全 文 ：〔收稿日期〕 2003 —10 —27
〔基金项目〕 湖南省卫生厅中医药科研基金资助课题(2000 —71)。
〔作者简介〕 何桂霞(1965 —),女 ,黑龙江省伊春市人 ,副教授 ,在读博士研究生。主要从事中药及天然药物化学的教学与研究。
藤茶总黄酮对四氯化碳致急性
肝损伤小鼠的保护作用
何桂霞1 , 李　玲1 , 肖锦仁1 , 裴　刚1 , 朱咏华1 , 刘浩然2
(1.湖南中医学院药学院 , 湖南 长沙 410007;　2.中国药科大学 , 江苏 南京 210009)
　　〔摘要〕目的 观察藤茶总黄酮(Tengcha flavonoids ,TCF)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的影
响 。方法用腹腔注射 CCl4 致小鼠急性肝损伤模型 , 测定不同剂量的 TCF对肝损伤血清丙氨酸转氨酶
(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性 、肝中超氧化物歧化酶(SOD)活性 、肝中丙二醛(MDA)的影响 ,同时对肝
组织进行病理学检查 。结果 TCF具有剂量依赖性地降低CCl4 致小鼠肝损伤血清 ALT 、AST值升高 ,降低肝
组织匀浆中MDA的含量 ,增强 SOD的活性 ,减轻CCl4 对肝脏细胞的病理损伤。结论 TCF对 CCl4 致小鼠急
性肝损伤具有一定的保护作用。
〔关键词〕藤茶;总黄酮;四氯化碳;肝损伤;小鼠
〔中图分类号〕 R 285.5 　〔文献标识码〕A　〔文章编号〕 1000 —5633(2004)04 —0007 —02
The therapeutic effects of Tengcha Flavonids on
hepatic injury induced by CCl4 among mice
He Guixia , Li Ling , Xiao Jinren , et al
(Faculty of Pharmacetics , TCM Univ.of Hunan , Changsha 410007)
　　〔Abstract〕Objective To investigate the therapeutic effects of Tengcha flavonids(TCF)on hepatic in-
jury induced by CCl4 among mice.Methods The acute hepatic injury model was prepared by CCl4 injected
intraperitoneally .Then , the therapeutic effects of TCF on the model were evaluated by the activity determina-
tion of serum alanine aminotransferase(ALT andAST), superoxide dismutase(SOD)and the content of ma-
londialdehyde (MDA)in liver , and the changes of hepatic pathohistology following the treatment.Results
The activities of ALT and AST and the MDA content in liver was significantly increased and the activity of
SOD was largely inhibited in the animals of modeling group.Following the treatment with TCF , ALT and
AST activities and MDA content were significantly reduced and SOD activity was obviously increased in the
mice of treating group.Furthermore , the pathological changes were also significantly improved in the mice of
treating group.Conclusion TCF holds protective effects on the acute hepatic injury induced by CCl4 in mice.
〔Key words〕 Tengcha;Flavonids;CCl4;Hepatic injury;Mice
　　藤茶系葡萄科蛇葡萄属中的一种野生藤本植物 ,为
粤蛇葡萄 A.cantoniesis(H.et A.)Pl.var .grossedentata
Hand-Mazz.[ 1] 的变种 ,全株药用 ,味甘 、淡 ,性凉 ,具有清
热解毒 、祛风湿 、强筋骨等功效[ 2] 。自古以来 ,壮族和瑶
族人民将其幼嫩茎叶经过杀青、揉捻 、烘干用作保健茶 ,
具有营养丰富 、回味甘甜、清热解毒 、生津止渴 、润喉祛
痰等特点 。用于治疗感冒发热 、咽喉肿痛 、黄疸型肝炎、
疮疖等病症 ,夏天泡茶数日不馊 ,有“神茶”之称。化学
研究表明 ,藤茶黄酮类有效成分含量高达 30%以上[ 3] 。
我们的前期研究表明 , TCF体外具有清除活性氧自由基
7
2004年 8月第 24卷第 4期
Aug.2004 Vol.24 No.4
湖南中医学院学报
Journal of TCM Univ.of Hunan
的作用及抗脂质过氧化作用[ 4] 。活性氧自由基及脂质
过氧化是肝细胞损伤的重要机制之一 ,而关于 TCF在肝
损伤中的作用未见报道。本实验拟观察 TCF对实验性
急性肝损伤的影响 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物　昆明种杂交健康小白鼠 , 20 ～ 22 g ,雄性 ,
合格证号 99012 号 ,湖南中医学院实验动物中心提供 ,喂
饲湖南中医学院实验动物中心提供的鼠颗粒饲料。
1.1.2　药物与试剂 　藤茶总黄酮(TCF ,湖南中医学院
中药化学教研室提制 ,批号 20001206),实验时以0.5%羧
甲基纤维素钠(CMC —Na)配制成 40 mg mL 、20mg mL 、10
mg mL浓度;联苯双酯(北京协和药厂),实验时以0.5%
羧甲基纤维素钠(CMC —Na)配制成 10 mg mL浓度;MDA
测定试剂盒、谷丙转氨酶(ALT)临床诊断试剂盒 、谷草
转氨酶临床诊断(AST)试剂盒(赖氏法)(南京建成生物
工程研究所 ,批号 20021221);四氯化碳(CCl4 ,分析纯 ,
北京化学试剂公司);花生油(食用油)。
1.1.3　仪器　岛津 UV —256FW分光光度计 , 751DG 紫外
分光光度仪(上海仪器总厂);HZQ —C空气浴振荡器(哈
尔滨东明医疗仪器厂);GL20A 全自动高速冷冻离心机;
TD4A台式离心机(湖南仪器仪表总厂离心机厂)。
1.2　方法
1.2.1　动物分组和造模方法　取 60 只雄性小鼠 ,随机
分成 6组 ,每组 10只 ,分别为正常对照组 、四氯化碳损伤
模型组 、TCF组(高剂组 800 mg kg 、中剂组 400mg kg 、低
剂组 200mg kg)、联苯双酯组(BPC)(200mg kg)。各给药
组按 20mL (kg·d)剂量灌胃给药 1次 ,正常对照组及四
氯化碳模型组给予同量的灭菌生理盐水 ,各组连续灌胃
给药 7 d ,于最末次给药后 1 h ,除正常对照 ip 0.9%NaCl
20mL kg外 ,其余各组均 ip 0.1%CCl4 花生油溶液 20 mL
kg ,染毒 16 h 后 , 所有小鼠采用眼眶放血法采血 ,分离
血清 ,测定ALT和 AST的活性 。取血后每只小鼠立即剖
腹 ,取相同部位的 1 小块肝组织 ,用 10%的福尔马林溶
液固定 。同时用生理盐水制备成 10%的肝匀浆 ,测定每
克肝组织中 MDA 的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活
力。
1.2.2　指标检测方法　赖氏法测定血清 ALT 、AST的活
性;硫代巴比妥酸法测定肝匀浆中 MDA含量 ,黄嘌呤氧
化酶法测定SOD的活力;用 10%的福尔马林溶液固定肝
组织 ,常规石蜡包埋切片(片厚 5 μm),HE染色 ,光镜下
观察肝组织病理学变化。将肝组织损伤程度分为 4级:
0级(-),肝组织结构正常 ,无明显变性 ,坏死及炎症细
胞浸润;1级(+)、肝小叶结构尚正常 ,可见明显的混浊
肿胀 ,气球样变或脂肪变性 ,散在点状坏死;2级(++),
肝小叶结构不清 ,可见明显的灶状坏死 ,伴有炎症细胞
浸润;3级(+++),肝小叶结构不清 、可见明显的片状
坏死 ,伴有炎症细胞浸润 。
1.2.3　统计学分析 　实验数据经统计学处理 ,各测定
值用(x±s)表示 ,样本均数间比较采用配对 t 检验 。对
肝脏组织病理学变化经 Ridit 分析统计处理 , P <0.05为
显著性界限 。
2　结果
2.1　TCF对小鼠血清生化指标的影响
由表 1可见 ,模型组血清中 ALT 、AST的含量明显高
于正常组(P <0.01),说明本次实验的小鼠急性肝损伤
造模成功 。TCF能剂量依赖性降低小鼠血清 ALT 、AST
水平 。其效果与阳性对照药联苯双酯效果相似。
表 1　TCF 对小鼠血清 ALT和 AST的影响
(x±s , n=10)
组　别 剂量(mg kg·d)
谷丙氨酸转移酶
(kU·L -1)
谷草氨酸转移酶
(kU·L-1)
正 常 组 — 68.8±9.3＊＊＊ 78.5±10.2＊＊＊
模 型 组 — 192.7±13.8 206.5±25.7
TCF低剂组 200 173.6±22.6＊ 180.5±13.95＊
TCF中剂组 400 155.0±12.9＊＊ 171.5±14.0＊＊
TCF高剂组 800 117.7±10.7＊＊ 145.3±12.7＊＊
联苯双酯组 200 103.4±17.9＊＊ 122.6±15.4＊＊
　　注:①与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<
0.001。②下表同。
2.2　TCF对小鼠肝匀浆MDA含量和 SOD活性的影响
实验结果表明 , CCl4 中毒小鼠肝脂质过氧化产物
MDA水平显著升高 ,肝中 SOD活性显著降低 ,而 TCF 对
这些变化都有不同程度的抑制作用 ,见表 2 。
表 2　TCF对小鼠肝匀浆 MDA 和 SOD的影响
(x±s , n=10)
组　别 剂量(mg kg·d)
丙二醛
(nmol·g -1)
超氧化物歧化酶
(nU mg)
正 常 组 — 183.7±19.3＊＊＊ 121.9±10.8＊＊＊
模 型 组 — 310.2±46.3 84.8±9.6
TCF低剂组 200 274.8±22.7＊ 93.6±8.8＊
TCF中剂组 400 255.0±15.3＊＊ 103.6±12.0＊＊
TCF高剂组 800 214.4±22.0＊＊＊ 111.2±9.6＊＊
联苯双酯组 200 206.2±21.4＊＊＊ 111.1±11.2＊＊
2.3　TCF对 CCl4致小鼠急性肝损伤肝组织病理学的影
响
病理切片结果表明 ,正常对照组小鼠肝组织结构正
常 ,无变性 、坏死等病理改变 ,而 CCl4模型组小鼠肝组织
结构镜下可见肝细胞不同程度的变性(以细(下转第 38页)
8 湖南中医学院学报 2004年第 24卷
的收缩压较治疗前有显著性差异(P <0.01);治疗组在控制
收缩压及舒张压方面与对照组比较 , 有显著性差异(P <
0.05)。结果见表 4。
表 4　两组治疗前后血压变化的比较 (mmHg , x±s)
项目 治　疗　组(n=30)治疗前 治疗后
对　照　组(n=30)
治疗前 治疗后
收缩压 164.03±5.51 133.23±12.0■■＊ 163.17±5.62 149.2±12.41■■
舒张压 100.60±3.66 85.80±7.39■■＊ 99.93±3.50 91.57±5.46
　　注:与对照组比较 ＊P<0.05;与治疗前比较 ■■P<0.01。
3　结论
左归双降方由熟地黄 、黄芪 、山萸肉 、枸杞 、菟丝子 、杜
仲 、丹参 、丹皮 、钩藤 、夏枯草 、牛膝 、黄连等药组成 , 具有滋阴
益气 、平肝潜阳等功效[ 4] 。通过以上临床观察 , 我们可以得
出以下结论:①左归双降方能显著改善 2 型糖尿病合并高
血压患者的临床症状;②左归双降方能明显降低血糖和改
善糖耐量异常[ 4] , 其作用明显优于对照组;③左归双降方抑
制血压升高的作用明显优于西药对照组 , 其功效可能与调节
脂质代谢 、扩张血管 、改善微循环 、清除自由基及抑制细胞膜
脂质过氧化等有关。
另外 ,所有观察病例均进行了治疗前后三大常规(血 、
尿 、便), 肝 、肾功能 , 生化检测及胸片检查 ,均无药物不良反
应。
此方在配伍上以中医古代名家张景岳的阴阳互济理论
为指导 , 注重阳中求阴 , 阴阳平衡 ,并结合现代医药学研究成
果精选药物 , 组方较为合理 , 通过两组病例疗效观察 , 在症状
改善及血压 、血糖的控制等方面 , 治疗组较好 ,因此本方值得
进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　钱荣立.关于糖尿病的新诊断标准与分型[ J] .中国糖尿病杂
志 , 2000 , 8(1):5 —6.
[ 2] 　张　建 ,华　琦.高血压个体化治疗[ M] .北京:人民卫生出版
社 , 2001.31.
[ 3] 　郑筱萸.中药新药临床研究指导原则[M] .北京:中国医药科技
出版社 , 2002.73 —77, 233 —237.
[ 4] 　胡方林 ,喻　嵘.左归双降方对实验性糖尿病合并高血压大鼠
糖代谢和血压的影响[ J] .湖南中医学院学报 , 2000 , 20(3):14 —
16.
(上接第 8页)胞水肿为主)与坏死 ,坏死呈凝固性 , 并以环中央
静脉分布为主 ,伴中性粒细胞 、单核细胞等炎性细胞浸润 ,可
见桥接坏死形成等病理改变 ,而 TCF各剂量组的肝细胞坏死
程度均有减轻 , 经 Ridit 法统计处理 , P <0.05 ～ 0.01 , 表明
TCF有保护肝损伤作用 , 结果见表 3。
表3　TCF 对 CCl4 致小鼠急性肝组织病理学损伤的影响
组　别 剂量(mg kg) n
肝损伤程度
- + ++ +++ P
正 常 组 — 10 10 0 0 0 <0.01
模 型 组 — 10 0 2 3 5 —
TCF低剂组 200 10 2 4 4 0 <0.05
TCF中剂组 400 10 2 5 3 0 <0.01
TCF高剂组 800 10 4 4 2 0 <0.01
联苯双酯组 200 10 3 6 1 0 <0.01
3　讨论
腹腔注射 CCl4 植物油溶液是目前国际上常用的肝炎模
型。CCl4 是一种毒性很强的化学物质 , 进入体内后 ,在肝脏
内经肝细胞色素 P450激活 , 生成活泼的三氯甲基自由基和氯
自由基。这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子发生共
价结合 ,使酶的功能丧失 , 细胞膜脂质过氧化 ,胞浆 Ca2+浓度
升高 , 导致肝细胞损伤坏死 ,胞浆内转氨酶渗入血液 , 使血
清中该酶的活性升高;肝脏外观呈土黄色 , 病理检查可见肝
脏炎症细胞浸润 、脂肪性变 、混浊肿胀 、气球样变和肝细胞坏
死[ 5] 。本实验结果表明:TCF能够明显降低 CCl4 致小鼠肝损
伤 ALT、AST增高 , 减轻肝细胞变性 、炎症浸润及坏死等病变 ,
降低肝中 MDA生成量 , 提高 SOD活力。 表明 TCF对 CCl4 所
致肝损伤具有一定的保护作用 ,其作用机理可能是提高肝细
胞抗氧化能力 ,对抗 CCl4 引起的膜脂质过氧化 , 保护肝细胞
膜结构的完整及功能 ,达到拮抗 CCl4 肝细胞膜的损害作用 ,
而更深入的机理探讨需进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(二册)补编[M] .
北京:科学出版社 ,1983.349.
[ 2] 　广西植物研究所.广西药用植物名录[ M] .南宁:广西民族出版
社 , 1974.202.
[ 3] 　何桂霞 ,何　群,裴　刚 ,等.瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量
测定[ J] .湖南中医药导报 , 1999 ,5(12):30 —31.
[ 4] 　何桂霞 ,杜方麓 ,杨伟丽 , 等.藤茶总黄酮清除氧自由基与抗脂
质过氧化作用[ J] .中药材 , 2003 ,26(5):338 —340.
[ 5] 　方允中 ,李文杰.自由基与酶[ M] .北京:科学出版社 , 1989.202.
38 湖南中医学院学报 2004年第 24卷