 与文献 [4 ~ 6 ]数据基本一致 。 高效液
相色谱制备见图 3 ~ 5 。
.2 3 制备金丝桃昔的聚酞胺树脂纯化
经高效液相色谱柱制备 , 所得金丝桃昔纯度为
9 2
.
8 7%
, 薄层层析金猫示除显著的金丝桃昔斑点以外 , 还
有一微弱的蓝色小斑点 。 经实验研究发现 , 采用聚酞
胺树脂 , 以 3 0 % 乙醉洗脱 , 可除去薄层图上显示的蓝
色斑点 , 再用 5 0 % 乙醉洗脱 , 得到金丝桃普 , 最终产
品纯度可达 9 8 % 以上 。
3 结 论
薄层定性分析表明 , 无梗五加果中含有药用成分
金丝桃昔 。 采用制备型高效液相从大孔树脂纯化后的
无梗五加果总黄酮中提取金丝桃昔 , 产品纯度可达
9 2% 以上 。 聚酞胺树脂进一步纯化 , 最终产品可达 9 8%
以上 。 为无梗五加果和其金丝桃昔的有效利用起到了
指 导作用 。
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