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五指毛桃对大黄型脾虚模型小鼠补益作用研究



全 文 :新中医 2013年 9月第 45卷第 9期
JOURNAL OF NEW CHINESE MEDICINE Setember 2013 Vol.45 No.9
[收稿日期] 2013-04-23
[作者简介]罗骞(1983-),女,硕士,中药师,主要从事医院药学工作。
五指毛桃为华南地区习用的中药材,别名五爪龙、五指
榕、土北芪等,以桑科榕属植物粗叶榕的根入药,《广东省中
药材标准》记载五指毛桃味甘、微温,有益气健脾、祛痰化
湿、舒筋活络的功能。用于治疗肺虚痰喘、脾胃气虚、肢倦无
力、食少腹胀、水肿、带下、风湿痹痛、腰腿痛等症[1]。此外
五指毛桃还可以作为食用,其根煲汤香味浓厚,在民间有广泛
的应用,其应用历史悠久,保健作用广为认可。本研究通过对
大黄型脾虚模型小鼠的实验研究来探讨五指毛桃补脾益气方面
的药理作用,为临床应用提供参考。
1 材料
1.1 药物与试剂 五指毛桃药材(产地为广东省河源市,由广
州致信公司中药饮片厂提供,批号为 070402,由广州中医药
大学专家鉴定为桑科榕属植物粗叶榕的根),五指毛桃水煎液
[广州中医药大学第一附属医院药物制剂室提供,批号:
070523,规格:150.0g 生药 /100mL。按临床成人日用量
50g 生药(0.83g/kg 体重),实验设高、中、低 3 个剂量组,
按体表面积折算为临床日用量的 4、2、1个等效剂量]。生大
黄(广州市药材公司中药饮片厂生产,生大黄水煎液(取生大
黄加 7倍水浸泡 0.5h后,煮沸 25min,滤过,药渣再加 5倍
水煮沸 15min,合并滤液,浓缩至 100%备用)。心得安(天津
利生制药股份有限公司,批号:20060204,规格:每片
10mg)。
1.2 动物 NIH小鼠(SPF级),210只,雌雄各半,由广州中
医药大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(粤)2007- 01。
1.3 仪器 ANGPING JA1023电子天平(上海天平仪器厂)。
2 方法
2.1 造模方法 大黄型脾虚造模法 [2](苦寒泻下法):取体重
18~22g NIH小鼠,每只以 1mL 100%大黄水浸煎液灌胃,
每天 1次,连续 8天造模,造模期间可见动物出现纳呆、消
瘦、体重下降、泄泻、四肢无力、体温偏低等脾虚证症状。
2.2 对模型小鼠耐缺氧及免疫器官重量的影响 选用体重
为 18~22g 的 NIH 小鼠 90 只,随机分为 6 组,分别为空
白对照组、模型对照组,五指毛桃高、中、低剂量组,心
得安组。给药方法为灌胃给药,给药时间为 7 天,每天灌
胃 1次,末次给药后 30min,按常压耐缺氧实验法 [2],将各
组小鼠逐一装入统一直径、长度,装有钠石灰 (7g)的玻璃
管中,加盖密封,瓶盖周围涂以凡士林,以保证密封。观察
记录各鼠缺氧存活时间。然后将死亡小鼠,按免疫器官重量
法[2],剖开小鼠腹部及胸部,小心剪取胸腺和脾脏,用电子
天平称重。
2.3 对模型小鼠抗寒、耐疲劳的影响 选用 18~22g NIH小
鼠 55只,随机分为 5组,分别为空白对照组、模型对照组,
五指毛桃高、中、低剂量组,给药方法为灌胃给药,造模成功
后小鼠禁食 12h后给药,给药时间为 7天,每天灌胃 1次,
末次给药后 1h,按小鼠游泳实验法[2],测试小鼠在负重(体重
的 10%)的状态下,在低温(10℃)冰水中的游泳时间,以观察
药物对脾虚证模型小鼠抗应激能力的影响,以自落水开始至鼻
孔沉下水面所需时间为游泳时间。
2.4 对脾虚证小鼠体重的影响 选用 18~20g NIH小鼠 65
只,其中 13只作为正常对照组,另 52只按大黄型脾虚造模
五指毛桃对大黄型脾虚模型小鼠补益作用研究
罗骞,苏芬丽,王姿媛,罗丹冬
广州中医药大学第一附属医院,广东 广州 510405
[摘要]目的:研究五指毛桃水煎液对大黄型脾虚模型小鼠补益作用的药理作用。方法:采用大黄复制脾虚模型小鼠,设五指
毛桃高剂量组(26.67g/kg)、五指毛桃中剂量组(13.34g/kg)、五指毛桃低剂量组(6.67g/kg) 分别每天灌胃,给药 7天。以小鼠的
一般体征变化、体重增长、脾脏重量和胸腺重量、耐缺氧、抗寒、耐疲劳等为指标,观察五指毛桃高、中、低剂量对大黄型脾虚
模型小鼠的影响。结果:与模型对照组比较,五指毛桃高、中剂量可以延长大黄型脾虚模型小鼠在常压缺氧下的存活时间(P <
0.01,P < 0.05);高剂量组小鼠的胸腺重量增加(P < 0.05);高剂量组小鼠在低温状态下的游泳时间延长(P < 0.05);高、中、
低剂量组小鼠的体重增加(P < 0.01)。结论:五指毛桃水煎液对大黄型脾虚模型小鼠的虚证症状有一定的改善作用。
[关键词]五指毛桃;大黄型脾虚模型;补益作用
[中图分类号] R285.5;R- 332 [文献标识码] A [文章编号] 0256- 7415(2013) 09- 0152- 03
152· ·
DOI:10.13457/j.cnki.jncm.2013.09.078
新中医 2013年 9月第 45卷第 9期
JOURNAL OF NEW CHINESE MEDICINE Setember 2013 Vol.45 No.9
法实验,造模的第 1天,即将脾虚小鼠随机分为 4组,分别
为模型对照组与五指毛桃高、中、低剂量组,按体重增长实验
法[2]称量体重后,灌胃给药,每天 1次,连续 7天,正常对照
组与模型对照组灌服等量的蒸馏水,末次给药后 1h,称量体
重,计算体重增长或降低百分数。
体重增长或降低(%)=给药后体重 - 给药前体重
给药前体重
×100%
2.5 统计学方法 运用 SPSS11.5统计软件进行分析,结果
以(x±s)表示,采用 t检验。
3 结果
3.1 各组小鼠常压耐缺氧存活时间的比较 见表 1。模型对
照组小鼠缺氧存活时间少于正常对照组(P < 0.05)。与模型对
照组比较,心得安组和五指毛桃高、中剂量组小鼠的常压耐缺
氧存活时间均延长(P < 0.01,P < 0.05),低剂量组的耐缺氧
存活时间差异无显著性意义(P > 0.05)。
表 1 各组小鼠常压耐缺氧存活时间的比较(x±s) h
与模型对照组比较,①P < 0.05,②P < 0.01;与正常对照
组比较,③P < 0.05
3.2 各组小鼠免疫器官重量的比较 见表 2。与模型对照组
比较,五指毛桃高剂量组模型小鼠胸腺重量增加(P < 0.05),
其余各组模型小鼠胸腺和脾脏重量均回升,但无统计学意义。
表2 各组小鼠免疫器官重量的比较(x±s) g
与模型对照组比较,①P < 0.05,②P < 0.01
3.3 各组小鼠游泳时间的比较 见表 3。高剂量的五指毛桃
可显著延长脾虚证模型小鼠在低温状态下的游泳时间 (P <
0.05),提示五指毛桃对模型小鼠有抗寒抗疲劳作用。
3.4 各组小鼠给药前后体重的比较 见表 4。五指毛桃高、
中、低 3个剂量组与模型对照组比较,模型小鼠体重均增加(P
< 0.01)。表明五指毛桃对大黄型脾虚小鼠体重有一定的增长
作用。
4 讨论
五指毛桃,民间用作药物和保健品历史悠久,具有益气补
虚、行气解郁、壮筋活络、健脾化湿、止咳化痰等功效,主要
用于肝炎、慢性支气管炎、食欲不振等[3]。对五指毛桃化学成
分的研究表明,主要含有丰富的多糖、生物碱、香豆素等生物
活性物质[4~5]。分离鉴定出的补骨脂素为呋喃香豆素类化合物,
具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等作用,并
对红细胞系统的造血有一定的促进作用[6]。有文献报道证明补
骨脂素为五指毛桃的主要活性成分之一[7],是否为补益作用的
活性成分有待进一步研究。
脾胃虚弱临床表现为病程较长,平素食欲不振、面色萎
黄、神疲倦怠、形体瘦弱等方面。而应激是机体在外界环境剧
烈刺激下出现的综合应答状态,包括精神、神经、内分泌、免
疫等各方面的反应 [8]。疲劳、缺氧、缺血是常见的 3 种应激
原,通常作为反映药物抗应激能力的重要指标[9]。体重可作为
药物促进生长发育的一个指标,也常作为从总体上评估药物补
益作用的综合指标。实验结果表明,五指毛桃可使处于应激状
态的脾虚小鼠耗氧量降低,使机体体力增强,对心脑等重要脏
器具有保护作用,可使脾虚小鼠免疫器官及体重有一定的增
长。存在的问题是对于游泳时间和免疫器官的重量的影响,
中、低剂量组显示无效,对于耐缺氧低剂量组无效,分析原因
一是用药时间较短,脾虚在临床中往往表现为一种慢性疾病,
需要长时间的治疗;二是每天给药次数不够,按照临床常规使
用为每天 3次。对于本研究可以继续在这两方面进行更深入
研究,以为五指毛桃的益气健脾作用提供理论依据。
[参考文献]
[1] 广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准:第
组 别
正常对照组
模型对照组
五指毛桃高剂量组
五指毛桃中剂量组
五指毛桃低剂量组
心得安组
n
15
15
15
15
15
15
剂量(g/kg)
-
-
26.67
13.34
6.67
0.2
存活时间
511.00±163.03①
451.44±73.00③
535.75±69.14②
509.94±72.33①
470.31±65.67
644.56±157.06②
组 别
正常对照组
模型对照组
五指毛桃高剂量组
五指毛桃中剂量组
五指毛桃低剂量组
心得安组
n
15
15
15
15
15
15
剂量(g/kg)
-
-
26.67
13.34
6.67
0.2
胸腺
0.040±0.009②
0.029±0.008
0.035±0.006①
0.030± .009
0.031±0.012
0.023±0.006
脾脏
0.049±0.019①
0.037±0.015
0.045±0.012
0.042±0.011
0.046±0.017
0.030±0.007
表3 各组小鼠游泳时间的比较(x±s) s
与模型对照组比较,①P < 0.05
表4 各组小鼠给药前后体重的比较(x±s)
与模型对照组比较,①P < 0.01
组 别
正常对照组
模型对照组
五指毛桃高剂量组
五指毛桃中剂量组
五指毛桃低剂量组
n
13
13
13
13
13
剂量(g/kg)
等量蒸馏水
等量蒸馏水
26.67
13.34
6.67
给药前体重(g)
20.00±1.33
19.36±1.12
19.55±1.13
18.80±0.79
18.89±0.93
给药后体重(g)
24.00±1.73
17.15±0.90
21.31±1.38
20.08±1.38
19.31±1.32
差值(g)
4.15±1.72
2.54±1.20
1.62±1.19①
1.23±1.09①
0.08±1.26①
体重变化(%)
20.00
11.42
9.00
6.81
2.22
组 别
正常对照组
模型对照组
五指毛桃高剂量组
五指毛桃中剂量组
五指毛桃低剂量组
n
11
11
11
11
11
剂量(g/kg)
-
-
26.67
13.34
6.67
游泳时间
93.00±27.64①
71.82±11.71
82.91± .77①
80.18±11.04
77.73±12.94
153· ·
新中医 2013年 9月第 45卷第 9期
JOURNAL OF NEW CHINESE MEDICINE Setember 2013 Vol.45 No.9
一册[M ].广州:广东科技出版社,2004:35.
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(编辑:马力)
[收稿日期] 2013-04-26
[基金项目]山东省自然科学基金项目(编号:ZR2010HL061)
[作者简介]卜凡儒(1965-),男,主管技师,研究方向:肿瘤 CT检查扫描技术。
[通讯作者]蒋树龙,Email:sl_jiang@aliyun.com。
化痰祛瘀方含药血清对肝癌细胞血管内皮生长因子的调控作用研究
卜凡儒,张超,蒋树龙
济宁市第一人民医院,山东 济宁 272111
[摘要]目的:观察化痰祛瘀方含药血清对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF) 表达的影响。方法:健康 SD大鼠 15只,随
机分为 3组,大剂量组:化痰祛瘀方大剂量含药血清组,灌服化痰祛瘀方,给药剂量 24g/kg(相当于临床等效剂量 2倍);小剂量
组:化痰祛瘀方小剂量含药血清组,灌服化痰祛瘀方,给药剂量 12g/kg;正常血清组:灌服相应体积的生理盐水,共计 5mL。通
过 MTT法检测化痰祛瘀方含药血清对肝癌细胞株增殖的抑制作用;通过Western bolt技术、免疫荧光技术观察 VEGF蛋白表达的
变化。结果:化痰祛瘀方含药血清能明显抑制人肝癌细胞株HCCLM3的增殖活力,不同剂量时(0g/kg、12g/kg、24g/kg) 抑制率分
别为 1.60%、36.64%、63.92%,差异均有显著性意义(P < 0.01);化痰祛瘀方含药血清能使肝癌细胞内的 VEGF蛋白表达量下降,
且随着化痰祛瘀方含药血清剂量增高(12g/kg、24g/kg),VEGF的蛋白表达呈下降趋势;免疫荧光试验显示,大剂量化痰祛瘀含药血
清(24g/kg) 可以完全抑制 VEGF蛋白的表达。结论:化痰祛瘀方含药血清通过抑制 VEGF的表达从而抑制肝癌细胞的生长。
[关键词]化痰祛瘀方;肝癌;血管内皮生长因子(VEGF)
[中图分类号] R285.5;R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 0256- 7415(2013) 09- 0154- 03
Regulation of Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Hepatoma Carcinoma
Cells with Serum Containing Phlegm-resolving and Stasis-removing Herbal Medicine
BU Fanru,ZHANG Chao,JIANG Shulong
Abstract:Objective:To study the effect of serum containing phlegm- resolving and stasis- removing herbal medicine on
the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in hepatoma carcinoma cells. Methods:Fifteen health SD rats
were equally randomized into 3 groups,blank control group (given 5 mL of normal saline),and large- and small- dose herbal
medicine groups (in the dosages of 24,12g/kg,respectively). Hepatoma carcinoma cell line HCCLM3 was co- cultured with
serum from rats of the corresponding groups,and then the proliferation of hepatoma carcinoma cells was detected by MTT,
and the VEGF protein expression was examined by Western blot and immunofluorescence technique. Results:Serum con-
taining phlegm- resolving and stasis- removing herbal medicine significantly inhibited the proliferation activity of HCCLM3,and
the inhibitive rate of serum containing 0g/kg,12g/kg,24g/kg of herbal medicine was 1.60%,36.64%,63.92%,respec-
154· ·