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王瓜根有效活性成份对鼻咽癌细胞的杀伤作用
梁荣能 吴伯 良 莫志贤
香港浸会大学生物学系 (香港 九龙窝打老道 2 24号 )
提要 本实验通过对王瓜根 的提取 、 分 离和鉴定 , 证实王瓜根含有葫芦素结晶
B 和 E 。 通过观察王瓜根提取物在体外对人淋 巴细胞及弄咽癌细胞的作用 , 发现用王
瓜根分离的葫芦素 B , E 20 陀 /m1 , 对癌细胞的杀伤率为 82 . 6% , 浓度提 高至 80 阳 /
ml 时 , 其杀伤率达 94 . 1% , 而对正常人淋 巴细施转化率的影嗬则分别为 90 . 6 %及
89
.
5%
, 表明王瓜根葫芦素 B , E 对鼻咽癌细胞具有较强的杀伤作用 , 是王瓜根杭癌
的有效活性成分 , 它同时能促进正 常淋 巴细 胞的转化功能 , 因而有较好的临床应用
价值 。 王 瓜根原汁对弄咽癌细胞的杀伤 力较葫芦素 B , E 强 , 但对淋巴 细胞也有明 显
的杀伤作用 。 加热后 的王瓜根原汁杀癌细胞作用较原汁低 , 表明王瓜根毒蛋白也是
一种才元癌有效成份 。
关键词 王瓜根 ; 葫芦素 B 、 E ; 淋巴细胞 ; 鼻咽癌细胞
王瓜 ( T r i e h o s a n t址 5 e u e u m e r o id e s M a x im ) 为葫芦
科植物 , 王瓜根具有泻热生津 , 利大小便 , 破血消
疲的功效 。 王瓜根的抗肿瘤作用最早见于 《名医别
录 》 , 书中载有王瓜根 “ … 主治内疽消渴 , 邪气热结 ,
鼠痰痈肿等证… ” 。 近代研究表明葫芦素是葫芦科植
物的抗癌活性成份 , 国内应用葫芦素治疗中晚期癌
症收到较好的临床效果 l[J 。 我们从王瓜根中提取出
多种葫芦素成份 。 本实验利用人的淋巴细胞及鼻咽
癌细胞观察王瓜根葫芦素 B 、 E 对淋巴细胞和癌细
胞的作用 , 并与王瓜根原汁及加热王瓜根原汁作一
比较 , 以探讨王瓜根活性成份的抗癌作用 , 为王瓜
根抗癌有效成份的开发利用提供药理的依据 。
1 材料与方法
L l 实验材料
王瓜根 : 秋冬采集 . 一 20 ` e 低温保存备用 。
鼻咽癌细胞 c N E 一 2 细胞株 : 由暨南大学医学院
病理研究室提供 。
淋巴细胞 : 取健康自愿者外周血 , 分离淋巴细
胞备用 。
王瓜根原汁的制备 : 取 30 克新鲜的王瓜根去
皮 , 捣碎 , 压汁 , 离心 3 0 0 0 r p m x 3 m in . 取上清液
1 0 m l 备用 。
加热王瓜根原汁的制备 : 取王瓜根原汁上清
s m l
. 放于加塞离心管内 , 在 10 ℃恒温水中加热 2
小时 , 离心 30 0 rP m X I Om in , 去变性的毒蛋白 , 取
上清备用 。
淋巴细胞培养基配方 : 75 %的 R P M I一 1 640 , 20 %
的小牛血清 , 4%的正常人外周血 , 0 . 002 %的肝素 ,
加 S t r e p t o m y e i n 1 0 0 睁g / m l , P H A 1 . 6 7 阵g /m l 。
鼻咽 癌细胞培养基配方 : 80 %的 RP M I一 16 40 ,
2 0% 的小牛血清 , 加入 s t r e p t o m y e i n 1 0 0 0 9 /m l 。
L Z 实验方法
L .2 1 王瓜根葫芦素的提取 、 分离和鉴定 将低温
保存的王瓜根放在恒温 45 ℃烘箱烘干 , 用搅碎机将
其破碎成干粉 。 按法2j[ 提取及分离王瓜根的葫芦素 。
采用硅胶 G 2F 54 薄层层析及 75 1紫外分光光度计
进行光谱扫描 , 根据葫芦素族的紫外光谱图和薄层
层析图谱以及 fR 值确定分离到的葫芦素中的 B 和
E 成分 。
L .2 2 淋巴细胞培养实验 将人淋巴细胞于培养
基中培养 24 小时后 , 分别加入一定量的葫芦素 B 、
E
、 王瓜根原汁 、 加热王瓜根原汁或生理盐水 (作空
白对照 ) , 加药后继续培养 68 小时 , 滴人 1 滴秋水
仙素 . 再培养 4 小时 , 离心 20 0 r p m x 3 m in , 去上清 .
收集血球 , 接着加入低渗液 , 放置 20 分钟后 . 加入
固定液终止反应 , 离心 3 0 0 0 r p m 只 1 0 m in , 去上清 .
再加入适量固定液 , 摇匀 , 置 37 ` C 恒温箱中固定 15
DOI : 10. 13412 /j . cnki . zyyl . 1995. 04. 007
中 药 药 理 与 临 床 1 9 9 5 ( 4)
!一
.
;11
;
分钟 , 离心 3 0 0 0 印m x 1 0 m in , 去上清 , 冷冻滴片 ,
iG
e
ms
a 染色 , 光镜观察 , 计算转化率 。
1
.
2
.
3 鼻咽癌细胞培养实验 将生长旺盛的鼻咽
癌细胞加入适量的胰酶消化液 , 消化 2一 3分钟 , 去
胰酶 , 加入无血清的 1 6 4 0 培养液洗两次 , 然后加入
无血清 16 4。培养液打匀细胞 , 等量分装各瓶 , 使各
瓶的细胞数相等 , 同时配成每个给药组及对照组各
12 瓶 , 培养 2 4 小时后 , 加入不同浓度的药物继续培
养 24 小时。 各组取出 2瓶 , 摇匀后置光镜下计数 ,
以后依次在 36 、 48 、 60 、 和 72 小时各组取两瓶细胞
计数 , 计算各时期细胞增长率和杀伤率 。
杀伤率一 (对照组细胞数 / ml 一给药组细胞数 /
m l) 干对照组细胞数 / m l
2 结果
.2 1 药物对淋巴细胞的作用
葫芦素 B , E 低剂量组的淋巴细胞转化率明显
高于对照组 , P < 0 . 05 , 见表 1 。 高剂量组与对照组
则无显著差异 , P > 0 . 05 。 两剂量组之间无明显差
异 。 加入王瓜根原汁 0 . 05 ml 及 0 . Z ml 于人淋巴细胞
中 , 2 4 小时后淋巴细胞开始老化 , 72 小时观察发现
全部细胞死亡 。 加热后的王瓜根原汁 , 虽取相同剂
量 , 但对淋巴细胞未发现有杀伤作用 , 淋巴细胞转
化率分别为 83 . 6%及 87 . 4% , 与对照组无显著差
异 , 0 . 2 m l 剂量组与葫芦素两剂量组亦无显著差异
性 , 而 0 . 05 ml 组则有 P < 0 . 05 . 差异显著 。
表 1 王瓜根提取物对淋巴细胞
和鼻咽癌细胞的影响
亡 , 杀伤率为 。 。 葫芦素低 、 高剂量组对鼻咽癌细胞
的杀伤率分别为 82 . 8%和 94 . 1% 。 王瓜根原汁两剂
量组对癌细胞的杀伤率均达 1 0 % , 全部细胞均死
亡 , 而加热后的王瓜根原汁两剂量的癌细胞杀伤率
分别是 82 . 7 %和 91 . 5% , 高 、 低剂量组之间有显著
差异 . P < 0 . 0 5 。
08 0
064
八乙
一 - 一 一 T- 一广
2 0 30 4 0 5 0
{ 1 一
6 0 7 0 8 0
C e l l e u lt u r e t一m e (h )
F ig u r e 1 C yt o t o x ie E f f e e t o f C u e u r b i t a e i n o n N P C
C e l lS
E x t r a e 招 f r o m T . e u e u m e r o i d e s 0 . 0 5 m l
E x t r a e t s f r o m T
.
e u e u m e t o id e s 0
.
2 0 m l
C u e u r b i t a e ih B , E 8 0 件g / m l
C u e u r b i t a e i n B , E 2 0 卜g / m l
H e a t 一 t t e a t e d e x t r a C t s f t o m T
.
e u e u m
e r o i d的
H比 t 一 t r e a t e d e x t r a e t , f t o m T . e u e u m e t o id e s
0
.
0 5m l
0
.
2 0m l
▲甲O…令
组 别 淋巴细胞转化率 癌细胞杀伤率
(% ) (% )
空 白对照 组 85 . 4士 4 . 8
葫芦素 B , E 2 0、 g / m l 9 0 . 6士 5 . 2 8 2 . 6士 9 . 5
葫芦素 B , E 8 0陀 / m 一 8 9 . 5士 6 . 4 9 4 . 1土 9 . 5△
王瓜根原汁 0 . 0 5 m l 一 1 0 0
王瓜根原汁 0 . Z m - 一 1 0 0
加热原汁 0 . 0 5 m 一 8 3 . 6士 7 . 8 8 2 . 7士 9 . 0
加热原汁 0 . Z m l 8 7 . 4生 6 . 1 9 1 . 5士 8 . 5△
培养 7 2 小时
n ~ 10
. 又土 S D , * P < 0 . 05 . 与对照组 比较 ; △ P < 0 . 05 .
与低剂量组 比较
2
.
2 药物对鼻咽癌细胞的作用
表 1 及图 1 显示药物对鼻咽癌细胞在培养基生
长的影响 , 给生理盐水的空白对照组未见癌细胞死
3 讨论
用王瓜根治疗鼻咽癌的方法早已流传中国民
间 。 目前临床也证明了葫芦素 B , E 的抗肿瘤作用川 。
据报道 . 对于鼻咽癌细胞 , 葫芦素 B 的细胞毒活性
是 。 . 0 0 5陀 / m l , 而葫 芦 素 E 的细 胞 毒 活性 是
。 . 0 1滩 / m .l[ 〕。 葫芦素主要存在葫芦科植物的果实
中 . 如丝瓜 、 瓢瓜 、 甜瓜 、 喷瓜等5[] 。 本实验从王瓜
根部提取分离出葫芦素成分 , 证实了王瓜根抗癌作
用的物质基础 。 我们的结果表明 , 王瓜根葫芦素 B ,
E 对鼻咽癌细胞具有显著的杀伤作用 , 用 2 0 0 9 /ml
可有 82 . 6士 9 . 83 %的杀伤率 . 剂量加大至 8 0件g / ml .
杀伤率可达 94 . 1 士 9 . 47 写 . 而对正常的人淋巴细
胞 , 葫芦素 B , E 则无杀伤作用 。 实验还发现 , 王瓜
根原汁对鼻咽癌细胞具有 1 0 写的杀伤率 , 表明葫
芦素是王瓜根的有效抗癌成分 , 但除此之外 , 还存
中 药 药 理 与 临 床 1 9 9 5钊 )
在其他的抗癌成分 。
王瓜根别名土花粉 , 在 《本草经蔬 》 中有记载 :
“ 王瓜根 , … 与括楼性同 , … 主治诸证皆与括楼相似
… ” 。 古代医书已证明王瓜根与天花粉有相似的作
用 。 现代研究发现 , 王瓜根含有类似天花粉的毒蛋
白 6[ 〕 , 本实验表明 , 加热后的王瓜根原汁 , 去掉植物
蛋白成分后 , 其抗癌活性有所下降 , 表明王瓜根的
毒蛋白也是其抗癌活性成分之一 , 其作用可能与天
花粉蛋白相似 。 本研究还发现 , 王瓜根原汁虽然具
有强大的杀伤癌细胞的能力 , 但同时对于正常的淋
巴细胞也的明显的杀伤作用 。 故提示对于鼻咽癌细
胞 , 使用分离出的葫芦素 B 和 E 疗效较好 , 即可避
免王瓜根毒蛋白对正常淋巴细胞的毒性作用 , 又可
促进淋巴细胞转化 , 提高机体免疫力 , 达到对肿瘤
的防治效果 。
(本研究经费由香港浸会大学科研基金 F R G /
9 1
一
92 / 11
一
08 资助 )
参 考 文 献
苗和惴 · 葫芦素的研究概况 . 中成药研究 , 1 9 7 8 ; ( 1 )
:
3 7
湖南 医药工业研究所 . 甜瓜蒂抗肝炎有效成分的研究 ·
中草药通讯 , 1 9 7。 , ( 3 ) : l
刘昌孝 , 张振伦 , 叶桂珍等 . 葫芦素 B , E的药理研究 .
中草药 , 19 8 5 ; 1 6 ( 1 0) : 2 2
常敏毅 · 抗癌本草 . 长沙 : 湖南科学出版社 , 1 9 8 7 : 56
VV a t t JM
.
M e d i e in a l a n d P o i s o n o u s P l a n st o f S o u t h e r n a n d
E as t e r n fA
r ica ( Z
n d )
.
1 9 6 2
:
3 5 9
吴伯良 , 王漩 , 杨文等 . 王瓜根抗痛糖蛋白的生理生化
特征及其对肺腺癌细胞杀伤作用的初步研究 . 暨南大
学学报 , 1 9 9 0 ; 1 1 ( i ) : 79
S t u d i e s o n t h e A n t ie a n e e r E f f e e t o f A e 吐i v e C o m P o u n d s f r o m T r i c h o s a n t h e s C u e u m e r o id e s
L i a n g R o n g n e n g
,
W
u B o il a n s
,
( D e p a r tm e n t o f B i o l o g y
,
H o n g K o n g B a p t i s t U由 v e r s i t y , 2 2 4
M o Z h i x i a n
W
a t e r l o o R o a d
,
K o w l o o n
,
H o n g K o n g )
T h e r o o t
一 t u b e r s o f T r i e h o s a n t h e s e u e u m e r o id e s M a x im ha
v e be e n u s e d i n Ch in e s e m e d ie in e f o r o v e r a t h o u s a n d
ye a r s
.
C l i n ie a l e v id e cn
e s d e m o n s t r a t e d t h a t t h i s P la n t m a y be
u s e f u l i n t r e a t i n g P a t i e n tS s u f f e r ign f
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a l ig n a n t d七-
已a s e s . B y e h e m i e a l P u r i f i e a t i o n a n d id e n t i f i e a t i o n , o ne P
r i n e i P拓 a e t i v e e o m P o n e n t in T . e u e u m e r o i d e s w h i e h P o s e s s e s
s t r o n g a n t i一 ca n e e r a e t i v i t i e s ha
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.
I t b e l o n g s t o a f a m i ly o f e o m Po u n d s e o l l e e
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.
R e s u l t s s h o w e d tha t
c u c u r b i t a c i n f r o m T
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6写. If the e o n e e n t r a t i o n w a s in e r e s e d t o 8 0 以g / m l , th e e y t o t o x i e r a t e w a s 9 4 . 1 % . w h il e s im i l a r d o s a g e o f
Pu r i f i e d e o m P o u n d s d id n o t , h o w a n y e f f e c t o n t h e n o r m a l ly m P h
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·
W i t h f
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e t t e r P u r i f i c a t i o n s
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m e d i e in e i n t r e a t i n g c a n c e r P a t i e n t s
·
K e y w o r d s T r i e h o s a n th e s e u e u m e r o id e s ; e u e u r b i t a e in B
,
E ; n a s o p h a r yn g
e a l e a r e in o m a ( N P C )
A e k n o w l e叱 e m e n t : T hi s w o r k w a s f u n d e d b y t h e F a e u l t y R e s e a r e h G r a n t o f th e H o n g K o n g B a P t is t U n iV e r s i t y ·
F R G /9 1
一
9 2八 I 一 0 8
重 要 启 事
第五届全国中药药理学术会议已订于 1 9 9 5 年
n 月 1 1一 15 日在重庆市召开 , 会议征文中有少数
论文作者及通讯处因字迹难于辨识或不详 , 致使信
函无法投递 。 请尚未得到第二轮通知的论文作者尽
快与本刊联系 ( 6 3 0 0 6 5 重庆市黄确娅四川省中药
研究所 《中药药理与临床 》 编辑部 ) 。
大会筹备组