全 文 ：6种忍冬叶中绿原酸及总咖啡酰奎宁酸含量测定
苟占平 1, 2 ,万德光 3
(1.广东医学院药学院 ,广东东莞 523808;2.广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室 ,广东湛江
524023;3.成都中医药大学药学院 ,四川成都 610075)
　　摘要　目的:以绿原酸和总咖啡酰奎宁酸的含量为指标 , 测定评价川渝忍冬叶的质量。方法:高效液相色谱法
和分光光度法。结果:测定了川渝 6种忍冬叶中绿原酸和总咖啡酰奎宁酸的含量。 结论:该方法简便 、准确 、重现
性好。其结果可对川渝产忍冬叶的合理用药 、质量控制及进一步开发提供参考。
关键词　忍冬叶;绿原酸;总咖啡酰奎宁酸;高效液相色谱法;分光光度法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)03-0388-03
DeterminationofChlorogenicAcidandTotalCafeoylquinicAcidin6FoliumLonicerae
GOUZhan-ping1 , 2 , WANDe-guang3
(1.ColegeofPharmacology, GuangdongMedicalCollege, Dongguan523808, China;2.GuangdongKeyLaboratoryofResearchand
DevelopmentofNaturalDrugs, GuangdongMedicalColege, Zhanjiang524023, China;3.PharmaceuticalCollege, ChengduUniver-
sityofTCM, Chengdu610075, China)
Abstract　Objective:Todeterminethecontentsofchlorogenicacidandtotalcaffeoylquinicacidin6FoliumLoniceraeinSichuan
provinceandChongqingcityforevaluatingthequalityofthem.Methods:TheHPLCanalysisandspectrophotometryanalysiswere
used.Results:Thecontentsofchlorogenicacidandtotalcaffeoylquinicacidin6FoliumLoniceraehadbeendetermined.Conclusion:
Themethodisaccurate, simpleandhasagoodreproducibility.Theresultscanbeusedasareferenceforthereasonablemedication,
qualitycontrolandfurtherstudyofFoliumLonicerae.
Keywords　FoliumLonicerae;Chlorogenicacid;Totalcafeoylquinicacid;HPLC;Spectrophotometry
基金项目:成都中医药大学科研重点资助项目(300-719)作者简介:苟占平(1970-),男,副教授 ,博士 ,主要从事中药的品种品质研究;Tel:0769-23953028, E-mail:zpgou@vip.sina.com。
　　忍冬叶 FoliumLonicerae为忍冬 Lonicerajaponi-
caThunb.及其近缘植物的叶 。其使用历史悠久 。
明 · 《本草乘雅半偈 》云:“夏采花 (金银花 , 作者
注),秋采叶(忍冬叶 ,作者注),冬采藤〔1〕 ”。明 ·
《本草纲目》云:“茎 、叶及花 ,功用皆同 〔2〕 ”。金银花
中的有效成分主要是咖啡酰奎宁酸类 ,包括绿原酸 、
异绿原酸 、新绿原酸等 , 其它成分相对含量很
低 〔3 ～ 6〕。咖啡酰奎宁酸类成分中紫外光谱基本是由
其结构中共有的咖啡酰基产生的 ,故其紫外光谱特
征几乎一致 〔7〕。川渝忍冬叶资源十分丰富 ,作者预
实验发现其与金银花的甲醇提取液和对照品绿原酸
溶液的紫外扫描图谱在 250 ～ 400 nm范围内一致 。
为了客观评价其内在质量 ,为其开发利用提供参考 ,
本文以绿原酸做对照 ,用 HPLC法测定了绿原酸的
含量 ,用分光光度法测定了总咖啡酰奎宁酸类的含
量 。
1 　仪器与材料
Agilent1100LC型高效液相色谱仪 (美国 Agi-
lent公司 ,包括 1100四元泵 ,自动进样器 、柱温箱 、
二级管阵列检测器 、Agilent化学工作站);Lambda35
分光光度计(PerkinElmer);TCQ-250超声波清洗器
(北京医疗设备二厂), SartroriusBP211D1 /10万电
子分析天平 , ZK-82BXX型电热真空干燥箱 。绿原
酸对照品(中国药品生物制品检定所提供 , 80℃减
压干燥至恒重),重蒸水 ,乙腈 、甲醇为色谱纯 ,磷酸
为分析纯 。
实验材料为成都中医药大学药学院万德光教授
通过原植物分类学鉴定的 6种干燥忍冬叶。
2　方法与结果
2.1　HPLC法测定绿原酸的含量
2.1.1 　色谱条件:色谱柱:HypersilODS2(4.6 mm
×150 mm, 5 μm);预柱:Waters-C18 (4.6 mm×10
mm, 5 μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87),
临用前以 0.45 μm微孔滤膜过滤并经超声脱气处
理;流速 1 ml/min;柱温 30℃;检测波长 327 nm;定
量方法:外标法峰面积定量。
2.1.2 　测定波长的选择:将绿原酸对照品和供试
品溶液在 200 ～ 400nm扫描 ,其均在 327 nm波长处
有最大吸收 ,所以检测波长选择为 327nm。
2.1.3 　标准曲线的制备:精密称取绿原酸对照品
·388· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.03.030
适量 , 分别用甲醇配置成 12.06, 24.12, 48.24,
96.48, 192.96 μg/ml的对照品系列标准溶液。分
别进样 10μl,按含量测定方法测定峰面积 ,以峰面
积为纵坐标 ,绿原酸浓度为横坐标绘制标准曲线 ,计
算线性回归方程为 A=31507.9B+52.7, r=
0.9996。表明绿原酸在 12.06 ～ 192.96 μg/ml范围
线性关系良好。
2.1.4　供试品溶液的制备:精密称取样品粉末约
0.5g,置入 25 ml容量瓶中 ,加 25 ml甲醇超声 30
min,取出 ,放冷 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤液
用 0.45μm微孔滤膜过滤 ,作为药材供试品溶液。
2.1.5　精密度试验:将 1号样品制成的供试品溶
液按 2.1.1项下色谱条件进行 HPLC分析 ,连续进
样 6次 ,进样体积 10 μl,绿原酸峰面积的 RSD为
0.83%。
2.1.6　稳定性试验:取 1号供试品溶液在 0、1、2、
4、8、12 h各进样 1次 ,进样体积 10 μl,结果样品溶
液在 12 h内基本稳定 , RSD=1.03%。
2.1.7　重现性试验:精密称取 6份同一样品 (1
号),各约 0.5 g,按 2.1.4项下进行制备 ,按 2.1.1
项下色谱条件进行 HPLC分析 ,进样体积 10 μl,结
果样品中绿原酸含量的 RSD=1.74%,表明其重现
性好。
2.1.8　加样回收率试验:精密称定 6份 1号样品
各约 0.25 g,分别加入一定量的绿原酸对照品 ,按
2.1.4项下进行制备 ,按 2.1.1项下色谱条件进行
HPLC分析 , 进样体积 10 μl,结果平均回收率为
98.50%, RSD=1.28%。
2.1.9　样品的测定:按 2.1.1项下色谱条件进行
HPLC分析 ,进样体积 10 μl,以峰面积值从回归方
程求得绿原酸的质量 ,并计算出忍冬类叶中绿原酸
的含量 ,结果见表 1。
2.2 　分光光度法测定咖啡酰奎宁酸总含量
2.2.1　对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照
品 6.03mg,置于 100ml容量瓶中 ,甲醇定容 ,摇匀 ,
配制成 60.30 μg/ml的绿原酸溶液。
2.2.2　测定波长的选择:将绿原酸对照品和供试
品溶液在 200 ～ 400 nm扫描 ,结果表明 ,供试品紫外
吸收曲线及最大吸收波长 327 nm与绿原酸标准品
一致 ,所以可以直接采用紫外分光光度法测定供试
品中总绿原酸的含量 。
2.2.3　标准曲线的绘制及线性范围:精密吸取绿
原酸对照品 1、3、6、10、15、20 ml分别置于 50 ml容
量瓶中 , 甲醇定容 , 摇匀 , 配制成 1.206、 3.618、
7.236、12.060、 18.090、 24.120 μg/ml的绿原酸溶
液 ,以甲醇作空白对照 ,在 327nm处测吸收度 。以
吸收度(A)对进样浓度(M)进行回归 ,得绿原酸线
性回归方程为 A=0.0458M-0.0103, r=0.9999,线
性范围为 1.206 ～ 24.120 μg/ml。
2.2.4 　供试品溶液的制备:精密称取样品粉末约
0.5 g,置入 25 ml容量瓶中 ,加 25 ml甲醇超声 30
min,取出 ,放冷 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,精密
吸取 1 ml,甲醇定容于 10 ml容量瓶中 ,再精密吸取
1ml甲醇定容于 10 ml容量瓶中 ,稀释倍数为 5000,
作为药材供试品溶液。
2.2.5 　精密度试验:将 1号样品制成的供试品溶
液 ,按标准曲线项下操作重复测定 6次 , RSD为
0.11%,说明精密度良好。
2.2.6 　重现性试验:精密称取 6份同一样品(1
号),各约 0.5g,按供试品溶液制备项下进行制备 ,
按标准曲线项下操作测定 , RSD为 0.91%,说明重
现性好。
2.2.7 　稳定性试验:取 1号供试品溶液在 0、1、2、
3、4、5 h按标准曲线项下操作各测定 1次 , RSD=
0.74%,说明样品溶液在 5 h内稳定。
2.2.8 　加样回收率试验:精密称定 6份 1号样品
各约 0.25g,分别加入一定量的绿原酸对照品 ,按供
试品溶液制备项下进行制备 ,按标准曲线项下操作 ,
结果平均回收率为 101.27%, RSD=1.68%。
2.2.9 　样品测定:按供试品溶液制备项下进行制
备 ,按标准曲线项下操作测定 ,从回归方程求得绿原
酸的质量 ,再计算出忍冬叶中总绿原酸的含量 ,结果
见表 1。
　表 1 　绿原酸的含量(n=4)
序号 植物学名 产地 含量Ⅰ% RSD% 含量Ⅱ% RSD%
1
细毡毛忍冬L.similis 四川南江 0.312 0.87 1.83 1.03
2
细毡毛忍冬L.similis 重庆南川 0.196 1.63 1.10 0.84
3 峨眉忍冬L.similisvar.omeiensis 四川旺苍 0.701 0.54 5.59 0.57
4 峨眉忍冬L.similisvar.omeiensis 重庆南川 0.837 0.72 6.69 0.59
5 灰毡毛忍冬L.macranthoides 重庆南川 0.288 0.69 2.58 1.35
6 淡红忍冬L.acuminata 四川峨眉山 0.193 1.14 1.45 0.97
7 淡红忍冬L.acuminata 四川康定 0.235 1.36 1.84 0.81
8 忍冬 L.japonica 四川峨眉山 0.597 0.83 5.11 0.62
9 忍冬 L.japonica 四川成都 0.751 1.31 4.20 0.79
10 红腺忍冬L.hypoglanca 重庆南川 0.628 0.94 4.59 0.86
　　注:含量Ⅰ为HPLC法测得结果 ,含量Ⅱ为用分光光度法测得结
果
·389·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月
3 　小结与讨论
3.1 　供试品溶液和对照品绿原酸溶液的紫外扫描
图谱在 250 ～ 400nm范围内一致 ,而绿原酸 、异绿原
酸 、新绿原酸等咖啡酰奎宁酸类成分中紫外光谱基
本是由其结构中共有的咖啡酰基产生的 ,紫外光谱
特征几乎一致 〔7〕 ,所以可以绿原酸做对照 ,用分光
光度法测定忍冬叶中咖啡酰奎宁酸类的总含量 。
3.2 　本文用高效液相色谱法和分光光度法分别测
定了 5种 1变种共 10个忍冬叶样品中绿原酸和咖
啡酰奎宁酸类的总含量 ,结果绿原酸在 0.193% ～
0.837%之间 , 其中峨眉忍冬叶中含量最高 , 为
0.701% ～ 0.837%, 其次是忍冬叶 (0.597% ～
0.751%)和红腺忍冬叶(0.628%),细毡毛忍冬 、灰
毡毛忍冬和淡红忍冬叶片中含量较低 ,为 0.193%
～ 0.312%;咖啡酰奎宁酸类的总含量在 1.1% ～
6.7%,其中峨眉忍冬叶中含量最高 , 为 5.99% ～
6.69%,其次是忍冬叶(4.20% ～ 5.11%)和红腺忍
冬叶(4.59%),灰毡毛忍冬叶 2.58%,细毡毛忍冬
叶和淡红忍冬叶中含量最低 ,不到 2%。总的来说
咖啡酰奎宁酸类总含量远比绿原酸的含量高 ,前者
大约是后者的 5 ～ 8倍 。
参 考 文 献
[ 1] 明·卢之颐 .本草乘雅半偈 .校点本 .北京:人民卫生
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生出版社 , 2006:411.
(2007-09-18收稿)
板蓝根 、南板蓝根及大青叶中蛋白质组分分析
项雷文 1, 2 ,高观祯1 ,汪惠勤 1 ,陆华珍 1 ,饶平凡 1 ,周建武 1
(1.福州大学生物工程研究所 ,福建福州 350002;2.福建师范大学福清分校 ,福建福清 350300)
　　摘要　目的:对抗病毒中药板蓝根 、南板蓝根及大青叶的蛋白质成分进行分析;方法:利用凯氏定氮法对板蓝
根 、南板蓝根和大青叶的生药和相应的新鲜植物组织中的总蛋白含量进行测定 , 利用 Lowry法 , Bradford法对提取
液进行蛋白质含量测定 ,提取液中的蛋白质组分应用 SDS-PAGE电泳进行分析。结果:三种药材的蛋白质种类和
含量有一定差别 , 且同种药材的新鲜植物组织和生药蛋白质组分在含量和种类上有明显差别。结论:板蓝根 、南板
蓝根及大青叶的蛋白质组分差别明显。这三种中药的新鲜植物组织和生药蛋白质组分上的差异可能是由美拉德
反应造成的。
关键词　板蓝根;南板蓝根;大青叶;蛋白质;美拉德反应
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)03-0390-03
作者简介:项雷文(1975-),男,浙江淳安人 ,讲师 ,硕士;Tel:13960738979, E-mail:xiangleiwen@163.com。
　　板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatisindigotioca
Fort.)的干燥根 ,味苦 ,性寒 ,有清热解毒 、凉血利咽
功效。南板蓝根为爵床科植物马蓝(Baphicacanthus
cusia(Nees)Bremek)的干燥根茎及根 ,味苦 ,性寒 ,
有清热解毒 、凉血功效 。大青叶为十字花科植物菘
蓝的干燥叶 ,味苦 ,性寒 ,具有清热解毒 、凉血消斑功
效[ 1] 。这三种药材在中医临床上常用于治疗病毒
性疾病 ,尤其在抗流感病毒方面疗效确切。本文通
过凯氏定氮法 , Folin-酚试剂(Lowry)法 ,考马斯亮蓝
(Bradford)法测定板蓝根 、南板蓝根及大青叶中的
·390· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月