全 文 ：杏香兔耳风总黄酮含量的测定①
伍晓春1 , 周　蓉1 , 严朝方方土 , 田　玲2
(1.宜春学院生物工程研究所 , 江西　宜春　336000;2.江西海尔思药业有限公司 , 江西　宜春　336000)
[ 摘　要] 目的:研究杏香兔耳风中总黄酮含量的测定方法;方法:采用紫外分光光度法 , 于 510nm 处测定;结
果:线性范围为 10.56 ～ 63.36? g/ ml , r=0.9991 , 平均加样回收率为 96.42%, RSD 为 1.41%;结论:该方法
准确可靠 , 可用于杏香兔耳风药材的质量控制。
[ 关键词] 杏香兔耳风;总黄酮;紫外分光光度法
[ 中图分类号] R284.2　 [ 文献标识码] A　 [文章编号] 1671-380X (2005)06-0072-02
Determination of the Total flavonoids in Ainsliaea fragrans Champ
WU Xiao-chun1 , ZHOU Rong1 , YANG Zhao-kun2 et al
(1.Bio-engineering Institute of Y ichun university Y ichun , 336000 China;
2.Jiangxing Haiersi Pharmaceutical Co., LTD , Y ichun , 336000 China)
Abstract:Objective:To establish a method for the determination of the to tal flavonoids in Ainsliaea fragrans Champ.Methods:the
to tal flavonoids in Ainsliaea frag rans Champ w as determined by spectrophotometric method at 510nm.Results:A good linearity can
be obtained in the range of 10.56 ～ 63.36g (r=0.9991), the average recovery was 96.42% and RSD was 1.41%.Conclusion:
this method is accurate and reliable and can be used for quality contro l of A insliaea frag rans Champ.
Keywords:Ainsliaea frag rans , Champ Total flavonoids , spectrophotometry
　　杏香兔耳风又名白走马胎 、 金边兔耳草 , 为菊科植物
铁灯兔耳风 (Ainsliaea macroclinidioides Hay.)或杏香兔耳
风 (Ainsliaea frag rans Champ.)的干燥全草[ 1] 。主要分布于
长江流域一带及西南各省。其功能清热补虚 , 凉血止血 、
利湿解毒 , 广泛用治疗感冒咳嗽 、 咽喉疼痛 、 肠炎痢疾 、
泌尿疾病 、 风湿痹痛 、 跌打损伤 、 活血止痛等。杏香兔耳
风全草主要含黄酮类 、 无羁萜酮 (friedelin)、 表无羁萜醇
(epifriedelinol)、 β -谷甾醇 (β -sitosterol)、 倍半萜内酯 、
丁香烯和豆甾醇等成分[ 2] 。我们用紫外分光光度法测定了
杏香兔耳风药材中总黄酮的含量 , 为控制药材质量提供依
据。
1　材料与仪器
1.1　材料
　　杏香兔耳风购于江西省宜春市药材市场 , 经鉴定为菊
科植物杏香兔耳风 (Ainsliaea frag rans Champ.)的全草。
1.2　试剂　甲醇 , 硝酸铝 , 氢氧化钠 , 亚硝酸钠 , 石油
醚均为分析纯 , 芦丁对照品 (批号 100080-200306), 购自
中国药品生物制品检定所。
1.3　仪器设备 　BP-II-5 分析天平 (上海医用激光仪器
厂), HHW-600 恒温水浴箱 (天津泰斯特), TU -1901
双光束紫外分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公
司), 202A-2 电热干燥箱 (上海阳光实验仪器有限公司)。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备精密称取在 105℃干燥至恒重的芦
丁对照品 13.2mg , 用甲醇溶解 , 定容至 25ml 容量瓶中 ,
摇匀 , 配成浓度为 0.528mg/ ml的芦丁标准品溶液 , 作为储
备液备用。
2.2　对照品测定波长的选择
　　精密吸取对照品溶液 5.0ml , 置 25ml容量瓶中 , 加水
至 6ml , 精密加入 5%亚硝酸钠溶液 1ml , 混匀 , 静置
6min , 精密加入 10%硝酸铝溶液 1ml , 摇匀后静置 6min ,
精密加入 4%氢氧化钠溶液 10ml , 再加水至刻度 , 摇匀 ,
放置 15min。以相应试剂作空白[ 3] , 于 TU-1901 紫外-可
见分光光度计上进行全波长扫描 , 体系最大吸收波长
510nm , 见图 1。
图 1　芦丁-NaNO2-Al (NO3)2-NaOH 体系紫外吸收光谱
2.3　线性关系考察　精密吸取对照品溶液 0.0 , 0.5 , 1.0 ,
1.5 , 2.0 , 2.5 , 3.0ml , 分别置于 25ml容量瓶中 , 分别加
水至 6ml , 按 2.2 项下操作加入各显色试剂 , 放置 15 ～
20min , 以第一管做空白 , 在波长 510nm 处用紫外-可见分
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① 收稿日期:2005-09-08
作者简介:伍晓春 (1973-), 男 , 江西高安人 , 讲师 , 硕士 , 研究方向:天然药物化学。
第 27 卷　第 6 期
2005 年 12 月 　　　　　　　　
宣春学院学报
Journal of Yichun University (natural science)　　　　　　　　
Vol.27 , No.6
Dec.2005
光光度计测定吸光度 , 以对照品浓度为横坐标 , 吸光度为
纵坐标绘制标准曲线 , 线性范围为 10.56 ～ 63.36ug/ ml , A
=11.01C-0.00455 , r=0.9991。
2.4　样品溶液的制备
　　取杏香兔耳风药材 80℃干燥 5h , 粉碎 , 过 80 目筛 ,
精密称取 5.000g , 置于 150ml三角瓶中 , 加入 50ml石油醚
(馏程 60-90℃), 于 70℃下水浴回流 10 小时 , 除去样品
中的脂肪 , 抽滤后挥干石油醚。滤渣置于 150ml三角瓶中 ,
加入蒸馏水 50ml , 水浴回流提取两次 , 每次 2h , 取出 , 静
置 , 滤过 , 用蒸馏水冲洗 , 滤液定容到 100ml容量瓶中备
用。
2.5　仪器精密度实验　精密称取杏香兔耳风样品 3.000g ,
按 2.4方法提取 , 显色 , 在 510nm 处测定其吸光度 , 连续
测定 5 次。样品峰面积积分值的 RSD 为 0.049%, 可见仪
器精密度良好。
2.6　重复性实验　取杏香兔耳风样品 5 份 , 每份 3.000
克 , 精密称定 , 按 2.4 方法提取 , 显色 , 在 510nm 处测定
其吸光度。样品峰面积积分值的 RSD为 0.84%, 可见本方
法重现性良好。
2.7　稳定性实验　精密称取杏香兔耳风样品 3.000 克 , 按
2.4 方法提取 , 显色 , 分别于 0 , 15 , 30 , 45 , 60min 测定
其吸光度。样品峰面积积分值的 RSD为 3.24%, 可见样品
在 60min 显色基本稳定。
2.8　加样回收率实验　取杏香兔耳风样品 6 份 , 每份
1.500 克 , 精密称重 , 一份测定含量 , 其余 5 份分别加入芦
丁对照品适量 , 按 2.4 方法提取 , 显色 , 在 510nm 处测定
其吸光度。测得杏香兔耳风样品平均回收率 96.42%, RSD
为 1.41%, 可见本方法具有良好的加样回收率。
2.9　样品总黄酮含量测定
　　精密称取杏香兔耳风样品 4 份 , 按 2.4 方法提取 , 定
容 , 再吸取样品液 5ml置于 25ml容量瓶中 , 分别加水至
6ml , 按 2.2 项下操作加入各显色试剂 , 放置 15 ～ 20min ,
于 510nm 处测定吸光度。结果见表 1。
表 1　总黄酮含量测定结果
次数 称样量 吸光度 样品含量(mg/ g)
平均含量
(mg/ g)
RSD
(%)
1
2
3
4
3.015
5.023
5.011
5.021
0.2742
0.4436
0.4414
0.4556
4.22
4.07
4.05
4.15
4.12 1.69
　
3　讨论
3.1　在样品溶液的制备研究中 , 分别考察了水回流法 、 甲
醇回流法 、 水超声法 、 甲醇超声法对杏香兔耳风总黄酮提
取效果的影响 , 结果显示水回流法提取效果最好 , 水超声
法提取次之 , 甲醇提取效果最差 , 故选用水回流法作为杏
香兔耳风中总黄酮成分提取方法。
3.2　采用紫外分光光度法测定杏香兔耳风中总黄酮的含
量 , 样品中加入显色剂后 , 随着时间的增长 , 显色会逐渐
减弱 , 因此不宜放置时间过长 , 一般以 30min 内测定最佳。
3.3　采用紫外分光光度法测定杏香兔耳风药材总黄酮含量
方法简便 、 快速 , 准确度好 , 精密度高 , 可用于杏香兔耳
风药材的质量控制。
参考文献:
[ 1] 国家中医药管理局 《中华本草》 编委会 .中华本草
[ M] .第 7册.上海:上海科学技术出版社 , 1999.461.
[ 2] 胡昌奇 , 王朴 , 等.杏香兔耳风的化学成分研究 (I)
[ J] .中草药 , 1983 , 14 (11):486.
[ 3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 (2000 版一部)
[ M] .北京:化学工业出版社 , 2000.257.
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第 6 期　　　　　　　　　　　伍晓春 , 周蓉 , 严朝　, 田玲:杏香兔耳风总黄酮含量的测定　　　　　　　　　　第 27 卷