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高效液相色谱法测定五指毛桃中补骨脂素的含量



全 文 :400 u ,GC-MS传输线温度 240℃,运行时间 35 min。
4  结果与讨论
川芎挥发油的总离子流色谱图见附图。计算机
检索及人工检索各色谱峰相应的质谱图 ,确定它们
的化学结构 ,并用面积归一化法计算它们的相对含
量 ,结果见表 2。已分别鉴定了挥发油中的 28 种
(超临界 CO2 萃取法)和 34 种(水蒸汽蒸馏法)成
分。
超临界 CO2 萃取法提取川芎挥发油收率
(2.63%)比水蒸汽蒸馏法(0.36%)高。
藁本内酯 、二氢藁本内酯在超临界 CO2 萃取的
挥发油中含量为 43.70%和 23.84%,比水蒸汽蒸馏
法的 35.02%和 11.76%大大提高 ,说明超临界 CO2
萃取法对藁本内酯及二氢藁本内酯的提取较完全 、
损失少 。
超临界 CO2 萃取法提取的川芎挥发油中含有
一定量的脂肪酸类成分(约 12%),而水蒸汽蒸馏法
所得成分基本没有脂肪酸类成分 。
参 考 文 献
1  卫生部药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北
京:化学工业出版社 , 2000∶30
2  卫生部药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北
京:化学工业出版社 , 2000∶附录 XD
(2004-05-19收稿)
高效液相色谱法测定五指毛桃中补骨脂素的含量
刘春玲 徐鸿华 许小峰 罗绮珊 彭强林
(广州中医药大学 ,广州 510405)
  摘要 目的:测定五指毛桃中补骨脂素含量。 方法:采用高效液相色谱法 , 色谱柱:Diamonsiltm C18柱 , 波长
245nm , 流动相:甲醇-水(60∶40),流速 1 ml/min。结果:五指毛桃根中补骨脂素在 0.356 ~ 2.848 mg/ ml , 线性关系
良好(r=0.9999),平均回收率为 103.99%, RSD=3.07%(n=5), 方法重现性好(RSD=1.59%, n=8)。 结论:以高
效液相色谱法测定五指毛桃中补骨脂素的含量 , 操作简便 ,专属性好。
关键词 五指毛桃 补骨脂素 HPLC
  五指毛桃为华南地区习用的中药材 ,别名五爪
龙 、南芪 、土北芪等。五指毛桃味辛 、甘 ,性平 ,有健
脾补肺 、利湿舒筋功能 ,用于脾虚浮肿 、食少无力 、肺
痨咳嗽 、盗汗 、风湿痹痛 、肝炎 、产后无乳〔1〕。从五
指毛桃药材中已分离鉴定出补骨脂素 ,研究表明补
骨脂素为呋喃香豆素类化合物 ,具有抗菌 、抗病毒 、
抑制肿瘤 、抗凝 、免疫调节 、激素样作用和影响药物
代谢等作用〔2 、3〕 ,可作为五指毛桃的有效成分 。本
研究应用高效液相法对不同产地和农家类型的五指
毛桃进行了补骨脂素的含量测定。
1  材料
1.1  样品 不同产地的五指毛桃采集于原产地野
生品种 ,其它样品均采自于河源五指毛桃种植基地
(见表 1),样品经广州中医药大学药植鉴定教研室
鉴定为粗叶榕 Ficus hirta Vahl.的根 ,洗净 ,晾干 ,
粉碎后干燥保存待测 。
1.2  仪器 Summit P680A 型高效液相色谱仪 ,
Summit P680A低压四元泵 , PDA-100 ASI100 自动
进样器 ,Summit柱温箱以及“变色龙”色谱工作站。
1.3  试剂 色谱纯甲醇(天津四友生物医学技术
开发公司);超纯水 ,补骨脂素标准品(中国药品生物
制品检定所 ,批号 739-9203)。
 表 1 药材样品一览表
序号 样品来源地 收集时间 序号 样品来源地 收集时间
1 帽峰山 2003.8 7 伪品 2003.8
2 韶关 2003.8 8 河源(细叶型) 2003.8
3 清远 2003.8 9 河源(不裂型) 2003.8
4 从化 2003.8 10 河源(大叶型) 2003.8
5 湛江 2003.8 11 河源(大果型) 2003.8
6 揭阳 2003.8 12 河源(细叶型) 2003.8
2  方法
2.1  色谱条件 色谱柱:DiamonsiltmC18柱 ,5 μm ,
4.6 mm ×250 mm ,柱温 25℃, 996 二级管阵列检测
器 ,波长 245 nm ;流动相:甲醇-水(60∶40),流速 1
ml/min 。
2.2  对照品溶液的制备 精密称取 105℃干燥至
恒重的补骨脂素标准品 1.78 mg ,用 5 ml甲醇配成
浓度为 0.356 mg/ml的溶液。
2.3  样品溶液的制备 精密称取五指毛桃样品粗
粉 1 g(过 20 目筛),加甲醇 10 m l ,超声波提取 30
min ,定容至 10 ml。并用针孔式微孔滤(0.45μm)过
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DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.08.018
滤 ,滤液即为供试品溶液 。
2.4  线性关系考察 用流动相分别将标准品液稀
释成 0.356 mg/ml、0.712 mg/ml 、1.424 mg/ml 、
2.136 mg/ml 、2.848 mg/ml的溶液 ,进样量 1 μl ,每
一浓度进样 2次 , “变色龙”色谱工作站处理数据 ,外
标法测定 ,以峰面积为纵坐标 ,标准浓度为横坐标 ,
进行线性回归 ,得补骨脂素标准品回归方程为 y =
139.26x -4.754 , r =0.9999 , n =5 , 线性范围为
0.356 ~ 2.848 mg/ml。
2.5  精密度试验 取 0.356 μg/μl的补骨脂素标
准品溶液 ,依线性关系的测定条件进样分析 ,每次进
样量 10 μl ,进样 5次 ,用峰面积求算其 RSD ,补骨脂
素的 RSD为 1.05%。
2.6  稳定性试验 在本实验条件下取同一浓度的
对照品溶液 ,每隔 1 h进样一次 ,稳定性试验考察 8
h ,结果表明 8 h内峰面积积分值基本不变 ,其 RSD
为 1.59%(n=8)。
 表 2  五指毛桃样品补骨脂素的含量(mg/g , n=3)
样品 补骨脂素含量 样品 补骨脂素含量
河源 1.4679 揭阳 0.0956
韶关 1.1489 伪品 0.00205
清远 0.4204 大果型 0.0431
从化 0.3652 细叶型 0.9502
帽峰山 0.1614 不裂型 0.0273
湛江 0.2272 大叶型 0.0204
2.7  加样回收率实验 按供试品溶液制备方法处
理同一批样品 5份 ,精密称定 ,精密加入补骨脂素对
照品 ,按供试品溶液制备项下方法制备 ,进样量 9
μl ,按上述色谱柱条件测定 ,测定结果平均加样回收
率为 103.99%,RSD=3.07%(n=5)。
2.8  样品的测定 进样量为 25 μl ,按上述色谱条
件测定 ,各样品按干燥品计算补骨脂素的含量 ,结果
见表 2。
  测定结果显示 ,不同产地五指毛桃中补骨脂素
含量差异很大 ,河源产五指毛桃中的含量最高 ,其次
是韶关 、清远 、从化产地 ,帽峰山 、揭阳 、湛江等地区
的含量较低 ,伪品中的含量小于 0.01mg/g 。不同农
家类型的植株补骨脂素含量具有显著差异 ,裂片越
多 、越细含量越高 ,细叶形的含量最高 。
作者简介:刘春玲 ,1964年出生 ,广州中医药大学中药学院药植
鉴定教研室药用植物学专业讲师 ,广州中医药大学中药学专业博士。
联系电话:36585447(O), 86556562(H), 13544596349(M)
参 考 文 献
1  中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一
部).北京:人民卫生出版社 , 1977∶90
2  吴少华 ,等.补骨脂素体内外抗癌活性实验研究.中国
中药杂志 , 1998 , 23(5)∶303
3  宓穗卿 ,等.补骨脂和补骨内脂对 NADPH-细胞色素 C
还原酶及血清肌酐的影响.中国新药与临床药理 ,
1998 , 9(3)∶147
(2004-02-16收稿)
Content Determination of Psoralen in Root of Ficus hi tra by HPLCMethod
Liu Chunling , Xu Honghua , Xu Xiaofeng , Luo Qisan , Peng Q ianglin
(Guang zhou University o f T raditional Chinese Medicine , Guangzhou 510405)
Abstract Objective:To investig ate the contents of psoralen in Ficus hitra.Methods:High Performance Liquid Chromatography
w as performed on DiamonsiltmC18.The chromatog raphic conditions w ere as follows:methanol-w ater (60∶40) as mobile phase , flow
rate being 1ml/min and detecting waveleng th at 245nm.Results:A good linearity of psoralen was shown in range of 0.356 ~
2.848mg/ml(r=0.9999), the average recovery is 103.99%, RSD=3.07%(n=5).The me thod has good reproducibility , RSD=
1.59%.Conclusion:This method can supply evidence for the quality evaluation of Ficus hitra.
Key words Ficus hirta Vahl;Psoralen;HPLC
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·583·中药材第 27 卷第 8 期 2004 年 8 月