全 文 ：栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 阅则怎早 砸藻泽藻葬则糟澡 驭 悦造蚤灶蚤糟葬造 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠，圆园14 July，灾燥造援 圆5 晕燥援 4
收稿日期：2014-03-07
作者简介：黄骏，男，硕士研究生，研究方向：中药活性成分研究。Email：hjnature@163.com。通讯作者：苏丹，副教授，研究方向：药物分析
研究。Email：sudan_nj@163.com。
基金项目：国家自然青年科学基金项目（81102787）；江西省青年科学基金计划重点项目（20133ACB21005）；江西中医药大学博士启动基金（Y055），江
西省卫生厅中医药科研计划（2012A026，2012A158）；江西中医药大学科研基金（ZX1001）。
方制剂）第十九册[M]. 北京：人民卫生出版社，1998：82.
[7] 田文艺，兰芳，李淑平，等. 隔山香的初步药理研究[J]. 中国药理
学通报，1989，5（4）：249.
[8] 马允慰，吴皓，胡小鹰，等. 隔山香成分 -异莳萝脑抑制平滑肌作
用的初步实验研究[J]. 中成药研究，1985，9：183.
[9] 张军，李润美，李文周，等. 隔山香药材的薄层色谱鉴别[J]. 中药
材，2009，32（3）：359-360.
[10] 冯枫 . 止咳定喘片的薄层鉴别 [J] . 广西医学，2000，22（5）：
986-987.
[11] 唐超，谢小明. 隔山香药材性状及鉴别检查的研究[J]. 中医药导
报，2008，14（5）：106-107.
[12] 张军，李润美，卫罡，等. 隔山香挥发油化学成分的研究[J]. 中
草药，2009，40（8）：1221-1222.
[13] 张军. 隔山香药效物质基础及其复方大孔吸附树脂精制工艺“谱
效结合”的评价研究[D]. 广州：广州中医药大学，2008.
（编辑：邓响潮）
HPLC法同时测定杏香兔耳风不同制剂中 8种咖啡酰奎宁酸含量
黄 骏 1，冯育林 1，2，李志峰 1，2，宋永贵 1，2，陆兔林 3，毛春芹 3，苏 丹 1，2（1. 江西中医药大学，江西 南昌
330006；2. 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330006；3. 南京中医药大学，江苏 南京
210046）
摘要：目的 建立同时测定杏香兔耳风制剂中 8种咖啡酰奎宁酸有效成分含量测定的方法，并比较不同厂家生
产的杏香兔耳风单方与复方制剂的含量差异。方法 采用 Cosmosil RP-C18色谱柱（250 mm伊4.6 mm，5 滋m）；
流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱；流速：1 mL·min-1；检测波长：328 nm；柱温：35 益；结果 8
种被测咖啡酰奎宁酸成分分离度良好；各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系（r 跃
0.9995）；重复性良好；平均加样回收率在 98.14 %耀101.73 %（RSD为 1.26 %耀2.73 %）（n=9）。所收集的不同厂
家杏香兔耳风制剂中，酚酸含量相差较大；杏香兔耳风胶囊（厂家 1）中咖啡酰奎宁酸的含量相对较高，其他
厂家的杏香兔耳风制剂酚酸含量相近。结论 该方法准确、简单，重复性良好，可用于不同杏香兔耳风制剂中
8种酚酸的含量测定。
关键词：杏香兔耳风制剂；咖啡酰奎宁酸；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2014）04-0476-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2014.04.021
Simultaneous Determination of Eight Caffeoylquinic Acids from Different Ainsliaea frangrant Champ
Preparations by HPLC
HUANG Jun1，FENG Yulin1，2，LI Zhifeng1，2，SONG Yonggui1，2，LU Tulin3，MAO Chunqin3，SU Dan1，2（1 . Jiangxi
University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330006 Jiangxi， China； 2 . National Pharmaceutical
Engineering Center for Solid Preparation of Chinese Herbal Medicine，Nanchang 330006 Jiangxi，China；3. Nanjing
University of Chinese Medicine，Nanjing，210046 Jiangsu，China）
Abstract：Objective To establish a method for the simultaneous determination of eight kinds of caffeoylquinic acids
in different preparations of Ainsliaea frangrant Champ， and to compare the content difference in single herb and
compound preparations of Ainsliaea frangrant Champ from different producers. Methods HPLC was performed on
Cosmosil RP - C18 column（250 mm×4.6 mm，5 滋m） with gradient elution，and acetonitrile-0.1 % formic acid
aqueous solution was used as the mobile phase. Flow rate was 1 mL·min-1 and detection wavelength was set at 328 nm.
The column temperature was 35 ℃ . Results Good separation was shown in eight kinds of caffeoylquinic acids and
476· ·
中药新药与临床药理 圆园14年 7月第 25卷第 4期
杏香兔耳风（Ainsliaea frangrant Champ）为菊科兔
耳风属植物，干燥全草入药，其性寒，味苦，归肺、
肝经。具有凉血止血、利湿解毒等功效，主治虚劳
骨蒸，妇女崩漏，湿热黄疸，瘰疬结核等症[1-2]。咖
啡酰奎宁酸类化合物是一类由奎宁酸和不同数目的
咖啡酸通过酯化反应缩合而成的酚酸类天然化合物，
主要有单咖啡酰奎宁酸（caffeoylquinic acid，CQA），
二咖啡酰奎宁酸（dicaffeoylquinic acid，DCQA），三咖
啡酰奎宁酸及相应的衍生物 [3-5]。其中， CQA 和
DCQA是杏香兔耳风的主要酚酸成分。这类化合物具
有显著的抗炎活性[1]，是杏香兔耳风单方或复方制剂
作为妇科炎症常用药的物质基础。目前生产杏香兔
耳风制剂的厂家约 25个，临床常见制剂主要包括杏
香兔耳风颗粒、杏香兔耳风片、杏香兔耳风胶囊、
复方杏香兔耳风胶囊等。
关于杏香兔耳风相关制剂的质量标准收载于卫
生部颁标准《中药成方制剂》第十四册[6]，未见含量
测定项。针对抗炎活性成分咖啡酰奎宁酸，本研究
首次建立隐绿原酸（4-CQA）、绿原酸（3-CQA）、新
绿原酸（5-CQA）、1，3-二咖啡酰奎宁酸（1，3-DCQA）、
1，5-二咖啡酰奎宁酸（1，5-DCQA）、3，4-二咖啡酰
奎宁酸 （3，4-DCQA）、 3，5- 二咖啡酰奎宁酸
（3，5-DCQA）、4，5-二咖啡酰奎宁酸（4，5-DCQA）[5-7]
8种成分的同时含量测定方法，并采用此法对市售 5
个厂家生产的杏香兔耳风单方或复方制剂进行含量
测定，以期能够较准确全面评价和监控不同厂家的
产品质量，为进一步提高其质量标准提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪（SPD-M10A 二极管
阵列检测器，LC-10AT系列配件，SIL-10AD vp自动
进样器），日本岛津公司；Class-VP 色谱工作站、
万分之一分析天平（sartorius BS 124S）、超声清洗
器（KQ-250型），昆山市超声仪器有限公司；纯水
仪（Milli-Q），美国Millipore公司。
1.2 试药 杏香兔耳风胶囊（厂家 1，批号：130506）、
复方杏香兔耳风颗粒（厂家 2，批号：1209019）、复
方杏香兔耳风胶囊（厂家 3，批号：1310011）、杏香
兔耳风胶囊（厂家 4，批号：20130301）、复方杏香兔
耳风片（厂家 5，批号：130501），购于南昌各零售药
店。乙腈，色谱纯，山东禹王集团；甲酸，色谱级，
美国 Sigma 公司；3-CQA（批号：120926）、4-CQA
（批号：130502）、5-CQA（批号：130502）、1，3-DCQA
（批号： 130502）、 1， 5-DCQA（批号： 120926）、
3，4-DCQA（批号：130502）、3，5-DCQA（批号：
120622）、4，5-DCQA（批号：120926），均购于成都普
菲德生物技术有限公司（纯度均大于 99 %）。
2 方法与结果
2.1 溶液制备及色谱条件
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取 5-CQA、3-CQA、
4-CQA、 1，3-DCQA、 3，4-DCQA、 1，5-DCQA、
3，5-DCQA、4，5-DCQA 各 6.75，10.5，8.75，2.5，
3.75，3.75，3.75，3.75 mg，置 25.0 mL 量瓶中，甲
醇定容，避光保存备用，作为对照品贮备液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取片剂 20片，颗粒剂 10 g
或 10粒胶囊剂内容物分别于碾钵中碾碎，各取 0.8 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 8.0 mL，称
定质量，超声处理 45 min，放冷，再称定质量，加
入甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 滋m微孔滤膜过
滤，取续滤液，即得。
2.1.3 阴性对照品溶液的制备 杏香兔耳风复方制剂
由白术和杏香兔耳风两味药材制得[6]，按处方比例除
去杏香兔耳风的白术药材适量，依照复方制剂的制
备工艺和供试品溶液的制备方法制得不含杏香兔耳
风的阴性样品溶液。
2.1.4 色谱条件 色谱柱：Cosmosil RP-C18（250 mm
× 4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-0.1 %甲酸水
good linear relationship was presented between concentration and peak area（r > 0.9995）. The average recovery was
from 98.14 %～101.73 %，and RSD was 1.26 %～2.73 %（n=9）. Great difference of the content of caffeoylquinic
acids was shown in Ainsliaea frangrant Champ preparations： the capsule from producer 1 had higher contents of
caffeoylquinic acids， but the contents of caffeoylquinic acids from the others were similar. Conclusion The
established method is accurate， simple， and with good repeatability， which can be used for the simultaneous
determination of 8 kinds of caffeoylquinic acids in different Ainsliaea frangrant Champ preparations.
Keywords：Ainsliaea frangrant Champ preparations；Caffeoylquinic acids；Content determination；HPLC
477· ·
栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 阅则怎早 砸藻泽藻葬则糟澡 驭 悦造蚤灶蚤糟葬造 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠，圆园14 July，灾燥造援 圆5 晕燥援 4
B
1
2
3
4 5 6 7
8
0 5 10 15 20 25 30 35
溶液（B），流速：1 mL·min-1，检测波长：328 nm，柱
温：35 ℃。梯度洗脱条件：0.01～2.5 min，85 %～
80 % B相；2.5～27 min，80 %～79 % B相；27～30
min，79 %～78 % B相；30～36 min，78 %～85 % B
相，在上述色谱条件下，得到对照品及样品色谱图，
见图 1。
A. 对照品；B. 样品（杏香兔耳风胶囊，厂家 1）；C. 阴性对照品
1. 5-CQA；2 .3-CQA；3. 4-CQA； 4. 1，3-DCQA； 5. 3，4-DCQA
6. 1，5-DCQA；7. 3，5-DCQA；8. 4，5-DCQA
图 1 杏香兔耳风胶囊 HPLC色谱图
Figure 1 Thechromatogramofreferencesubstance
2.2 方法学考察
2.2.1 线性关系 见表 1。分别精密吸取混合对照品
贮备液 0.1，0.4，0.6，0.8，1.0，2.0，4.0 mL 于 10
mL 量瓶中，用甲醇定容至刻度。精密吸取各质量浓
度混合对照品溶液 10 滋L 注入高效液相色谱仪，测
定。以峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归，得到 8
种酚酸成分的含量范围。
2.2.2 精密度试验 取混合对照品溶液，在 2.1.4 项
色谱条件下，重复进样 6次，测定峰面积。5-CQA、
3-CQA、 4-CQA、 1，3-DCQA、 3，4-DCQA、 1，5-
DCQA、3，5-DCQA、4，5-DCQA 的峰面积 RSD 分别
为 2.3 %、2.1 %、1.8 %、1.7 %、2.6 %、1.9 %、1.8 %、
2.1 %。
2.2.3 供试品溶液稳定性试验 取供试品溶液，室温
下放置，分别于 0， 2， 4， 6， 8， 10 h 测定，
5-CQA、3-CQA、4-CQA、1，3-DCQA、3，4- DCQA、
1，5-DCQA、3，5-DCQA、4，5-DCQA峰面积 RSD分别
为 1.7 %、1.9 %、2.1 %、2.3 %、1.8 %、2.1 %、1.9 %、
2.7 %。
2.2.4 重复性试验 称取杏香兔耳风胶囊（厂家 1，批
号：130506）内容物 6 份，按 2.1.2 项下方法操作，
在上述色谱条件下进行测定，计算 5-CQA、3-CQA、
4-CQA、 1，3-DCQA、 3，4-DCQA、 1，5- DCQA、
3，5-DCQA、4，5-DCQA 含量的 RSD 分别为 1.7 %、
1.3 %、1.8 %、1.7 %、2.1 %、1.7 %、2.1 %、2.6 %。
2.2.5 加样回收率试验 见表 2。取含量已知的杏香
兔耳风胶囊（厂家 1，批号：130506）共 9份，每份取
约 0.4 g，精密称质量，3 份为 1 组，每 3 组按低、
中、高浓度分别精密加入相当于药材含量 50 %，
100 %，150 %的对照品溶液，依 2.1.2 项下方法操
作，测定，计算加样回收率和 RSD 值，结果均符
合要求。
2.3 样品含量测定 见表 3。取不同厂家不同类型制
剂粉末按 2.1.2 项下方法制备供试品溶液，依照
2.1.4项下色谱条件进样测定，用外标法计算含量。
3 讨论
本实验曾分别采用了甲醇 - 水、乙腈 - 水、甲
醇 -0.1% 磷酸水溶液、甲醇 -0.1% 甲酸水溶液、乙
腈 -0.1% 甲酸水溶液等流动相体系。结果显示，相
比于甲醇，使用乙腈所得到色谱峰的峰形更加尖锐，
理论塔板数更高。由于咖啡酰奎宁酸含有酚羟基，
具有酸性，采用了反相离子抑制色谱，在流动相中
添加少甲酸，抑制其解离，解决了其色谱峰拖尾和
展宽的问题。最终确定乙腈 - 0.1 % 甲酸水系统为流
动相。
为了使所检测的色谱峰分离度好，出峰时间合
150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30 35
1
2
3
4 5
6
7
8
A
C
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30 35
t /min
表 1 杏香兔耳风制剂中 8种酚酸成分的标准曲线
Table 1 The standard curves of eight kinds of caffeoylquinic acids
from different Ainsliaea frangrant Champ preparations
成分
5-CQA
3-CQA
4-CQA
1，3-DCQA
3，4-DCQA
1，5-DCQA
3，5-DCQA
4，5-DCQA
回归方程
Y=3.64×104x-4.40×103
Y =2.84×104x-5.91×103
Y =2.76×104x+8.46×103
Y =9.96×104x-2.59×103
Y =3.91×104x+7.60×103
Y =4.23×104x-1.69×103
Y =4.80×104x-1.22×103
Y =6.60×104x-1.97×103
线性范围 /滋g·mL-1
2.7～108.0
4.2～168.0
3.5～140.0
1.0～40.0
1.5～60.0
1.5～60.0
1.5～60.0
1.5～60.0
r
0.9992
0.9995
0.9996
0.9998
0.9994
0.9991
0.9992
0.9993
厂家 5
厂家 4
厂家 3
厂家 2
厂家 1
478· ·
中药新药与临床药理 圆园14年 7月第 25卷第 4期
理，采用梯度洗脱方法。单咖啡酰奎宁酸极性较大，
适合在水比例较大的系统中分离，而二咖啡酰奎宁酸
相对较小，适宜在乙腈比例较大的系统中分离，8种
成分同步检测时，调节梯度比例，由水相向有机相增
大。在此调整过程中，曾尝试将乙腈比例增大，二咖
啡酰奎宁酸出峰时间提前，但分离度明显降低，故最
终确定 5 min 到 32 min 范围内，水相比例由 85% 到
78 % 。本梯度条件，基线平稳，既保证了 8 种成分
同时测定，又缩短了分析时间。
本实验采用超声提取法并考察了溶媒（纯水、
50 %甲醇、甲醇）和超声时间（15，30，45，60，
90 min）对提取效率的影响。结果显示，选择甲醇超
声提取 45 min，提取效率最佳，且杂质干扰相对较少。
共收集到本地药房当前所售的 5个不同厂家的杏
香兔耳风制剂。含量测定结果表明，不同厂家不同制
剂间 8种指标成分的含量存在差异，其中二咖啡酰奎
宁酸的含量均较低，差异较小，且 1，5-二咖啡酰奎
宁酸几乎检测不到；单咖啡酰奎宁酸的含量差异显
著，最大值可达最小值的 6.5～87倍，其中 5-咖啡
奎宁酸、4-咖啡奎宁酸含量相对较高，可作为除绿
原酸外的另一个质量控制指标。药材中二咖啡酰奎宁
酸含量较高，而加工成杏香兔耳风制剂后主要为单
咖啡酰奎宁酸，这可能是由于二咖啡酰奎宁酸不稳
定，在工艺过程中易转化成单咖啡酰奎宁酸所致。
有研究[8]表明，二咖啡酰奎宁酸在治疗乙肝及艾滋病
上有显著疗效，相关产家应将其作为有效成分进行
质量控制。
参考文献：
[1] 徐希科，柳润辉，李慧梁，等. 兔耳风属植物的化学和药理研究进
展[J]. 药学实践杂志，2009，27（4）：245-247.
[2] 王惠云，张治芬，陈建萍. 促进宫颈粘膜修复 -杏香兔儿风片已被
证实的治疗功效[J]. 中国处方药，2009，3（4）：86.
[3] 陈明华，冯锋，柳文媛，等. 杏香兔耳风化学成分的分离与鉴定[J].
沈阳药科大学学报，2009，26（10）：803-806.
[4] 刘波，谢亮亮，王英锋. 杏香兔耳风化学成分研究[J]. 首都师范大
学学报（自然科学版），2007，28（6）：36-37.
[5] 张锐，曾宪仪，张正行. 杏香兔耳风的化学成分研究（Ⅱ）[J]. 中草
药，2006，37（3）：347-348.
[6] 中华人民共和国卫生部药典委员会，中华人民共和国卫生部药品
标准（中药成方制剂）第 14册[M]. 北京：1994：118.
[7] 邢春秀，谢宁，杨念云，等. 杏香兔耳风的化学成分[J]. 江苏药学
与临床研究，2006，14（2）：39-41.
[8] 董俊兴. 抗乙肝和艾滋病新药二咖啡酰奎尼酸进入临床[J]. 中国科
技，2006，12（4）：63-63.
（编辑：邓响潮）
5-CQA
3-CQA
4-CQA
1，3-DCQA
3，4-DCQA
3，5-DCQA
4，5-DCQA
样品量
/mg
417.784
418.232
418.818
659.251
659.251
662.509
537.130
534.927
530.080
59.087
59.087
59.379
200.162
200.095
202.289
115.786
115.863
115.403
120.974
120.774
120.474
加入量
/mg
209.116
418.232
627.348
329.625
659.251
988.876
267.463
534.927
802.390
29.544
59.087
88.631
100.048
200.095
300.143
57.931
115.863
173.794
60.387
120.774
181.161
测得量
/mg
629.367
839.000
1041.333
992.667
1315.000
1635.000
803.000
1075.000
1323.667
89.400
118.733
149.933
300.300
400.733
499.933
173.800
231.500
289.833
180.600
240.967
301.100
回收率
/%
100.66
98.64
99.76
103.48
99.57
96.29
98.47
100.30
96.55
100.75
102.42
102.03
98.00
101.69
99.13
102.64
98.45
101.54
97.82
98.30
98.29
平均回
收率 /%
99.69
99.78
98.44
101.73
99.61
100.88
98.14
RSD
/%
1.75
2.73
1.73
2.17
1.26
2.16
2.68
表 2 8种咖啡酰奎宁酸加样回收率实验结果（n=9）
Table 2 The result of recovery test of eight caffeoylqunic acids
成分
厂家
1
2
3
4
5
5-CQA
0.414
3.272
0.003
0.066
0.183
RSD/%
1.27
0.92
1.35
2.1
0.89
3-CQA
0.652
4.461
0.018
0.193
0.682
RSD/%
1.23
1.67
1.36
1.57
2.23
4-CQA
0.529
3.974
0.007
0.079
0.271
RSD/%
0.87
0.95
1.26
2.1
2.3
1，3-DCQA
0.058
0.786
0.005
0.017
-
RSD/%
1.6
1.7
2.6
0.78
-
3，4-DCQA
0.199
3.289
-
0.097
0.116
RSD/%
2.5
1.8
-
0.78
1.23
1，5-DCQA
-
0.273
-
0.037
-
RSD/%
-
1.3
-
2.3
-
3，5-DCQA
0.115
1.621
-
0.246
0.115
RSD/%
1.36
2.15
-
2.87
0.98
4，5-DCQA
0.12
1.946
-
0.121
0.19
RSD/%
0.62
1.29
-
1.38
0.63
表 3 杏香兔耳风制剂中 8种咖啡酰奎宁酸的含量（n=6）
Table 3 The content of eight caffeoylqunic acids in different preparations
注：（1）厂家 1，4为杏香兔耳风单方制剂，厂家 2，3为杏香兔耳风复方制剂；（2）规格：厂家 1（0.4 g/粒），厂家 2（18 g/袋），厂家 3（0.47 g/粒），
厂家 4（0.42 g/粒），厂家 5（0.5 g/片）。
479· ·