全 文 ：　药物定性定量研究　
天山雪莲花中黄酮类成分的定量研究
新疆特丰药业股份有限公司(乌鲁木齐 830054)　云　琦　冯　崴　马小华
摘　要:目的:建立天山雪莲花中黄酮类的定量方法。 方法:以芦丁为对照品 , 用分光光度法测定药材中总黄酮的含量;用
HPLC 方法检测药材中芦丁的含量。结果:经方法学的确证 ,各项指标达到要求。结论:本方法可以作为天山雪莲花中黄酮类
的定量方法。
关键词:天山雪莲花;芦丁;总黄酮;分光光度法;高效液相色谱法
中图分类号:R291.5　文献标识码:B　文章编号:1006—6810(2005)03—0024—02
　　天山雪莲花是部颁药材标准 01 册收载品种 , 为菊科植
物雪莲花 Saussurea involucrate Kar.et.Kin.的干燥地上部分 , 7
月花开时采集 、阴干。能祛风胜湿 , 通经活络。天山雪莲花
为新疆习用药材 ,通过长期的临床实践和药理研究 , 证明对
医治风湿类疾病具有很好的效果。但是 ,在药材的质量控制
方面 , 目前尚无定量方法 ,为本品的质量控制和广泛应用带
来诸多不便。本文旨在建立天山雪莲花的定量方法 , 以进一
步控制产品质量 ,为药材标准的修订提供参考。目前认为 ,
天山雪莲花所含的黄酮类物质具有抗炎 、抗风湿 、镇痛等作
用 ,本文在文献〔1 ,2〕的基础上研究了药材中黄酮类成分的定
量方法 , 采用比色法测定药材中总黄酮的含量 , 采用 HPLC
方法测定药材中芦丁的含量 ,同时对药材中总黄酮和芦丁的
含量进行了比较。
1　仪器与试药
日本岛津 UV-2401 紫外可见分光光度仪;Agilent110 高
效液相色谱仪;德国 Sartoris(d=0.01mg)电子天平;芦丁为含
量测定用(中检所 , 批号 0082-9705);天山雪莲花(批号为
030210-1 , 030210-2 , 030210-3), 购自新疆医圣医药公司 ,
符合部颁天山雪莲花药材标准。
2　方法与结果
2.1　分光光度法
2.1.1　对照品溶液的制备:精密称取在 120℃减压干燥至恒重
的芦丁对照品 24.96mg置 100ml量瓶中 ,加 60%乙醇 70ml , 置水
浴上微热使溶解,放冷,加 60%乙醇稀释至刻度 ,摇匀。
2.1.2　吸收波长的确定:精密吸取对照品溶液 3.0ml 置
25ml容量瓶中 , 加水至 6ml , 加 5%NaNO2 溶液 1ml , 摇匀 , 放
置 6min , 加 10%AL(NO3)3 溶液 1ml ,摇匀 ,放置 6min ,最后加
NaOH试液 10ml , 再加 60%乙醇稀释至刻度 , 摇匀 , 放置
15min ,在 200nm ～ 900nm 波长扫描。结果见图 1。 可见在
510nm 处有较大吸收。
图 1　芦丁显色后的光谱图
2.1.3　标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液 1.0ml 、2.
0ml 、3.0ml、4.0ml 、5.0ml、6.0ml , 分别置 25ml容量瓶中 , 各加
水至 6ml ,加 5%NaNO2 溶液 1ml , 摇匀 , 放置 6min ,加 10%AL
(NO3)3 溶液 1ml , 摇匀 , 放置 6min , 最后加 NaOH 试液 10ml ,
再加 60%乙醇稀释至刻度 , 摇匀 , 放置 15min , 在 510nm 波长
处测定吸收度 , 结果见表 1。
表 1　分光光度法线性考察数据
样品 浓度(C.μg/ml) 吸光度(A)
1 9.984 0.112
2 19.968 0.226
3 29.952 0.345
4 39.936 0.452
5 49.920 0.575
6 59.964 0.690
　　以吸收度(A)为纵坐标 , 浓度 C(μg·ml-1)为横坐标 , 得
线性回归方程:A=0.0115C-0.0036 , r=0.9998 ,线性范围 9.
98μg·ml-1～ 59.96μg·ml-1。
2.1.4　样品的制备:取本品 , 粉碎(过 3 号筛), 取粉末适量 ,
于 60℃干燥 6h ,取约 0.5g , 精密称定 ,置 50ml棕色瓶内 , 加入
无水乙醇 25ml ,超声 30min , 再加入水 20ml超声 45min , 取出 ,
放至室温 , 用水定容至刻度 ,摇匀 , 过滤。精密吸取滤液4ml ,
置 25ml棕色瓶内 , 照标准曲线制备项下的方法 ,自“加水至
6mL”起同法制备 , 即得。
2.1.5　重复性试验:同法制备样品 6 份 , 测定总黄酮的含
量 , 结果 RSD为 0.98%。
2.1.6　回收率试验:取本品约 0.25g , 精密称定 , 共 9 份 , 各
加入适量对照品溶液 , 制备高 、中 、低 3 浓度样品 , 同供试品
方法处理 , 得溶液 ,检测 , 得回收率分别为:高浓度 100.1%(n
=3),中浓度 100.5%(n=3),低浓度 99.3%(n=3)。平均回
收率为 99.9%。
2.1.7　样品的测定:照样品的制备方法检测 3 批药材含量 ,
结果见表 3。
24　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2005 年 5月第 3 期
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2005.03.025
2.2　高效液相色谱法
2.2.1　色谱条件:色谱柱:Agilent ZORBAX SB -C18(4.6×
250mm , 5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.6%磷酸(15:15:70);
柱温:45℃;流速:1.0mL·min-1;检测波长 355nm;样样量
10μl。
2.2.2　芦丁对照品储备溶液的制备:称取在 120℃减压干燥
至恒重的芦丁对照品 10.47mg , 置 100mL 棕色量瓶内 , 用
60%乙醇溶解并定容至刻度 ,冷藏保存。
2.2.3　检测波长的确定:称取在 120℃减压干燥至恒重的芦
丁对照品适量 ,流动相溶解稀释 , 用紫外分光仪在 200nm ～
900nm 扫描 , 得最大吸收波长 355nm。
2.2.4　线性范围的考察:精密吸取芦丁对照品储备溶液 , 分
别稀释为 3.77μg·mL-1、11.31μg·mL-1、18.85μg·mL-1、26.
38μg·mL-1、33.92μg·mL-1的溶液 ,进样 10μl。结果见表 2。
表 2　液相法线性考察数据
样品 浓度(μg/ml) 峰面积
1 3.77 62736
2 11.31 190197
3 18.85 329206
4 26.38 454278
5 33.92 587967
　　以样品浓度(μg·mL-1)为横坐标 , 峰面积(A)为纵坐标
计算回归方程 , A=17287C r=0.9997。表明芦丁在 3.77μg·
mL-1～ 33.92μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。
2.2.5　精密度试验:取芦丁高浓度溶液(26.38μg·mL-1), 中
浓度溶液(18.85μg·mL-1)、低浓度溶液(11.31μg·mL-1)检测
3 日 ,得峰面积 , RSD为高浓度 0.94%(n=9), 中浓度 1.43%
(n=9),低浓度 1.13%(n=9)。
2.2.6　供试品溶液的制备:取本品 , 粉碎(过 3 号筛), 取粉
末适量 ,于 60℃干燥 6h , 取约 0.25g ,精密称定 ,置 50mL棕色
瓶内 , 加入无水乙醇 25mL ,超声 30min , 再加入水 20mL 超声
30min , 取出 ,放至室温 , 用水定容至刻度 ,摇匀 , 过滤 ,即得。
2.2.7　重复性:同法制备样品 6 份 , 测定芦丁的含量 , 结果
RSD为 0.76%。
2.2.8　回收率试验:取本品约 0.12g , 精密称定 , 共 9 份 , 各
加入适量对照品溶液 , 制备高 、中 、低 3 浓度样品 , 同供试品
方法处理 ,得溶液 , 检测 ,得回收率分别为:高浓度 100.1%(n
=3), 中浓底 100.5%(n=3),低浓度99.3%(n=3)。平均回
收率为 99.9%。
2.2.9　样品的测定:照样品的制备方法检测 3 批药材含量 ,
色谱图见图 2 ,检测结果见表 3。
a.芦丁对照品色谱图　b.雪莲样品色谱图
图 2　芦丁和样品检测色谱图
表 3　总黄酮和芦丁的含量检测结果(n=3)
样　　品 总黄酮(mg·g-1) 芦丁(mg·g -1)
030210-1 22.00 3.59
030210-2 22.74 3.61
030210-3 22.11 3.67
均　　值 22.30 3.62
3　讨　论
3.1　天山雪莲花为干燥地上部分 , 可分为茎 、叶和花部分 ,
经测定茎与叶和花部分黄酮类差别较大 , 再者茎难以粉碎 ,
而叶和花易碎 , 所以样品处理时宜分别处理。
3.2　研究比色法测定总黄酮吸收波长时发现 , 因溶剂的种
类 、溶剂的 pH 和溶剂含量不同 , 波长可明显发生红移或紫
移 , 所以宜固定溶剂。
3.3　天山雪莲花中总黄酮和芦丁的提取采用超声提取方
法 , 并与常规的回流方法进行对比 ,结果表明超声法简便 , 提
取完全。
3.4　对色谱方法的耐用性实验研究发现不同分析柱(安洁
伦和岛津)、不同柱温(20℃～ 45℃)和不同流动相 pH 值(pH1
～ 4)情况下 ,本方法稳定可行 , 耐用性好。
3.5　研究表明:本方法的流动相下 , 柱效远高于文献方法 ,
提高了分离性能增加了该方法的专属性。经确证本色谱条
件可以用于复方雪莲胶囊中芦丁的分离测定。
3.6　天山雪莲花的检测结果表明:总黄酮和芦丁含量差别
较大 , 证明芦丁仅仅占总黄酮的较少部分(平均为 16.24%),
提示有必要对其它黄酮类物质进行研究 , 以更好的控制产品
质量。
3.7　本实验为制订药材中黄酮类物质定量方法提供参考。
参考文献
〔1〕WS3-B-3334-98 雪莲注射液.
〔2〕郭喜红 , 张丹 , 等.HPLC 法测定雪莲注射液中芦丁含量
〔J〕.中国药房 , 1997 , 8(3):132.
2004 年 8月 2 日收稿
252005 年 5月第 3 期　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志