全 文 ： 论　著
铁苋菜水提取液对三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎的防治作用
邓　莉 ,胡晋红*(第二军医大学长海医院药学部 ,上海 200433)
[ 摘要] 　目的:考察铁苋菜水提取液对溃疡性结肠炎(UC)的防治作用。方法:雄性 SD 大鼠 70 只 ,随机分为 7 组 , 每组各
10 只。利用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液复制大鼠 UC 模型 ,以柳氮磺胺吡啶作为治疗对照药 ,从大鼠体质量变化 、腹泻与
便血的动物数 、结肠组织形态学改变及组织内髓过氧化物酶(MPO)的活性等多方面考察了铁苋菜水提取液高(9. 5 g /kg)、中
(6. 5 g /kg)、低剂量(2. 5 g /kg)治疗及中剂量(6. 5 g /kg)预防给药对 UC 的防治作用。结果:铁苋菜水提取液中 、高剂量治疗
及中剂量预防给药能够显著改善 TNBS 模型大鼠体质量的减轻 , 减少发生腹泻和便血的动物(P <0. 05);并且能够显著改善
大鼠结肠组织损伤及病理学改变。通过测定各组大鼠结肠组织中 MPO 的活性 , 发现铁苋菜水提取液中 、高剂量治疗及中剂
量预防给药能够显著降低模型组大鼠结肠组织中炎性细胞浸润及 MPO 的水平(P<0. 05), 并且与治疗药柳氮磺胺吡啶没有
显著性差异。结论:铁苋菜对 TNBS 诱导的大鼠 UC 有一定防治作用 , 具有开发利用价值。
[ 关键词] 　铁苋菜水提取液;溃疡性结肠炎;三硝基苯磺酸;柳氮磺胺吡啶
[ 中图分类号] 　R 574. 62　　　[文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　0258-879X(2005)05-0535-04
Acalypha decoction in prevention and treatment of trinitrobenzene sulfonic acid induced ulcerative col itis in
rats
DENG Li , HU Jin-hong *(Depar tment of Pha rmacy , Changhai H ospital , Second M ilitar y Medical Unive rsity , Shanghai
200433 , China)
[ ABSTRACT] 　Objective:To study the preventive and the rapeutic effects of Acalypha decoction on 2 , 4 , 6-trinitr obenzene sulfo-
nic acid induced ulcer ative colitis(UC) in rat s. Methods:To ta lly 70 male SD ra ts were equally randomized into 7 g roups , and
UC was induced by intrar ec tal administration o f TNBS(125 mg /kg in 50% e thanol). Six hours later the ra ts we re g iv en 3 dif-
fer ent doses of Acapha decoction (2. 5 , 6. 5 , 9. 5 g crude drug /kg body weight) daily fo r 10 d. Some ra ts w ere pretrea ted with
Acalypha decoction(6. 5 g crude drug /kg body weight) 3 d befo re the co litis w as induced. Sulfasalazine w as used as the stand-
a rd drug for compa rison. The efficacy o f Acalypha decoction was assessed through the follow ing parame te rs:bodyweight lo ss ,
dia rrhea and blo ody stoo l , macro scopic score , histological changes , and M PO activity in colon tissue. Results:Acalypha decoc-
tion trea tment(9. 5 g /kg , 6. 5 g /kg) and prevention administr ation(6. 5 g /kg) significantly inhibited the bodyw eight lo ss and
occur rence o f diarrhea and rectal bleeding in the ra ts(P <0. 05). The macroscopic damage sco re , histology and co lon w et
weight significantly improved in Acalypha decoction tr ea tment (9. 5 , 6. 5 g /kg) and prevention (6. 5 g /kg) rat models. The
MPO activity in colon tissue w as also decreased significantly in treatment(9. 5 , 6. 5 g /kg) and prevention(6. 5 g /kg) ra ts(P<
0. 05). The efficacy of Acalypha decoction was compa rable w ith the standa rd drug sulfasalazine. Conclusion:Acalypha austra-
lis L. is a valuable herb fo r trea ting ulcera tive colitis and it should be fur ther studied.
[ KEY WORDS] 　Acalypha decoction;ulce rativ e co litis;trinit robenzenesulfonic acid;sulfasalazine
[ Acad J Sec M il Med Univ , 2005 , 26(5):535-538]
[ 作者简介] 　邓　莉(1973-),女(汉族),博士生.
E-mai l:li liden g2004@126. com
*Corresponding au thor. E-m ail:hujh@smmu. edu. cn
溃疡性结肠炎(ulcerative coliti s , UC)是一种
以反复发作的腹泻腹痛 、肠黏膜炎症及溃疡为病理
特点的肠道非特异性炎症性疾病。其发病机制还不
明确 ,目前认为氧 、一氧化氮自由基及肠道炎症介质
的释放与 UC 的发病有关[ 1] 。由于至今还没有治疗
UC的特异性药物及方法 ,因此开发高效低毒的抗
UC药物 ,已经成为迫切的需求 。铁苋 ,又称海蚌含
珠 ,是大戟科植物铁苋菜(Acalypha austral is L.)
的全草 ,具有清热 、利湿 、消肿 、解毒 、止血之功效 ,民
间常用于肠炎。体外实验发现铁苋菜水提取液对多
种细菌具有杀灭作用[ 2] ,并对番泻叶引起的腹泻具
有止泻作用[ 3] 。本实验应用三硝基苯磺酸(TNBS)
诱导的大鼠 UC 模型 ,考察铁苋菜水提取液对 UC
的防治作用 ,为铁苋菜的进一步开发利用提供依据。
1　材料和方法
1. 1　实验动物 、试剂与药品 健康雄性 SD大鼠 70
只 ,清洁级 ,体质量 190 ～ 200 g ,购于中国科学院上
535 第 二 军 医 大 学 学 报Acad J S ec Mil Med Univ　2005 M ay;26(5)
海实验动物中心 ,动物合格证号:[ SYXK(沪)2002-
0026] ,自由进食和饮水。 TNBS 购于 Sigma公司 ,
5%(W /V)水溶液 ,批号[ 71K5009] ;髓过氧化物酶
(MPO)检测试剂盒购于南京建成生物工程有限公
司 ,批号[ 20030704] ;柳氮磺胺吡啶(SASP)为上海
三维制药有限公司生产 ,批号[ 200304C28] ,用刀片
轻轻刮去外层包衣后 ,粉碎过 80目筛 ,称取一定量
的粉末 ,加入蒸馏水配成 0. 1 g /m l的混悬液备用;
铁苋菜购于上海杨浦中药饮片厂 ,批号为[ 020313] ,
经第二军医大学药学院生药学教研室陈万生副教授
鉴定为大戟科植物铁苋菜的干燥全草。
1. 2　仪器与设备 UV-2100型紫外可见分光光度
计(日本岛津公司);TGL-16G 高速台式冷冻离心机
(上海安亭科学仪器厂);旋转蒸发仪(上海申生科技
有限公司);W201B型恒温水浴锅(上海申生科技有
限公司);XW-80A 旋涡混合器(上海琪特分析仪器
有限公司);玻璃匀浆器(上海玻璃仪器厂)。
1. 3　铁苋菜水提取液的制备 将 2 kg 铁苋菜饮片
粉碎成粗粉 ,加入 10倍量的水 ,煎煮 2次 ,每次 1 h ,
合并煎煮液 ,于旋转蒸发仪减压浓缩至 2 L ,得到 1
g /m l的浓缩液备用。
1. 4　UC 大鼠模型的制备[ 4] 取健康 SD大鼠 70
只 ,随机分为 7 组 ,每组 10 只。留 1 组作正常对照
组 ,余 6组均制备模型 ,禁食不禁水 24 h 后 ,腹腔注
射2%的戊巴比妥纳 ,使大鼠轻微麻醉后 ,将直径 2
mm的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约 8 cm
处 ,将 TNBS(TNBS 125 mg /kg)的 50%乙醇溶液 ,用
注射器一次性注入到大鼠的肠腔内 ,将大鼠的尾部提
起 ,倒置 30 s ,使造模剂充分渗透入大鼠的肠腔。
1. 5　实验分组及给药 正常对照组大鼠每日灌胃生
理盐水;6个实验组分别为:模型对照组(Model),每
日灌胃生理盐水;铁苋菜水提取液给药高(TXC3)、中
(TXC2)、低剂量(TXC1)组 ,每天分别灌胃铁苋菜水
提取液 9. 5 、6. 5 、2. 5 g /kg;治疗对照药组(SASP),每
天按照0. 3 g /kg 灌胃SASP混悬液;铁苋菜水提取液
预防给药(TXCpre)组 ,为考察铁苋菜水提取液的预
防作用 ,本组大鼠在造模前 3 d开始灌胃铁苋菜水提
取液 6. 5 g /kg ,造模后继续给药。各组大鼠均在造模
后6 h开始给药 ,连续给药 10 d。
1. 6　症状观察 每天对各组大鼠进行称重并记录 ,
观察大鼠粪便 ,并利用粪便潜血试剂对每只大鼠的
粪便进行测定 ,记录大鼠发生腹泻 、便血的数量。
1. 7　结肠黏膜组织损伤评分 各组大鼠给药 10 d
后 ,过量注射戊巴比妥钠致死 ,剖开大鼠腹部 ,观察
肠道大体改变。将距肛门 10 cm 长的末段结肠取
出 ,沿肠系膜纵行切开 ,用冰生理盐水冲洗 ,并称质
量 。将黏膜面向上展开 ,观察黏膜损伤并按照 Wal-
lace 和 Keenan1990年的评分标准[ 5] 进行评分:0:无
炎症和溃疡;1:局部充血但无溃疡;2:溃疡但无充
血;3:1处溃疡及炎症;4:2处或 2处以上溃疡及炎
症;5:溃疡延伸超过 2 cm 。同时取少量炎症部位的
肠组织 ,迅速放置液氮罐中保存备用 。
1. 8　病理组织切片观察 取肛门以上8 cm 肠段卷
起 ,置于 10%的中性甲醛液中固定 ,用石蜡包埋 ,行
4 μm 厚全层切片 , H-E染色观察组织学变化 。
1. 9　肠组织 MPO 活性测定 从液氮罐中取出结
肠组织 100 mg ,加入冰生理盐水 ,在组织匀浆器中
配成 10%的结肠组织匀浆 ,按照 MPO 检测试剂盒
说明书进行操作 ,测定 MPO 酶的活力 。
1. 10　统计学处理 计量指标均以 x±s表示 ,组间
差异行 t检验 ,采用 SPSS10. 0软件进行统计分析。
2 结　果
2. 1　铁苋菜水提取液对 TNBS 模型大鼠体质量的
影响　结果显示 ,未经 TNBS处理过的正常组大鼠
由于禁食1 d ,体质量在略微减轻后逐渐恢复到最初
体质量 ,并逐渐增加至原体质量的 110%。TNBS
模型组大鼠的体质量在造模后开始下降 ,在 1 ～ 9 d
内体质量显著低于正常组大鼠体质量(P<0. 05),
在第 2天降到最低 ,只有原体质量的 80%,第 3天
开始逐渐恢复 ,第 10天恢复到最初体质量 。而给铁
苋菜水提取液 6. 5 、9. 5 g /kg 以及给柳氮磺胺吡啶
0. 3 g /kg 能够促进模型大鼠的体质量的恢复 ,在造
模后第 2天体质量就开始恢复 , 5 ～ 6 d逐渐恢复到
最初。结果显示 ,铁苋菜水提取液预防给药可以对
抗大鼠因给予 TNBS引起的体质量的骤降 ,促进大
鼠体质量的尽早恢复 。给铁苋菜水提取液 2. 5 g /
kg ,在 1 ～ 9 d 内大鼠体质量与模型组无显著性差
异 ,结果见图 1 。
图 1　铁苋菜水提取液对 TNBS大鼠体质量的影响
Fig 1　Weight changes in rats with TNBS-induced colitis
treated with Acalypha decoction(n=10)
536 第二军医大学学报　2005年 5月 ,第 26卷
2. 2　铁苋菜水提取液对 TNBS 模型大鼠腹泻及便
血的影响 正常组大鼠没有发生腹泻和便血 , TN-
BS造模后的大鼠表现为毛色杂乱无光泽 ,神情倦怠
萎靡 ,均出现了不同程度的腹泻 、便血。与模型组相
比 ,铁苋菜水提取液预防给药组 、中高剂量组及治疗
对照药组大鼠发生腹泻 、便血个数明显减少 ,结果见
表 1。说明铁苋菜水提取液对 TNBS 诱导的 UC 大
鼠的腹泻与便血具有防治作用。
表 1 各组大鼠发生腹泻与便血的数量
Tab 1 Ef fects of Acalypha decoction on diarrhea and bloody stools in TNBS-induced colitis rats
(n=10)
Group
Number of diarrh ea
d1 d3 d5 d7 d10
Number of bloody stools
d1 d3 d5 d7 d10
Norm al 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
M odel 10 9 8 6 4 10 10 7 4 3
TXC pre 10 6 3 1 1 10 7 3 1 0
TXC 1 10 8 8 6 3 10 9 6 3 2
TXC 2 10 7 4 2 1 10 7 3 2 0
TXC 3 10 7 4 0 0 10 6 2 0 0
SPSA 10 7 3 1 1 10 7 6 4 2
　M odel:Ulcerative colit is;T XCpre:Prevent ive adminis t rat ion w i th 6. 5 g crude d ru g /kg body weight;T XC1-3:T reatment wi th 2. 5 , 6. 5 ,
9. 5 g crude d ru g /kg b ody w eigh t respectively;SPSA:T reatm ent wi th 0. 3 g sulfasalazine /kg body w eight
2. 3　铁苋菜水提取液对 TNBS 诱导的 UC 大鼠结
肠损伤评分及结肠湿重的影响 将大鼠解剖后观察
结肠外观及黏膜表面发现 ,模型组大鼠的结肠多数
与相邻脏器有轻度粘连 ,结肠充血水肿 ,在肛口向上
8 cm 处有较大的溃疡性病灶 ,病灶处结肠壁增厚 ,
肠黏膜表面发生溃疡糜烂成糊状 ,结肠明显变短 ,结
肠质量显著增加。铁苋菜水提取液中 、高剂量及
S PSA给药组可以改善结肠充血水肿等炎性症状 ,
减少溃疡面积 ,促进溃疡形成 ,减轻结肠质量 ,具体
结果见表 2。
表 2 铁苋菜水提取液对 TNBS大鼠
结肠组织损伤 、结肠湿重及MPO酶的影响
Tab 2 Effects of Acapha decoction on macroscopic
damage score, wet weight of colon and activity of
MPO in rats with TNBS-induced colitis
( x±s , n=10)
Group
Macroscopic
dam age score
Colon w et w eigh t(mg /100 g ) MPO(z B /U g - 1)
Normal 0±0 0. 54±0. 05 0. 15±0. 21
Model 3. 84±1. 21* 1. 03±0. 22* 14. 58±5. 28**
TXC1 3. 17±1. 10 1. 00±0. 29 12. 83±6. 58
TXC2 2. 56±0. 77△ 0. 82±0. 20△ 5. 58±3. 06△△
TXC3 2. 09±0. 68△ 0. 81±0. 17△ 4. 09±2. 80△△
TXCp 2. 23±0. 85△ 0. 80±0. 34△ 5. 71±3. 02△△
SPSA 2. 12±0. 78△ 0. 76±0. 25△ 7. 89±4. 75△
　*P<0. 05 , **P<0. 01 vs n ormal group;△P<0. 05 , △△P<
0. 01 vs model group
2. 4　铁苋菜水提取液对 TNBS 模型大鼠结肠组织
中的 MPO酶活性的影响 TNBS 造模后的大鼠结
肠组织 MPO 酶的活力比正常大鼠显著升高(P<
0. 01),铁苋菜水提取液高 、中剂量及中剂量预防给
药可以显著降低结肠组织中 MPO 的活力(P<
0. 01),说明铁苋菜水提取液具有一定的抗炎作用。
铁苋菜水提取液中剂量给药(6. 5 g /kg)与治疗对照
药(SPSA)相比 ,没有显著性差异 。与模型组相比 ,
铁苋菜水提取液低剂量(2. 5 g /kg)给药对结肠组织
中 MPO 活力的影响不显著 ,结果见表 2。
2. 5　铁苋菜水提取液对 TNBS 诱导的结肠炎大鼠
结肠组织病理学影响 由组织病理切片(图 2A)可
以看出 ,正常大鼠结肠组织结构清晰 ,黏膜完整 ,固
有层内肠腺丰富 ,排列紧密;TNBS 造模后的大鼠
结肠黏膜坏死脱落 ,溃疡形成 ,大量的中性粒细胞 、
淋巴细胞浸润 ,残余腺体杯状细胞消失 ,纤维组织细
胞增生 ,间质水肿明显 ,见图 2B 。铁苋菜水提取液
中剂量给药治疗后 ,大鼠结肠黏膜增生活跃 ,表面黏
膜基本恢复 ,溃疡愈合 ,但间质仍有轻度水肿和少量
淋巴细胞浸润 ,见图 2C 。
3　讨　论
UC 是世界卫生组织(WHO)定义的世界难治
病之一 。由于目前对于 UC 的发病机制还不清楚 ,
为其治疗造成了困难 ,至今还没有治疗 UC有效的
特异性药物出现 。临床使用的药物如氨基水杨酸
537 第 5期. 邓　莉 ,等.铁苋菜水提取液对三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎的防治作用
图 2　铁苋菜水提取液对 TNBS诱导的结肠炎大鼠结肠组织病理学的影响
Fig 2　Histopathological influence of Acalypha decoction of TNBX-induced ulcerative colitis(H-E)
A:His tological appearance of the normal rat colonic mucosa wi th no his tological modification (×100);B:Histological appearance of the rat co-
l onic mucosa af ter TNBS adminis t rat ion. Mu cosal inju ry w as produced and ch aracteri zed b y necrosis of epithelium , f ocal u lcerat ion of the muco-
s a and dif fused inf ilt ration of n eut rophil s and ly mphocytes(×200);C:H istological appearance of model rat colonic mu cosa af ter t reatmen t wi th
Acalypha decoct ion. Acalypha decoct ion redu ced the morph ological alterat ion associated wi th TNBS administ ration and accelerated the mu cosa
healing(×100)
类 、皮质类固醇类和免疫抑制剂等多数只局限于缓
解症状 ,并且由于具有强烈的不良反应而使患者不
能耐受[ 6] 。研究治疗 UC的高效低毒的天然药物替
代品成为患者和药物工作者的期望 。动物模型的应
用对于深入研究和筛选抗 UC 的药物具有重要作
用。TNBS是一种半抗原 ,其诱导产生的大鼠模型
除发生腹泻 、便血 、体质量减轻等临床症状外 ,还可
以诱发大鼠肠道炎症 ,肠黏膜发生溃疡 、水肿 、糜烂 、
大量的炎性细胞浸润等组织病理学改变 ,类似于人
类的 UC ,由于制备简单省时而被广泛地应用于抗
UC药物的药效学考察。MPO 是在中性粒细胞中
含量较高的一种酶 ,其含量的增高可以反映中性粒
细胞在某一组织中的增高 ,间接反映炎症在组织中
的存在。因此 , MPO的水平可用来衡量组织炎症的
程度[ 7] ,成为评价 UC肠道炎性细胞浸润的指标 ,通
过测定 MPO酶的水平 ,可以间接的反映肠道炎症
反应的程度。铁苋菜水提取液中 、高剂量给药以及
中剂量预防给药可以明显改善 TNBS 造模导致的
大鼠腹泻 、便血及体质量减轻等症状 ,可以降低 UC
模型大鼠的肠道炎症指标 MPO 酶的活力 ,减少溃
疡的形成和炎性细胞的浸润 ,说明铁苋菜水提取液
具有一定的止泻 、抗炎和减轻肠黏膜损伤的作用 。
铁苋菜化学研究认为其含有没食子酸 、 牛儿素和
咖啡苹果酸等化学成分 ,它们分别具有抗菌消炎 、止
泻 、抑制白三烯的合成及肥大细胞脱颗粒等药理作
用[ 8] ,同时铁苋菜含有大量的鞣质 ,对肠黏膜具有收
敛 、止血 、促进溃疡愈合等作用。铁苋菜对 TNBS
模型大鼠的治疗作用是通过多个环节发生作用 ,但
是具体的作用机制还有待于进一步的研究 。
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[ 收稿日期] 　2004-09-07　　 [ 修回日期] 　2005-01-24
[ 本文编辑] 　曹　静
538 第二军医大学学报　2005年 5月 ,第 26卷