免费文献传递   相关文献

广东不同产地五指毛桃药材中补骨脂素及微量元素的含量测定及质量评价



全 文 :Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2013 Vol.26 No.4
中国科技 核心期刊
五指毛桃(Ficus simplicissima Lour.)为岭南
常用草药之一,俗称牛奶木、土黄芪、火龙叶、九龙
根等,被《中华人民共和国药典》收载[1],以桑科
(Moroceae)榕属(Ficus)植物粗叶榕(F.hirta)的根
入药,性平,味甘、辛,有健脾补肺、利湿舒筋之功,
用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽等症[2]。近年
来有关其化学成分、药理活性等方面的研究证实,
补骨脂素为五指毛桃的主要活性成分之一,具有
抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等作
用[3-4]。为分析及全面评价广东不同地区野生或市
方 药·药理研究
广东不同产地五指毛桃药材中补骨脂素及
微量元素的含量测定及质量评价 *
黄文华,宋艳刚,李占永,刘学华,刘东来
丽珠集团利民制药厂,广东 韶关 512028
[摘 要]目的:建立五指毛桃药材中补骨脂素的高效液相色谱测定方法及微量元素的原子吸收光谱测
定法。方法:采用反相高效液相色谱法测定补骨脂素的含量,Agilent Hypersi C18色谱柱 (4mm×250mm,
5μm),流动相:乙腈-水(35∶65),流速为1.0mL/min,柱温:35℃;检测波长:222nm。采用火焰原子吸收光谱法
测定Ca、Mg、Mn、Fe、Zn、Cu、Pb7种微量元素的含量,综合比较药材内在质量的优劣。以补骨脂素及各微量元素
的含量为指标,应用SPSS软件对不同产地药材进行主成分分析。结果:补骨脂素在0.11~ .19g范围内,线性
关系良好,平均回收率为101.1%,RSD为2.8%。通过对不同产地药材的微量元素的测定,结果显示:质量较
优三产地排名为:河源、翁源、清远;质量较差有2个产地:郁南、玉林;其余4个产地质量中等。结论:五指毛桃
药材中补骨脂素的HPLC分析方法结果准确,重现性好,可作为五指毛桃药材的质量评价方法。以指标性化学
成分及微量元素的含量,结合统计分析方法,能较全面客观地评价五指毛桃药材的质量。
[关键词]五指毛桃;补骨脂素;HPLC法;微量元素;原子吸收
[中图分类号]R282.71[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2013)04-0014-03
QualityAssessmentofWuZhi MaoTaofr m DifferentProducingAreasofGuangdong
byContentDetermination ofPsoralen andMicroelements
HUANG Wenhua, SONG Yangang, LI Zhanyong, LIU Xuehua, LIU Donglai
LiMin Pharmaceutical Factory of Livzon Group, Shaoguang 512028, China
Abstract Objective:ToestablishthedeterminationmethodsforpsoralenofWuZhi MaoTao(Ficus simplicis-
sima Lour.) byHPLC and microelements byatomic absorption spectrometry. Method: Content of psoralen was de-
tectedwiththemethodofreversedphasehigh-performanceliquidchromatography (RP-HPLC),AgilentHypersiC18
column (4mm×250mm,5μm)wasadoptedatthetemperatureof35℃.Themobilephasewasacetonitrile-water
(35:65)attheflowrate1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwas222nm.ThecontentsofCa,Mg,Mn,Fe,Zn,Cu
andPbweredeterminedwithatomicabsorptionspectrometrytocomparethequalityofherbscomprehensively.Prin-
cipalcomponentanalysisofherbsfromdifferentproducingareaswasperformedwithSPSSsoftwarebytakingcon-
tentsofpsoralenandmicroelementsasindexes.Result:Linearityofpsoralenwasobtainedintherangeof0.11~1.19
g,averagerecoveryratewas101.1%andRSD2.8%.Theresultsofmicroelementsdeterminationinherbsfromdif-
ferent producing areas revealed that the top three producing areas wereHeyuan,Wengyuan andQingyuan; the two
ones with poor quality wereYunan ndYulin; the other four places were with middle quality. Conclusion: HPLC
method for psoralen inWuZhiMaoTao was accurate and reproducible, which could be used for quality control of
WuZhiMaoTao.Chemicalingredientindexes,thecontentsofmicroelementscombinedwithstatisticalanalysiscould
reflectthequalityofWuZhi MaoTaocomprehensivelyandobjectively.
Keywords WuZhi MaoTao(Ficus simplicissimaLour.);psoralen;HPLCmethod;microelement;atomicabsorption
14
2013年第 26卷第 4期
中国科技 核心期刊
方 药·药理研究
售五指毛桃的质量,本研究采用高效液相色谱法
分别对广东不同地区野生五指毛桃根茎叶中补骨
脂素的含量进行了测定,并采用火焰原子吸收光
谱法测定 Ca、Mg、Mn、Fe、Zn、Cu、Pb 7 种微量元素
的含量,综合比较药材内在质量的优劣,对揭示中
药的内在质量,阐明传统的药理、药效、毒理提供
科学依据。
1 仪器与试药
日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪,原子吸
收分光光度计(岛津AA-6100型),电子分析天平
(梅特勒 -托利多);Ca、Mg、Mn、Fe、Zn、Cu、Pb 标准
溶液购自国家有色金属及电子材料分析测试中
心,乙腈为色谱纯(美国TEDIA公司提供),盐酸、
硝酸、硫酸、高氯酸(广州化学试剂厂提供)均为优
级纯,其他试剂均为分析纯,水为超纯水;补骨脂
素和佛手柑内酯对照品购自中国食品药品检定研
究院,五指毛桃药材来源于广东不同地区野生
品种(见表1)。
表1 广东不同地区野生五指毛桃品种采集
样品号 采集地点 采集时间
1 广东韶关 2011-5-11
2 广东廉江良垌镇 2011-8-7
3 广东廉江营仔镇 2011-6-6
4 广东罗定泗纶镇 2011-7-3
5 广东信宜洪冠镇 2011-9-2
6 广东揭西 2011-9-15
7 广东博罗石坝镇 2011-10-7
8 广东化州 2011-2-5
9 广东清远 2011-12-1
10 广东河源 2011-10-18
2 方法与结果
2.1五指毛桃样品中补骨脂素含量测定
2.1.1色谱条件 色谱柱为 Agilent Hypersi
C18(4 mm×250mm,5μm);检测波长222nm,流动相
为乙腈:水(35:65);流速:1.0mL/min。
2.1.2对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素
对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.60μg的溶
液,即得。
2.1.3供试品溶液的制备 取五指毛桃供试品
粗粉1.0g,精密称定,加甲醇10mL,超声波提取
30分钟,定容至10mL,0.45μm滤膜过滤,滤液作
为供试品溶液。
2.1.4线性关系考察 精密称取补骨脂素对照
品适量,用甲醇准确配制成浓度为 16.0、31.0、
62.0、124.0、248.0 mL 的溶液,进样 10μL,每一
浓度进样6次,以峰面积为纵坐标,标准浓度为横
坐标,进行线性回归,得补骨脂素标准品回归方程
为 Y=4815163.849X-29232.4,r=0.9997(n=6),
线性范围为0.11~1.19g。
2.1.5精密度试验 精密吸取每毫升含补骨脂
素0.048mg的对照品溶液10μL,注入液相色谱
仪,测定峰面积,重复测定5次,RSD为0.78%,表
明仪器精密度良好。
2.1.6稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液
10μL,分别于 0、1、2、4、8、12、24、48 小时进样测
定,RSD为1.32%,表明供试品溶液在48小时内稳
定。
2.1.7重复性试验 取5份同批次五指毛桃药
材各3.0g,分别精密称定后,按供试品溶液制备
方法制备,分别测定补骨脂素,结果测得补骨脂素
平均含量为0.17mg/g,RSD为2.0%。
2.1.8加样回收率试验 取5份同一批已知补
骨脂素含量的五指毛桃药材各1.50g,精密称定
后,分别精密加入每1mL含补骨脂素0.12mg的
溶液 1.50 mL,其余同“2.1.3”项下操作,进样测
定,结果见表2。
2.1.9样品测定 取供试品溶液和对照品溶液,
分别进样10μL,按外标法计算含量,测定结果见
表3。
表2 补骨脂素加样回收率试验结果
取样量/g药材中补骨脂素含量/mg加入补骨脂素含量/mg补骨脂素检出量/mg回收率/%平均回收率/% RSD/%
1.5034 0.173 0.18 0.349 97.8
1.5078 0.176 0.18 0.351 97.2
1.5043 0.172 0.18 0.348 97.8
1.5002 0.170 0.18 0.361 106.1 101.1 2.8
1.5058 0.174 0.18 0.352 98.8
1.5126 0.179 0.18 0.364 102.7
1.5087 0.176 0.18 0.358 101.1
1.5107 0.178 0.18 0.363 102.8
1.5049 0.171 0.18 0.361 105.6
15
Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2013 Vol.26 No.4
中国科技 核心期刊
表3 广东不同地区野生五指毛桃的补骨脂素含量
样品号 采集地点 补骨脂素含量/(mg·g-1)
1 广东韶关 0.5432
2 广东廉江良垌镇 0.7843
3 广东廉江营仔镇 0.6743
4 广东罗定泗纶镇 0.4332
5 广东信宜洪冠镇 1.1204
6 广东揭西 0.7844
7 广东博罗石坝镇 0.5748
8 广东化州 0.3472
9 广东清远 0.5434
10 广东河源 0.5284
2.2五指毛桃样品中微量元素含量测定
2.2.1样品处理 取五指毛桃药材,105℃干燥,
粉碎成细粉,取2.0g,精密称定,各样品平行称3
份。加浓硝酸10mL,浸过夜,加热,煮至约1mL,放
冷,再加入高氯酸2.5mL,继续加热至大量白烟冒
尽,冷却,加3%硝酸溶解,过滤并稀释至50mL,摇
匀,备用。见表4。
2.2.2标准溶液和标准曲线的制备 配制 Ca、
Mg、Mn、Fe、Zn、Cu、Pb 系列标准溶液,以吸收值为
纵坐标,相应浓度值为横坐标,制作标准曲线,确
定回归方程,结果相关系数值良好。
3 主成分分析与讨论
为了综合评价五指毛桃的质量,本文以补骨
脂素及微量元素的含量为指标,采用 SPSS 13.0
统计软件对 10 批药材进行主成分分析,结果见
图1。
图1 五指毛桃药材的补骨脂素含量主成分分析结果
主成分分析结果显示:1,4,7,8,9,10号样品
被聚为一类(Ⅰ类);2,3,6号样品被聚为一类(Ⅱ
类);5号样品为一类(Ⅲ类)。如果按照传统的质
量评价观念,仅仅以一种或两种化学成分的含量
来评价药材质量的优劣和稳定性,很难全面地反
映其质量,不符合中药作为一种复杂体系的用药
观念。药材中所含微量元素Ca、Mg、Mn、Fe、Zn、Cu
均为人体必需元素,有益于人体的生长发育及防
病治病。其中Ca、Mg、Mn、Fe、Zn有养血、益肝、补肾
之功效,Mn、Zn、Cu与扶正固本、活血化瘀、益气安
神等功效有关,可提高免疫力,促进生长发育;Mn
还具有抗衰老、抗癌作用;而Pb则为有害元素,其
含量应被限制。因此,从这方面来说,有益元素含
量高,则可说明该药材质量好,而有害元素的含量
越高,说明药材的质量越差,对人体伤害越大,因
此我们应对药材中的微量元素做全面分析。
本研究首次将指标性化学成分的含量和微量
元素的含量相结合,综合全面地评价五指毛桃药
材的质量优劣及稳定性,有利于药材的规范化种
植及其深度开发利用。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典:一部
[M].北京:人民卫生出版社,1977:90.
[2] 现代中药学大词典编委会.现代中药学大词典[M].北京:人
民卫生出版社,2001:371.
[3] 秦雪莲.高效液相色谱法测定不同产地五指毛桃中补骨脂
素的含量[J].中国医师杂志,2006,8(2):270-271.
[4] 温玲,吴华碧,杨文豪,等.不同叶型不同采收部位五指毛桃
中补骨脂素含量的测定[J].时珍国医国药,2008,19(3):
687-688.
收稿日期:2012-11-21
*基金项目:广东省韶关市创新资金项目(编号2011CX/G13)
作者简介:黄文华(1979—),男,博士学位。研究方向:中药制
剂研究。
方 药·药理研究
表4 五指毛桃样品中微量元素含量 μg/g
样品号 采集地点 Ca Mg Mn Fe Zn Cu Pb
1 广东韶关 1235.56 43.23 225.40 267.56 52.45 3.24 1.45
2 广东廉江良垌镇 1277.48 44.32 223.43 243.43 48.34 2.45 2.12
3 广东廉江营仔镇 1376.24 42.35 243.12 256.43 61.09 3.12 0.98
4 广东罗定泗纶镇 1226.38 44.10 213.89 284.12 54.21 1.34 1.21
5 广东信宜洪冠镇 1323.48 44.21 209.34 232.43 48.34 2.65 0.89
6 广东揭西 1246.45 45.34 210.34 213.45 57.43 3.12 0.78
7 广东博罗石坝镇 1333.78 43.84 208.45 234.56 61.34 3.32 0.45
8 广东化州 1342.67 44.34 221.54 287.34 63.23 8.34 1.67
9 广东清远 1278.54 43.23 211.23 232.46 54.12 4.23 0.34
10 广东河源 1343.89 44.12 232.56 189.34 57.78 2.13 0.56
16