全 文 ：藤梨根为猕猴桃科植物猕猴桃（Actinidia chi-
nensis Planch.）的干燥根，始载于《开宝本草》。中华
本草记载藤梨根含熊果酸（ursolic acid）、齐墩果酸
（oleanolic acid）、琥珀酸（succini acid）、胡萝卜甙 [1]
（daucosterol）、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天门
冬氨酸及 Fe、Cu、Mn、Se 等微量元素。藤梨根的药用
价值高，中医认为其性甘、咸寒、微涩，能清热利尿、
活血消肿、祛风利湿，主要用于治疗肝炎、食道癌、肝
癌、消化不良、腹泻、水肿、风湿性关节痛、带下、疮
疖、淋巴结结核等症[2]。
现代医学认为其具抗突变、抗畸变、抗肿瘤、抗
氧化、护肝及增强免疫的作用[3-5]。藤梨根的研究多
集中于抗肿瘤活性的分析，而关于藤梨根抗病毒活
性部位群的筛选尚未见报道，这大大限制了该味中
药的临床应用。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
旋转蒸发器（RE-5298A）购自上海比朗科学仪
器有限公司，CO2 细胞培养箱为美国 SHEL-LAB公
司生产，酶标仪（ELx-800型）为 Bio-Rad公司生产，
离心机（KA-1000型）为上海安亭科技仪器生产。
藤梨根购自邵东县药材公司，经邵东县药检所
鉴定。HepG2.2.15 细胞购自中南大学细胞培养中
心。G418为 Gibco公司生产，胰蛋白酶（Trypsin）由
天津市灏洋生物制品有限责任公司提供，HBeAg和
文章编号： 1005-8982（2011）04-0404-04
·论著·
藤梨根抗病毒活性部位的初步筛选
欧阳红涛 1，吴晶莹 2，陈玉祥 2
(1 .湖南省脑科医院 药剂科, 湖南 长沙 410007；2.中南大学药学院，湖南 长沙 410013)
摘要：目的 通过体外药效实验筛选藤梨根的抗病毒活性部位，初步确定其活性部位的大致成分，为进一
步开发利用藤梨根奠定基础。方法 通过MTT实验及对 HBsAg和 HBeAg的检测，筛选抗乙肝病毒的活性部
位。结果 乙醇提取部分（A1）、乙酸乙酯提取部分（Y）对 HBeAg和 HBsAg的抑制率 TI>2，提示对两者抑制作
用较强，对试验细胞无明显毒性。结论 根据结果初步认为 A1是藤梨根抗肝炎病毒的活性部位，在体外有较
强抗肝炎病毒活性，对正常细胞的影响较小。
关键词：藤梨根；活性部位；抗病毒作用
中图分类号：R392 文献标识码：A
Preliminary screening of Actinidiae antivral activity fraction
OUYANG Hong-tao1, WU Jing-ying2, CHEN Yu-xiang2
(1.Department of Pharmacy, Hunan Brain Hospital, Changsha, Hunan 410007, P.R.China; 2.School
of Pharmacy, Central South University, Changsha, Hunan 410013, P.R.China)
Abstract:【Objective】To identify anti-HBV active site and chemical composition category of radix of Actinidiae
chinensis （RAC） through pharmacological experiments and to lay the foundations for further study of RAC.
【Method】Detection of HBsAg, HBeAg and cell viability was used to screen anti-HBV active site of RAC.【Re－
sult】The treatment index of A1, Y on HBeAg, HBsAg was greater than 2. It implied the two sites were of highly in－
hibition of HBeAg, HBsAg. Contents of A1 accounted for 60.28%. The two sites above are chemically determined as
triterpenoid saponin by foam tests and liebermann-Burchard reaction. 【Conclusion】A1 was the anti-HBV site of
Radix of Actinidine chinensis and it affects little to normal cells.
Key words: Radix of Actinidine chinensis; active site; antiviral effect
收稿日期：2010-08-10
第 21 卷第 4期 中国现代医学杂志 Vol. 21 No.4
2011 年 2 月 China Journal of Modern Medicine Feb. 2010
404· ·
第 4期 王秀荣：瑞格列奈联合甘精胰岛素在老年 2型糖尿病治疗中的效果与安全性分析
HBsAg 酶联检测试剂盒购自上海荣盛生物技术有
限公司，泛昔洛韦片（0.125g/片）为北京嘉林药业股
份有限公司生产。
1.2 实验方法
1.2.1 藤梨根的提取、分离研究 精密称取藤梨根干
粉 30 g，分别用 300 mL和 240 mL的石油醚加热回
流提取。合并两次提取液。浓缩回收石油醚得浸膏
（即石油醚提取部分）。将挥干溶剂后的药渣按上法
依次用乙酸乙酯、乙醇和水提取，分别得乙酸乙酯、
乙醇和水提取部分。
根据相似相溶原理，石油醚提取物极性低，且干
膏得率仅 0.175%，而据文献 [6-10]报道藤梨根有效成
分的极性较大，与之相差较大，故暂不作分离。称取
乙酸乙酯提取物干膏 0.27 g，溶解于 20 mL氯仿中。
以氯仿∶甲醇∶水作为洗脱剂分离，薄层鉴别。所得
馏分挥干溶剂制成干膏保存备用。称取乙醇提取物
干膏 0.95 g 及水提取物干膏 1.95 g，也按上法分离
并制成干膏保存备用。
1.2.2 藤梨根抗乙肝病毒活性部位的筛选 藤梨根
对 HepG2.2.15细胞的活力影响：将对数生长期的
HepG2.2.15细胞按 1×105个 /mL接种于 96孔细胞
培养板，每孔 200μL。试验设试验组、阳性对照组
（泛昔洛韦）和阴性对照组（10%DMSO）。泛昔洛韦组
和实验组设 3 个浓度：2.0 mg/mL、1 .0 mg/mL、0.5
mg/mL。加 5 mg/mL的MTT溶液 20μL，继续培养4 h
后，加入 150μL DMSO，于 490 nm 处测 OD值。按
下式计算细胞存活率：细胞存活率（%）=（实验孔 A
值 /对照孔 A值）×100%。
藤梨根对 HBsAg和 HBeAg 的抑制作用研究：
按上法培养 HepG2.2.15 细胞，试验分组与上面相
同。加入样品后，在第 3天、6天、9天吸取上清液并
更换含药培养液。将所取上清液合并按 HBsAg和
HBeAg的检测试剂盒操作，于 450 nm 处测定各孔
的 OD值。试验重复 4次。按下式计算对 HBsAg、
HBeAg的抑制率（%）：抑制率 =（10%DMSO对照孔
A值 -药物孔 A值）/（10%DMSO对照孔 A值 -阴
性血清 A值）×100%。
治疗指数（TI）=TC50/IC50。TC50（50%毒性浓度）即
试验孔存活细胞为对照孔 50%时的药物浓度。IC50
（50%抑制浓度）为 HBsAg或 HBeAg抑制率为 50%
时的药物浓度。当 TI>2时为有效，TI=1时为低效高
毒，TI<1时为无效。
1.3 统计学分析
采用 SPSS11.0统计分析软件，对实验数据进行
多因素的方差分析，P <0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 藤梨根的提取、分离
各提取部分干膏分别称重，计算干膏得率（见附
表）。
干膏得率 =干膏重量 /原药材重量×100%。
附表 藤梨根各提取部位的干膏重量及干膏得率
乙酸乙酯部分得到一个组分为 Y，称重得 44.28
mg。乙醇部分分离得到 5个组分为：A1、A2、……、
A5。水提部分分离得到 5个组分为：W1、W2、……、
W5。所得干膏重量及含量见图 1。
干膏含量（%）=分离组分干膏重量 /提取部分
干膏重量×100%。
图 1 藤梨根各部分干膏及百分比
乙酸乙酯部分总干膏重量为 250.14 mg，干膏百
分比 17.70%；乙醇部分总干膏重量为 650.8 mg，干
膏百分比为 95.29%；水提部分总干膏重量 610.6
溶剂 干膏重量 /mg 干膏得率 /%
石油醚 52.6 0.175
乙酸乙酯 272.8 0. 901
乙醇 1 193.5 3.978
水 2 236.4 7.455
水提部分
醇提部分
干膏重量 /mg
干
膏
百
分
比
/%
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450
70
60
50
40
30
20
10
0
图 2 藤梨根对 HepG2.2.15 细胞活力影响
阳性组
A1
Y
W2
W5
细
胞
存
活
率
/%
提取物浓度 /（mg/mL）
0 0.5 1.0 1.5 2.0
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
405· ·
mg，干膏百分比为 54.02%。
2.2 藤梨根抗乙肝病毒活性部位的筛选
藤梨根对 HepG2.2.15细胞活力影响见图 2，对
HBsAg和 HBeAg的抑制率结果见图 3。
注：覮与阳性对照组比较，P <0.05，差异有显著性
图 3 藤梨根对 HBsAg和 HBeAg的抑制率
阳性对照组对 HBeAg 的 TI 为 0.04774<2；对
HBsAg 的 TI 为 3.28472>2。A1 对 HBeAg 的 TI 为
5.2823>2；对 HBsAg的 TI为 2.7444>2。Y对 HBeAg
的 TI为 4.2225>2；对 HBsAg的 TI为 3.0645>2。W5
对 HBeAg 的 TI 为 1.1264<2；对 HBsAg 的 TI 为
1.8988<2。W2对 HBeAg的 TI为 0.6614<1；对 HB-
sAg的 TI为 7.02>2。
结果表明：藤梨根提取物对 HepG2.2.15细胞存
活率的影响比阳性对照组小，其中乙酸乙酯提取部
分（Y）和乙醇提取部分（A1）对 HBV的 HBeAg、HB-
sAg 均有抑制作用；W2 和阳性对照组只对 HBsAg
有抑制作用。
3 讨论
乙型肝炎病毒（HBV）属嗜肝 DNA病毒科，为长
约 3.2 kb的部分双链环状 DNA病毒。HBV的抵抗
力较强，在 65℃中 10 h、煮沸 10 min或高压蒸气才
可被杀灭。它具有很强的感染性，危害大，可引起各
种急、慢性病毒性肝炎及肝硬化等病，并与肝癌有密
切关系。
HepG2.2.15 细胞株系重组载体 pDoLTHBV-1
转染人肝癌细胞株 HepG2、经 G418筛选后获得的
可产生高水平 HBsAg和 HBeAg的细胞克隆。它不
仅支持 HBV-DNA的复制，且支持 Dane样颗粒的
包装与分泌，稳定且可靠，现已成为申报肝炎新药必
备的体外筛选模型，普遍用于抗乙肝病毒药物研究。
吴淑坤等[13]利用 HepG2.2.15细胞模型，采用终点稀
释 PCR和 MTT实验等技术，建立了一种操作简便，
灵敏度高且可半定量的体外初筛抗 HBV药物实验
方法。彭立生等[14]选用了 Hep2.2.15细胞考察叶下珠
提取物对乙肝病毒及乙肝病毒 X基因的抑制作用。
李丹等[15]以该细胞株为模型，应用酶联免疫法观察
了胸腺因子 D 的不同浓度对 HBsAg、HBeAg 和
HBV DNA的抑制作用，综合评价胸腺因子 D的体
外抗 HBV效果。
本实验采用目前成熟的抗病毒体外筛选模型
HepG2.2.15细胞模型，初步确定了藤梨根的活性部
位，进行了藤梨根抗病毒作用的体外筛选。据文献报
道[11-12]，藤梨根的主要活性化学成分为三萜皂苷类，
接下来可进行体内抗病毒活性成分的验证，活性部
位的结构解析，为进一步开发藤梨根奠定基础。
我国是猕猴桃的优势产区，药用资源非常丰富。
由于猕猴桃属植物的药理活性和营养价值都很高，
该属植物的根、茎、果实等都具有优良的药理作用，
如抗突变、抗畸变、抗肿瘤等。近年来我国已加强对
该属植物的研究，希望从中发掘出用于预防及治疗
肿瘤和肝炎等疾病的天然药物。其研究与开发的潜
力是巨大的，值得深入研究。
参 考 文 献：
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草[M]. 上海:上海
科学技术出版社,1998:672-673.
[1] The State Administration of Traditional Chinese Medicine“Chi-
nese Materia Medica”Editorial Board. Chinese herbal medicine
[M]. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press, 1998:
672-673. Chinese
[2] 江苏新医学院.中药大词典[M].上海:上海科学技术出版社,2006:
2210-2212.
[2] Jiangsu New Medical College. Dictionary of Traditional Chinese
Medicine [M]. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press,
2006: 2210-2212. Chinese
[3] 梁 洁,甄汉深,王新盛,等.美味猕猴桃根中三萜类化合物的体外
抗肿瘤实验研究[J].中药材,2009,32(6):959-962.
[3] LIANG J, ZHEN HS, WANG XS, et al. In vitro anti-tumor Ex-
periment of Actinidia triterpenoids[J]. Journal of Chinese Medici-
nal Materials, 2009, 32 (6): 959-962. Chinese
[4] 杨艳杰,何弘水.猕猴桃根提取物抗氧化及保肝作用的研究[J].安
徽农业科学,2008,36(19):8059-8061.
[4] YANG YJ, HE HS. Antioxidant and hepatoprotective effects of
Actinidia Root Extract [J]. Anhui Agr Sci, 2008, 36 (19):
8059-8061. Chinese
中国现代医学杂志 第 21 卷
提取物浓度 /（mg/mL）
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
120
100
80
60
40
20
0
阳性对照组
A1覮
Y覮
W2覮
W5覮
提取物浓度 /（mg/mL）
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
120
100
80
60
40
20
0
阳性对照组
A1覮
Y覮
W2覮
W5覮
对
H
Bs
Ag
的
抑
制
率
/%
对
H
Be
Ag
的
抑
制
率
/%
406· ·
（上接第 403页）
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断、治疗及预后评价中发挥着重要功能。
参 考 文 献：
[1] GREENLEE RT, MURRAY T, BOLDEN S, et al. Cancer statis-
tics, 2001 [J]. CA Cancer J Clin, 2001, 51: 15-36.
[2] BUSSEMAKERS MJ, VAN BOKHOVEN A, VERHAEGH GW, et
al. DD3: a new prostate-specific gene, highly overexpressed in
prostate cancer [J]. Cancer Res., 1999, 59(23): 5975-5979.
[3] LIVAK KJ, SCHMITTGEN TD. Analysis of relative gene expres-
sion data using real-time quantitative PCR and the 2 (-Delta
Delta C(T)) Method [J]. Methods, 2001, 25(4): 402-408.
[4] SCHALKEN JA, HESSELS D, VERHAEGH G. New targets for
therapy in prostate cancer: differential display code 3 [DD3
(PCA3)], a highly prostatecancer-specific gene [J]. Urology, 2003,
62(5Suppl 1): 34-43.
[5] DE KOK JB, VERHAEGH GW, ROELOFS RW, et al. DD3
(PCA3), a very sensitive and specific marker todetect prostate
tumors [J]. Cancer Res, 2002, 62(9): 2695-2698.
[6] BUSSEMAKERS MJ. Changes in gene expression and targets for
therapy [J]. Eur Urol, 1999, 35(5-6): 408-412.
[7] 刘光香，郭宏骞，李笑弓，等.前列腺癌患者尿液中 DD3 mRNA检
测及临床意义[J].中华男科学杂志，2007,13(6):511-513.
[7] LIU GX, GUO HQ, LI XG, et al. Detection of DD3 mRNA in
the urine of prostate cancer patients and its clinical significance
[J]. National Journal of Andrology, 2007, 13 (6): 511-513. Chi-
nese
[8] BALCERCZAK E, MIROWSKI M, SASOR A, et al. Expression
of p65, DD3 and c-erbB2 genes in prostate cancer [J]. Neoplas-
ma, 2003, 50(2): 97-101.
[9] BIALKOWSKA-HOBRZANSKA H, DRIMAN DK, FLETCHER
R, et al. Expression of human telomerase reverse transcriptase,
Survivin, DD3 and PCGEM1 messenger RNA in archival prostate
carcinoma tissue [J]. Can J Urol, 2006, 13(1): 2967-2974.
[10] POPA I, FRADET Y, Beaudry G. Identification of PCA3 (DD3)
in prostatic carcinoma by in situ hybridization [J]. Mod Pathol,
2007, 20(11): 1121-1127.
[11] PETROVICS G, LIU A, SHAHEDUZZAMAN S, et al. Frequent
overexpression of ETS-related gene-1 (ERG1) in prostate cancer
transcriptome [J]. Oncogene, 2005, 24(23): 3847-3852.
[12] FLORIANO-S魣NCHEZ E, C魣RDENAS-RODR魱GUEZ N, CAS-
TRO-MAR魱N M, et al. DD3 (PCA3) gene expression in cancer
and prostatic hyperplasia [J]. Clin Invest Med, 2009, 32 (6):
E258.
[13] MEARINI E, ANTOGNELLI C, DELBUONO C, et al. The
combination of urine DD3 (PCA3) mRNA and PSA mRNA as
molecular markers of prostate cancer [J]. Biomarkers, 2009, 14
(4): 235-243.
（潘一峰 编辑）
[5] 白新鹏,裘爱泳.美味猕猴桃根正丁醇提取物对小鼠急性肝损伤的
保护作用[J].食品与生物技术学报,2006,25(6):115-118.
[5] BA XP, QIU AY. Effect of Actinidia butanol extract on acute
liver injury [J]. Food Science and Biotechnology, 2006, 25 (6):
115-118. Chinese
[6] 卢艳花.中药有效成分提取分离技术[M].北京:化学工业出版社,
2005:178-179.
[6] LU YH. Separation of active ingredients from traditional Chinese
medicine [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2005: 178~179.
Chinese
[7] 崔 莹,张雪梅,陈纪军,等.中华猕猴桃根的化学成分研究[J].中国
中药杂志,2007,32(16):1663-1665.
[7] CUI Y, ZHANG XM, CHEN JJ, et al. The chemical constituents
of Actinidia chinensis root [J]. Chinese Materia Medica, 2007, 32
(16) :1663-1665. Chinese
[8] LAI Y, XU DP. Actinidia active chemical constituents[J]. Journal
of Chinese Medicinal Materials, 2007, 30(2): 166-168. Chinese
[9] LIU GH, XU DP. Kiwifruit root activity of hepatic injury [J].
Extraction and Activity, 2009, 25(4): 60-63. Chinese
[10] 国宏莉,姚俊霞,张 丽,等.藤梨根正丁醇提取物在人食管癌细胞
生长中的作用[J].中药材,2008,31(7):1030-1032.
[10] GUO HL, YAO JX, ZHANG L, et al. The role of Actinidiae
butanol extract in human esophageal cancer cell growth [J].
Journal of Chinese Medicinal Materials, 2008, 31 (7):
1030-1032. Chinese
[11] 白素平.毛花猕猴桃三萜化学成分的研究[J].天然产物研究与开
发,1997,9(1):15.
[11] BAI SP. Eriantic triterpenes chemical constituents [J]. Natural
Product Research and Development, 1997, 9(1): 15. Chinese
[12] 覃益民,陈希慧,蔡民廷,等.中越藤梨根三萜化学成分的研究[J].
中草药,1999,30(7):323-326.
[12] TAN YM, CHEN XH, CAI MT, et al. Vietnam Actinidiae
triterpene chemical constituents [J]. Chinese herbal medicine,
1999, 30 (7): 323-326. Chinese
[13] 吴淑坤,林雨霖,姚学军,等.一种体外初筛抗乙型肝炎病毒药物实
验方法[J].中国医院药学杂志,2001,21(4): 218-219.
[13] WU SK, LIN YL, YAO XM, et al. An in vitro anti-HBV drug
screening test methods[J]. Chinese Hospital Pharmacy, 2001, 21
(4): 218-219. Chinese
[14] 彭立生,贺劲松,童光东,等.叶下珠提取物抗乙肝病毒及乙肝病毒
X基因的研究[J].中西医结合肝病杂志,2006,16(6):340-343.
[14] PENG LS, HE JS, TONG GD, et al. Phyllanthus extract against
hepatitis B virus and hepatitis B virus X gene [J]. Traditional
and Western Medicine on Liver Diseases, 2006, 16 (6):
340-343. Chinese
[15] LI D, LIU XP, SHI SL, et al. In vitro experiment of thymic
factor D for hepatitis B virus[J]. Haixia Pharmaceutical Sciences,
2004, 16(1): 73-75. Chinese
（潘一峰 编辑）
第 4期 王秀荣：瑞格列奈联合甘精胰岛素在老年 2型糖尿病治疗中的效果与安全性分析
407· ·