全 文 ：２０１０，１７：１４－１８．
［４］　Ｌｉ　Ｙ，Ｚｈａｏ　Ｓ，Ｚｈａｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－Ｏ－ｇａｌａｔｅ
（ＥＧＣＧ）ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ　ＦＦＡｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｔｈｒｏｕｇｈ　ＡＭＰＫ　ｐａｔｈｗａｙ　ａｎｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｖｉｖｏ
［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｐｒａｃｔ，２０１１，９３：２０５－２１４．
［５］　Ｋｏｈ　ＳＨ，Ｌｅｅ　ＳＭ，Ｋｉｍ　ＨＹ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅ－
ｃｈｉｎ　ｇａｌａｔｅ　ｏｎ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡＬＳｍｏｄｅｌ
ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｌｅｔｔ，２００６，３９５（２）：１０３－１０７．
［６］　Ｇｈａｓｅｍｉ　Ｒ，Ｄａｒｇａｈｉ　Ｌ，Ｈａｅｒｉ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｂｒａｉｎ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｄｙｓｒｅｇｕ－
ｌａｔｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ　ｄｉｓｏｒ－
ｄｅｒｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，２０１３，４７（３）：１０４５－１０６５．
［７］　Ｂｏｍｆｉｍ　ＴＲ，Ｆｏｒｎｙ－Ｇｅｒｍａｎｏ　Ｌ，Ｓａｔｈｌｅｒ　ＬＢ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎ　ａｎｔｉ－ｄｉ－
ａｂｅｔｅｓ　ａｇｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｂｒａｉｎ　ｆｒｏｍ　ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎｓｕｌｉｎ
ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ａβｏｌｉ－
ｇｏｍｅｒｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ，２０１２，１２２：１３３９－１３５３．
［收稿日期］２０１３－０９－１７
［基金项目］重庆医科大学附属永川医院资助重点项目（编号：ＹＪＺＤ２０１２０００６）；重庆市卫生局面上项目（编号：２０１２－２－１６７）　［作者简介］王
晶，女，在读研究生，研究方向：药物新剂型和新技术研究，电话：０２３－８５３８１７６０　［通讯作者］廖娟，女，助理研究员，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉａｏｊｕａｎ２６＠ｙａｈｏｏ．
ｃｏｍ
喜树果超微粉显微特征及含量分析
王晶１，廖娟１，刘北忠１，蔡艳华２，张丹１，刁奇志１　 （１．重庆医科大学附属永川医院中心实验室，重庆４０２１６０；２．重庆文
理学院材料交叉学科研究中心，重庆４０２１６０）
［摘要］　目的：观察喜树果超微粉的显微特征并测定喜树碱溶出量。方法：气流粉碎制备喜树果超微粉和残渣，显微镜下观
察其细胞学特征。在３７０／４３０　ｎｍ（λｅｘ／λｅｍ）波长下测定喜树果残渣和超微粉乙醇提取液中ＣＰＴ含量。结果：镜下残渣细胞结
构清晰可见，而超微粉无完整细胞存在，且粒径小于５０μｍ。一定浓度的１０－羟基喜树碱能猝灭喜树碱的荧光。喜树果超微粉
的乙醇提取液中喜树碱含量有显著性差异（ｔ＝４．８０９，Ｐ＜０．０５）。结论：超微粉中活性成分溶出率高，荧光法测定喜树果药材
中喜树碱含量。
［关键词］　喜树果；超微粉：喜树碱；１０－羟基喜树碱；荧光法
［中图分类号］Ｒ９３１．６　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）１３－１０７５－０４　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．１３．０９
Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｏｆ　ｕｌｔｒａ－ｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｉｎ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｃａｍｐ－
ｔｏｔｈｅｃａｅ
ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ１，ＬＩＡＯ　Ｊｕａｎ１，ＬＩＵ　Ｂｅｉ－ｚｈｏｎｇ１，ＣＡＩ　Ｙａｎ－ｈｕａ２，ＺＨＡＮＧ　Ｄａｎ１，ＤＩＡＯ　Ｑｉ－ｚｈｉ　１（１．Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏ－
ｒｙ　ｏｆ　Ｙｏｎｇｃｈｕａｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０２１６０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｒｔｓ　ａｎｄ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０２１６０，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ
Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｅ　ｕｌｔｒａｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｅ　ｗｅｒｅ　ｓｈａｔｔｅｒｅｄ　ｂｙ　ｊｅｔ　ｍｉｌ　ａｎｄ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｔｏ　ｕｌｔｒａｆｉｎｅ　ａｎｄ　ｆｉｎｅ
ｐｏｗｄｅｒ．Ｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ＢＸ５１　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｕｓｉｎｇ　ｅｔｈａｎｏｌ　ａｓ　ｓｏｌｖｅｎｔ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｌ－
ｔｒａｆｉｎｅ　ａｎｄ　ｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ａｔλｅｘ／λｅｍ（３７０／４３０　ｎｍ）ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＰＴ．ＲＥ－
ＳＵＬＴＳ　Ｃｅｌｕｌａｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｗａｓ　ｖｉｓｉｂｌｅ　ｗｈｉｌｅ　ｕｌｔｒａｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｗｉｔｈ　ａ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｕｎｄｅｒ　５０μｍ　ｈａｄ　ｎｏ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｃｅｌｓ．
Ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ＣＰＴ　ｗａｓ　ｑｕｅｎｃｈｅｄ　ｂｙ１０－ｈｙｄｒｏｘｙ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ　ｉｎ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｂｕｔ　ｉｔ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｂｅ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｄ
ｂｙ　ａ　ｌｏｗ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１０－ｈｙｄｒｏｘｙ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＰＴ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｕｌｔｒａｆｉｎｅ　ａｎｄ　ｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｈａｄ　ａ　ｓｔａｔｉｓｔｉ－
ｃａｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｔ＝４．５５９，Ｐ＜０．０５）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＰＴ．Ｆｌｕｏ－
ｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＰＴ　ｉｎ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｅ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｅ；ｕｌｔｒａｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ；ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；１０－ｈｙｄｒｏｘｙ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ
　　喜树是我国特有的植物，为蓝果树科喜树属落
叶乔木［１］。全株均含有喜树碱 （Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，
ＣＰＴ），果实含量最高［２］。喜树碱是拓扑异构酶Ⅰ选
择性抑制剂，抑制ＤＮＡ转录、复制、分裂从而抑制
肿瘤生长，对胃肠道和头颈部癌有较好疗效［２－４］，其
衍生物伊立替康、拓扑替康是晚期大肠癌的一线治
疗药物［５］。
中药超微粉碎技术将符合炮制规范的药材粉碎
至微纳米级，其粒径小于细胞直径［６］，因此几乎无完
整的细胞结构，易于药物溶出。本实验通过气流粉
碎获得喜树果超微粉和残渣，显微鉴别其细胞学特
征，测定喜树果超微粉和残渣活性成分溶出率，旨在
·５７０１·中国医院药学杂志２０１４年７月第３４卷第１３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｌ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１３
进一步完善喜树果超微粉的显微鉴定和含量测定方
法，为喜树果超微粉临床应用提供实验依据。
１　材料
ＡＰ２２４ＣＮ分析天平（奥豪斯仪器上海有限公
司）；ＢＸ５１荧光显微镜（日本Ｏｌｙｐｕｓ）；Ｎｅｏｆｕｇｅ１５Ｒ
离心机 （香 港 力 康 生 物 医 疗 科 技 控 股 集 团）；
ＳＢ５２００ＤＴＤＮ超声清洗器（宁波新芝生物科技有限
公司）；ＬＳ－４５荧光分光光度计（美国珀金埃尔默有
限责任公司）；Ｖａｒｉｏｓｋａｎ　Ｆｌａｓｈ多功能读数仪（美国
热电赛默飞世尔科技公司）；Ｃｌａｓｓｉｃ　ＵＶＦ超纯水系
统（威立雅ＥＬＧＡ　ＬａｂＷａｔｅｒ）；ＣＰ－１００气流粉碎机
（中国空气动力研究与发展中心）。
喜树果购自四川省中药饮片有限责任公司（批
号１００５０７），经重庆医科大学附属永川医院曾宪泉
主管中药师鉴定为珙桐科植物喜树Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ
ａｃｕｍｉｎａｔａＤｅｃｎｅ．的果实。喜树碱和１０－羟基喜树
碱购自上海晶纯实业有限公司（分析标准品，≥
９８％，批号３１４３０和２８１２７）。甘油为市售分析纯，
无水乙醇为生物技术级（美国 Ａｍｒｅｓｃｏ公司）。实
验用水是纯水机制备的超纯水（１８．２　ＭΩ·ｃｍ－１）。
２　方法与结果
２．１　显微鉴别　委托重庆文理学院材料中心加工，
经气流粉碎机 （粉碎压力０．８　ＭＰａ，空气耗量
１．３　ｍ３·ｍｉｎ－１），进样２　０００　ｇ喜树果药材得超微粉
５０　ｇ（收率２．５％）和残渣１７０　ｇ（收率８．５％），分别
取超微粉和残渣米粒大小，置于载玻片上，超纯水润
湿，制作水封片，用滴管加少许稀甘油，轻轻盖上载
玻片，镊子轻敲去除气泡于显微镜下观察，数码采集
照相，附加标准显微镜测标尺。
从图１可知，同一视野下，残渣粉末粒径远大于
超微粉，根据中国药典２０１０年版二部凡例粉末等级
标准［７］，确定产物为残渣为粗粉，全部能过二号筛。
显微下残渣的组织块清晰可见，细胞结构清晰，形状
不规则，维管束、导管、薄壁细胞、草酸钙方晶、草酸
钙簇晶清晰可见，有细胞壁完整的细胞群。超微粉
为不规则的小颗粒状，部分呈黄棕色，无完整细胞存
在，破壁率在９５％以上。
２．２　溶液的配制
２．２．１　对照品溶液　分别称取喜树碱和１０－羟基
喜树碱标准品１０．０ｍｇ，置于２５０　ｍｌ量瓶中，用无水
乙醇溶解、定容，并稀释为１００μｍｏｌ·Ｌ
－１标准溶液，
４℃避光保存备用。
２．２．２　供试品溶液　准确称取喜树果超微粉和残
渣各０．１ｇ，分别置于１　５　ｍｌ离心管中，每组做３个
图１　喜树果残渣和超微粉的显微特征（×２００）
Ａ．超微粉；Ｂ．残渣中的草酸钙方晶；Ｃ．残渣中的导管；Ｄ．残渣中完
整细胞群
Ｆｉｇ　１　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｃｏａｒｓｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ａｎｄ　ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ
ｐｏｗｄｅｒ　ｉｎ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｅ（×２００）
Ａ．ｕｌｔｒａｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ；Ｂ．ｃａｌｃｉｕｍ　ｏｘａｌａｔｅ　ｃｒｙｓｔａｌｓ　ｏｆ　ｃｏａｒｓｅ　ｐｏｗｄｅｒ；Ｃ．
ｐｈｌｏｅｍ　ｏｆ　ｃｏａｒｓｅ；Ｄ．ｃｅｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏａｒｓｅ　ｐｏｗｄｅｒ
平行实验，每管加入无水乙醇５　ｍｌ，５０℃恒温水浴
中超声提取３０　ｍｉｎ，取出，冷却至室温，补足重量，
离心（３　０００　ｒ·ｍｉｎ－１，５　ｍｉｎ），０．４５μｍ的微孔滤膜
过滤上清液后，４℃避光保存备用。
２．３　测定方法
２．３．１　荧光测定条件　喜树果主要荧光成分是
ＣＰＴ和 ＨＣＰＴ。二者属于喹啉类生物碱，分子中的
喹啉环具有共轭刚性结构，能产生荧光［８－９］。在１
ｃｍ石英比色皿中，用微量移液器加入适量供试品或
标准品溶液，超纯水补充至３　ｍｌ，摇匀、静置。采用
荧光分光光度计扫描２００～８００　ｎｍ波长范围内体
系的荧光发射光谱和荧光激发光谱，激发和发射狭
缝均为１０　ｎｍ。
从图２可知，ＣＰＴ标准品水溶液在荧光发射峰
４３０　ｎｍ处测定的荧光激发峰为２２４，２５４，３５４，３７０
ｎｍ，ＨＣＰＴ标准品水溶液在其荧光发射峰５５５　ｎｍ
检测的荧光激发峰为２２８，２６２，３８０　ｎｍ，二者激发峰
相近，ＨＣＰＴ的存在可能会干扰ＣＰＴ的测定。但
３７０　ｎｍ波长下激发ＣＰＴ和 ＨＣＰＴ标准品水溶液，
二者最大发射波长为４３０　ｎｍ和５５５　ｎｍ，荧光发射
峰相差１２５　ｎｍ，且 ＨＣＰＴ在４３０　ｎｍ波长下的相对
荧光强度远低于ＣＰＴ的。因此在３７０　ｎｍ激发光下
测定喜树果提取液４３０　ｎｍ波长下的相对荧光强度
从而确定ＣＰＴ含量是可行。
２．３．２　ＨＣＰＴ对ＣＰＴ测定的影响　在１　ｃｍ石英
比色皿中，加入适量ＣＰＴ标准品溶液，用微量移液
器逐次加入 ＨＣＰＴ标准品溶液，超纯水补充至３　ｍｌ
·６７０１· 中国医院药学杂志２０１４年７月第３４卷第１３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｌ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１３
图２　ＣＰＴ和ＨＣＰＴ标准品水溶液、超微粉和残渣的乙醇提取液
的荧光光谱图
Ａ．激发光谱图；Ｂ．发射光谱图
Ｆｉｇ　２　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ＣＰＴ　ｓｔａｎｄａｒｄ，ＨＣＰＴ　ｓｔａｎｄａｒｄ，
ｃｏａｒｓｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ａｎｄ　ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ　ｐｏｗｄｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
Ａ．ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ；Ｂ．ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒａ
检测体系，摇匀、静置。在３７０　ｎｍ激发光下记录混
合溶液在３７０～７００　ｎｍ荧光发射光谱，激发和发射
狭缝均为１０　ｎｍ。随着体系中 ＨＣＰＴ浓度增加，混
合物在４３０　ｎｍ波长下的相对荧光强度逐渐降低，
而在５５５　ｎｍ波长下的相对荧光强度相应增加（图
３），表明 ＨＣＰＴ对喜树碱存在荧光猝灭现象。
图３　ＨＣＰＴ猝灭ＣＰＴ的荧光光谱图
ＣＣＰＴ＝１．５μｍｏｌ·Ｌ－１，１～５：ＣＨＣＰＴ＝０、０．７５，３，７．５，１５μｍｏｌ·Ｌ－１
Ｆｉｇ　３　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ　ｏｆ　ＣＰＴ　ｂｙ　ＨＣＰＴ
　　将一系列浓度 ＨＣＰＴ与 ＣＰＴ标准品溶液混
合，在３７０　ｎｍ激发光下记录４３０　ｎｍ和５５５　ｎｍ荧
光发射强度，每组做３个重复，平行测定３次，以
ＨＣＰＴ和ＣＰＴ浓度比分别对４３０ｎｍ和５５５　ｎｍ波
长下的相对荧光强度作图。从图４可知，ＨＣＰＴ和
ＣＰＴ浓度比增加，４３０　ｎｍ波长下的相对荧光强度
线性降低，从图４可知，ＨＣＰＴ和ＣＰＴ浓度比增加，
４３０　ｎｍ波长下的相对荧光强度线性降低［Ｆ４３０ｎｍ＝
－４．５７×ＣＨＣＰＴ／ＣＣＰＴ＋１８７．５０（ｒ＝０．９４７）］，而５５５
ｎｍ波长下的相对荧光强度随着 ＨＣＰＴ和ＣＰＴ浓
度比的增大而显著增高［Ｆ５５５ｎｍ＝２３．５８×ＣＨＣＰＴ／ＣＣＰＴ
＋２０．９５（ｒ＝０．９９６）］。因此ＨＣＰＴ和ＣＰＴ的混合
体系中所占比例越大，３７０　ｎｍ激发光下对喜树碱在
４３０　ｎｍ波长下相对荧光强度的猝灭强度越大，对含
量测定干扰越大。而混合体系中 ＨＣＰＴ的含量低
于５０％，ＣＰＴ在４３０　ｎｍ波长下的相对荧光强度只
降低１０％，对结果干扰小，采用荧光法测定ＣＰＴ含
量越接近真实值。喜树果提取液主成分是 ＣＰＴ，
ＨＣＰＴ的含量较少。因此在３７０　ｎｍ 激发光测定
ＣＰＴ在４３０　ｎｍ波长下荧光发射强度确定喜树果药
材中ＣＰＴ含量可行的。
图４　ＨＣＰＴ浓度与４３０　ｎｍ、５５５　ｎｍ波长下相对荧光强度的线性关
系
（ＣＣＰＴ＝１．５μｍｏｌ·Ｌ－１，ＣＨＣＰＴ＝０．３７５，０．７５，１．５，３，４．５，７．５，１５
μｍｏｌ·Ｌ－１）
Ｆｉｇ　４　Ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＨＣＰＴ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｆ４３０ｎｍｏｒ
Ｆ５５５ｎｍ
２．３．３　乙醇体积分数对ＣＰＴ荧光的影响　ＣＰＴ
和 ＨＣＰＴ的水溶性差，采用无水乙醇提取喜树果中
活性成分。在激发光３７０　ｎｍ下测定ＣＰＴ乙醇溶液
（１０％～９０％）在４３０　ｎｍ波长下的相对荧光强度。
结果表明，乙醇体积分数对ＣＰＴ的荧光有影响。乙
醇体积分数在１０％～３０％时，ＣＰＴ在４３０　ｎｍ波长
下的相对荧光强度趋于稳定，乙醇体积分数大于
３０％时，相对荧光强度逐渐降低。因此检测时采用
超纯水稀释，将乙醇的体积分数控制在３０％以内，
尽量降低溶剂对检测结果的影响。
２．４　测定方法的确定　在３８４孔荧光板中每孔加
入供试品或标准品溶液８０μｌ，乙醇体积分数低于
３０％，在３７０　ｎｍ激发光下检测４３０　ｎｍ波长下的相
对荧光强度，激发和发射狭缝均为１０　ｎｍ；每组３个
重复，平行测定３次，超纯水作空白。
２．５　标准曲线　在２５℃，配制０．２５，０．５，０．７５，１，
１．２５，１．５和１．７５μｍｏｌ·Ｌ
－１的ＣＰＴ标准品溶液，在
３７０／４３０　ｎｍ（λＥｘ／λＥｍ）测定其相对荧光强度，每组３
个重复，平行测定３次，以４３０　ｎｍ波长下的相对荧
光强度对 ＣＰＴ 浓度做工作曲线，Ｆ４３０　ｎｍ ＝１５２．６２
ＣＣＰＴ＋０．７１１　９（ｒ＝０．９９９）。结果表明，ＣＰＴ在０～
１．７５μｍｏｌ·Ｌ
－１范围内与其４３０　ｎｍ波长下的相对
荧光强度有良好线性关系。
２．６　精密度　３７０　ｎｍ 激发光下，测定２．８，４．３，
５．７，７．１，８．６μｍｏｌ·Ｌ
－１的ＣＰＴ溶液在４３０　ｎｍ的
相对荧光强度，激发和发射狭缝均为１０　ｎｍ，１０　ｍｉｎ
·７７０１·中国医院药学杂志２０１４年７月第３４卷第１３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｌ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１３
测定一次，连续测定７次，各浓度重复测定３批次，
其相对荧光强度分别为（３９４．７７±２．６９），（５４１．６１±
３．７４），（６２０．６６±９．５４），（８３２．００±１．７２）和（９２７．９９
±３．７３），ＲＳＤ 分 别 为０．７３％，０．６８％，０．４％，
０．６９％，０．２％，这些浓度在仪器测定范围内，精度相
当，ＣＰＴ溶液在７０　ｍｉｎ内荧光强度较稳定。
２．７　样品测定　分别称取超微粉和残渣０．１　ｇ，按
供试品溶液制备方法制备，按荧光光谱测定方法测
定，以标准曲线计算０．１　ｇ的超微粉和残渣中ＣＰＴ
的含量为（０．０３８±０．００３）ｍｇ和（０．０３３±０．００４）
ｍｇ，经ＳＰＳＳ　１７．０软件ｔ检验表明超微粉中ＣＰＴ提
取率明显高于残渣（ｔ＝４．８０９，Ｐ＜０．０５）。本方法
检测出喜树果超微粉中喜树碱提取率为０．０３８％，与
文献报道一致［２］。
３　讨论
气流粉碎机由粉碎机、分级机、收集器、除尘器、
引风机和消音器六部分组成，是将净化和干燥的压
缩空气通过特制喷嘴，形成高速气流使材料在密闭
粉碎腔中互相碰撞，使物料粉碎成超微粉。由于压
缩空气急剧吸热膨胀，在粉碎腔中形成－４０℃的低
温，不会改变物料的化学性质［１０］。将该技术应用到
中药领域具有提高生物利用度等优势［１１－１３］。本实验
中喜树果超微粉和残渣的收率分别是２．５％和
８．５％，收率极低的原因是投入物料量少，但气流粉
碎机各部件吸附较多。中药超微粉的粒径一般小于
７５μｍ，植物细胞直径为１０～１００μｍ，因此超微粉细
胞破壁率较高［１４－１７］，有利于细胞内或细胞间的活性
成分溶出。喜树果超微粉和残渣的提取液在同一条
件下荧光激发和发射光谱峰形一致，但超微粉的相
对荧光强度略高，表明超微粉和残渣中的活性成分
一致，但超微粉中活性成分的溶出量略高于残渣（Ｐ
＜０．０５），推测其原因可能是超微粉的细胞破壁率
高。在同一提取条件下，活性成分喜树碱溶出较快；
其次喜树果中的活性成分可能存在超微粉中的含量
高于残渣。研究的下一步将对喜树果超微粉、残渣
和普通粉的喜树碱提取率进行比较以探明超微粉中
喜树碱提取率高于残渣的原因。
荧光法可直接测定喜树果药材中喜树果含量，
其原因有：（１）喜树果药材中主荧光成分是喜树碱和
１０－羟基喜树碱，在３７０　ｎｍ光下激发，两者最大荧光
发射峰分别为４３０　ｎｍ和５５５　ｎｍ，Ｓｔｏｋｅ位移相差
１２５　ｎｍ，理论上干扰小；（２）与喜树碱相比，相同浓
度的１０－羟基喜树碱在３７０　ｎｍ光下激发时，４３０　ｎｍ
波长下的相对荧光强度较低；（３）一定浓度的１０－羟
基喜树碱对喜树碱有荧光猝灭现象，其猝灭机理尚
待进一步研究。喜树果药材中喜树碱含量远高于
１０－羟基喜树碱，因此荧光法可用于喜树果药材中喜
树碱含量的定性和定量检测，以鉴别药材优劣。
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［收稿日期］２０１３－０８－０８
·８７０１· 中国医院药学杂志２０１４年７月第３４卷第１３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｌ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１３