全 文 ：1 资料与方法
1.1 病例选择
S LE 患者组:住院的活动期 S LE 病人 30 例 ,全部为女性 ,年
龄 21 ～ 43 岁 , 平均年龄 26±15 岁 , 平均病程 2.1 年。诊断
符合美国风湿病学会 1982 年标准。 SLE 的活动标准参考
Urowitz标准[ 1] 。
正常对照组:健康志愿者 20 名 , 男性 5 名 , 女性 15 名 , 年龄
21 ～ 43 岁 ,平均年龄 33±11 岁。
1.2 试剂:人可溶性 P-选择素酶联免疫试剂盒购自美国
R&D 公司 , 人可溶性 p 选择素酶联免疫试剂盒购自法国
S tago 公司。
3 方法:采集 3.2%抗凝静脉血 4ml ,离体后 30分钟内离心分
离血浆 ,采用 ELISA 法检测 sP-选择素及血栓调节素的浓
度。
2 结果
2.1　正常对照组及 SLE 患者组血浆 P-选择素及 Stm 的检
测结果 ,见表 1。
表 1 正常对照组及 S LE 患者组血浆
P-选择素及 sTM 水平(x±s , ng/ml)
组别 n sP-选择素 sTM
正常对照组 20 239.28±52.29 32.15±10.23
S LE 患者组 30 586.48±144.84＊ 61.83±18.04＊
　　注:＊与正常组比较 P<0.01
3 讨论
系统性红斑狼疮患者机体存在多种免疫异常 , 粘附分子
参与细胞间识别 、粘附及信号传递 , 以及在 S LE 免疫异常中
可能具有重要作用已为人们高度重视。 血清可溶性粘附分
子-1 的异常表达与 SLE 的 T 、B 细胞紊乱有着密切关
系[ 2] 。 P-选择素系粘附分子选择素家族成员之一 , 主要存
在于血小板α颗粒及内皮细胞内 , 活化后分泌至血中 , 并作
为这些细胞的活化标志物[ 3] 。本文结果表明 , 活动期 SLE
患者存在不同程度的血小板 、内皮细胞激活和/或损伤状态。
患者血中 sP-选择素水平明显升高 , 与正常对照组比较有
显著性差异(P<0.01), 因此我们推测 P-选择素可介导淋
巴细胞 、中性粒细胞及单核细胞在内皮细胞上滚动 , 对炎症
部位的白细胞渗出及炎症早期启动具有重要意义。在 SLE
发病过程中 ,常伴有不同程度的血管炎 , 血管内皮易受到损
伤 , TM 是血管内皮细胞膜表面上的大分子蛋白 , 是一种对
抗凝血过程的蛋白质 ,血管炎导致内皮细胞受损以致 TM 脱
落入血中引起血浆中 sTM 水平的升高[ 4] 。活动期 SLE 患
者可能普遍存在由于免疫复合物沉积造成血管内皮的损伤 ,
有学者比较了 SLE 患者治疗前后 sTM 水平 , 提出了用 sTM
水平来观察 SLE 治疗是否有效[ 5] 。本研究中活动期 SLE 患
者 sTM 水平显著 , 与正常对照比较有显著性差异(P <0.
01)。因此本文认为 , 检测活动期狼疮患者血浆中可溶性 P
-选择素及 TM 水平对判定病情进展和活动转归具有重要
意义。
参考文献
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(7):407-410.
收稿日期:2007-10-12
血清药理学方法研究广西藤茶提取物对乙肝病毒的作用
欧贤红1 ,袁叶飞2 ,韦汉燕1 ,罗朝晖1 ,白先群1 ,唐爱莲1 ,冯冬梅1 ,林启云3
(1.桂林医学院 ,广西 桂林 541004;2.泸州医学院 ,四川 泸州 646000;3.广西中医学院 ,广西 南宁 210000)
　　摘 要　目的　研究广西藤茶提取物 APS 在体外对乙肝病毒(HBV)的作用。方法　采用血清药理学方法 , 将 APS 含药
血清作用于 2.2.15 细胞 ,收集细胞上清液 ,用 M TT 法测定细胞上清液中 HBsAg 、HBeAg 的含量。结果　 APS 含药血清对
2.2.15 细胞分泌的 HBsAg、HBeAg 有显著抑制作用。结论　 APS 对 2.2.15 细胞分泌乙型肝炎病毒抗原有抑制作用。
关键词　藤茶 APS;2.2.15 细胞;抗乙型肝炎病毒
[ 中图分类号] 　R512.6+2 [ 文献标识码] 　A　　　　　　　　　　学科分类代码:320.2455
文章编码:1001-8131(2007)06-0005-03
The Effect of APS of Ampelopsis Grossedentata on Anti-HBV
OU Xianhong 1 , YUAN Yefei2 ,WEI Hanyan1
(1.Gui Lin M edical University ,Guilin541004 ,China;2.Lu ZhouM edical Unive rsity ,Luzhou646000 ,China)
Abstract　Objective　To investig ate the anti-HBV effect o f APS.Methods Using M T T assay to in-
vestig ate the inhibi tions o f APS mice -serum on 2.2.15 cells expressing HBsAg and HBeAg.Lamivudine
w as used as the po sitive control drug.Results The inhibition rate of APS mice-serum on 2.2.15 cells ex-
·5·哈尔滨医药 2007 年第 27 卷第 6 期
pressing HBsAg and HBeA g w as signif icant dif ference.Conclusion APS m ice-serum can inhibi t the HB-
sAg and HBeAg expression of 2.2.15 cells .
Key Words　A PS;2.2.15 cells;anti-hepati tis B virus
病毒性乙型肝炎(乙型肝炎 , 乙肝)是由乙型肝炎病毒
(乙肝病毒 , HBV)引起的传染病。HBV 是导致急慢性肝炎 、
肝纤维化 、肝硬化 、肝癌的主要病因 , 因此 ,寻找高效低毒的
抗 HBV 药物已刻不容缓。 APS 是藤茶总黄酮中主要的单
体化合物[ 1] ,广泛存在于藤茶 、无刺根等中草药植物中 ,且在
藤茶中含量较高[ 2] 。有文献报道 , APS 具有明显的保肝降
酶[ 3] 、增强免疫[ 4]作用 , 为进一步观察其对乙肝病毒的作用 ,
本研究将 APS 含药血清加入到 2.2.15 细胞中 ,用 M TT 法
观察 APS 抑制 2.2.15细胞分泌 HBsAg 、HBeAg 的作用 ,观
察 APS 对乙肝病毒的作用。
1　材料
1.1　药物与试剂
APS 由桂林医学院天然药物化学教研室提供;Eagles
MEM 干粉:GIBCO;胎牛血清:杭州四季青生物工程材料有
限公司;G -418:Genticin;L -谷氨酰胺:Amresco;卡那霉
素:Amresco;MTT:Fluka , MW414.3;DMSO:A R, 广州市新
港化工有限公司;HBsAg、HBeAg 试剂盒:厦门英科新创科
技有限公司产品 , 20060311;拉米夫定(3TC), 葛兰素威康制
药公司 , B008923。
1.2 2.2.15 细胞
2.2.15 细胞是 HBV-DNA 克隆转染人肝癌细胞的 2.
2.15 细胞株 , 由美国 Mount Sinai 医学中心构建 , 购自中国
医学科学院医药生物技术研究所。
1.3　主要仪器
倒置显微镜:LEICA BMIRB;酶标仪:S UNRIS E;培养
瓶:P romega Corpo ration;96 孔板 、24 孔板:Co rning;二氧化
碳培养箱:Shel-lab。
1.4　动物
清洁级昆明种小鼠 , 18-22g ,广西壮族自治区食品药品
检验所(生产许可证号:SCXK 桂 2003-0001)。
2 方法与结果
2.1 含药血清的制备
取健康小鼠 15 只 , 分为空白对照组 、APS 组和 3TC 阳
性对照组。 APS 、3TC 组给药剂量分别为 600mg/kg 、80mg/
kg ,空白对照组给蒸馏水 , 均灌胃给药 , 2 次/ d×3d。未次药
后 1h 取血 , 分离血清 ,于 56℃温育 30min 灭活 ,用细胞培养
液分别释稀至 40%、20%, 滤菌 , 4℃保存备用。
2.2 APS 含药血清在 2.2.15 细胞培养中对 HBsAg 、
HBeAg 的抑制作用[ 5]
在长满 2.2.15 细胞的培养瓶中 ,用 0.25%的胰酶消化
液进行消化成为单个细胞悬液 ,取少量消化后的细胞置于细
胞计数板进行计数。调其细胞浓度为 1×105/ ml ,接种于 96
孔板 ,每孔加 100μl , 于 37℃, 5%CO2培养。在接种 2.2.15
细胞 24h 后加 40 、20%含药血清(终末浓度为 20 、10%), 每
浓度 3 孔 ,于第 4d 换含相同浓度的含药血清 , 维持 8d , 于第
8d 收集培养液 , 按试剂盒方法测定 HBsAg、HBeAg 的 OD
值。按下式计算 APS 含药血清的抗原抑制百分率(%), 并
进行组间 t检验 , 见 Table1 、2。
抗原抑制百分率(%)=细胞对照 OD 值-给药实验 OD值细胞对照 OD值
×100%
Table 1 APS药物血清对 2.2.15 细胞分泌 HBsAg 的影响(x±s , n=5)
Groups Dose mg/kg Number OD value Inhibition ra te(%)
20% 10% 20% 10%
normal - 5 1.12±0.32 0.80±0.46 67.42±9.37 76.69±13.54
3TC 80 5 0.24±0.04② 0.35±0.04② 92.93±1.18 ② 89.70±1.34 ②
APS 600 5 0.33±0.06② 0.45±0.09① 90.45±1.64 ② 86.94±2.52 ①
Table 2 　APS药物血清对 2.2.15 细胞分泌 HBeAg的影响(x±s , n=5)
Groups Dose mg/kg Number OD value Inhibition ra te(%)
20% 10% 20% 10%
normal - 5 1.16±0.33 0.89±0.14 14.89±24.19 34.87±10.52
3TC 80 5 0.67±0.15② 0.64±0.11② 50.67±10.77 ② 53.02±7.90 ②
APS 600 5 0.78±0.30② 0.65±0.18② 42.63±22.14 ② 52.36±13.45②
实验结果表明 , APS 含药血清明显降低 HBsAg 、HBeAg
OD值 , 20%APS 血清有非常显著性差异(P <0.01);10%
APS 血清对 HBeAg 的 OD值有极显著性差异(P<0.01), 对
HBsAg 具有显著性差异(P <0.05)。 对 HBsAg 的抑制率两
个浓度均有显著升高作用(P<0.01 , P <0.05), 对 HBeAg 的
抑制率有显著升高作用(P <0.01)。但与 3TC 组无明显差
别。
3 讨 论
中药血清药理学是指在动物经口服给药后一定时间采血
分离血清 ,用此含药血清进行体外实验的一种实验方法[ 6] 。
该方法适合在细胞 、亚细胞 、分子水平对中药及中药复方进行
深入的机制研究[ 7] ;是针对中药及其复方成分复杂多样的特
点而设 , 其可信度 、科学性 、可行性都较以往应用中药粗制剂
直接体外给药进行中药药理研究具有一定的优势 , 既能防止
中药粗制剂本身理化性质对体外试验的干扰 , 又能反映中药
在胃肠道消化吸收 , 再经生物转化 , 最后产生药理效应的过
程 ,代表了药物在体内产生作用的真正有效成分;不仅反映了
药物中可吸收部分的直接作用 , 而且能反映药物成分在机体
作用下形成的代谢产物和药物诱导产生的机体内源性物质的
间接效果[ 8] 。我们采用血清药理学方法观察 APS 在 2.2.15
细胞培养中对 HBV的抑制作用。2.2.15 细胞株系以重组载
体 pDo1TH BV - 1(含 2 个 HBV 头对尾二聚体 , 以尾对尾方
·6· 哈尔滨医药 2007 年第 27卷第 6期
向串联)转染人肝癌细胞株 HepG2 ,经 G418 筛选 , 获得的一
个产生高水平 HBsAg ,HBeAg 的细胞克隆。此细胞株不仅能
够支持 HBV-DNA 的复制 ,且支持 Dane样颗粒的包装与分
泌。该细胞株已用于 HBV 生活周期 ,免疫细胞与含 HBV 的
细胞反应及抗病毒药物评价等研究。现已成为申报肝炎新药
必备的抗病毒实验模型。本实验中采用的 2.2.15 细胞株经
本实验室自行传代培养 , 细胞存活良好 , 并可以分泌大量的
HBsAg 和 HBeAg 。HBeAg 和 HBsAg 为分泌至上清液中的
可溶性蛋白质 , 可间接反映乙肝病毒复制情况[ 9] 。实验结果
表明 APS 有一定的抑制 2.2.15 细胞分泌 HBsAg 、HBeAg 的
作用 ,提示其抗病毒作用是通过限制 HBV 的复制而产生疗效
的 ,但其具体作用机制还有待进行更深一步的研究。
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51. 收稿日期:2007-10-09
高尿酸血症与心脑血管疾病的关系
陈 欣
(天津市第三中心医院 ,天津 300170)
　　摘要 目的　探讨高尿酸血症与心脑血管疾病的关系。方法　对 107 例急性心肌梗死患者 、 142 例脑梗死患者 、91 例
脑出血患者及同龄段对照者进行血尿酸(UA)测定。结果　急性心肌梗死患者 、脑梗死患者 、脑出血患者血尿酸水平明显高
于对照组(P<0.01)。结论　高尿酸血症在心脑血管疾病的发生 、发展中起一定的作用 ,是心脑血管疾病发病的危险因素之
一。
Abstract 　Objective to study the relationship between heart cerebral von disease and serum uric acid .Methods
The level of serum uric acid of 107patients with acute myocardial infarction ,142patients with cerebral infarction pa-
tients and 91patients with cerebral hemorrhagia were determined .Result The level of serum uric acid was significantly
higher in the acute myocardial infarction.cerebral infarctionpatientscerebral hemorrhagia patients than in the controls
(p<0.01).ConclusionHyperuricemia plays a certain in development of heart cerebral von disease and it is an important
dangemus factor for cardiovascular disease .
Key words　 Hyperuricemia acute myocardial infarction ;cerebral infarction;cerebral hemo rrhagia.
关键词　高尿酸血症;急性心肌梗死;脑梗死患者;脑出血
[ 中图分类号] 　R54 [ 文献标识码] 　B　　　　　　　　　　学科分类代码:320.2410
文章编码:1001-8131(2007)06-0007-02
　　尿酸是嘌呤代谢的最终产物 ,其血中浓度受遗传因素及
环境因素的影响。随着经济的发展 , 人民生活水平的提高 ,
高尿酸血症的发生率日益增多。许多研究表明 , 高尿酸血症
促进动脉硬化的发生和发展 ,而动脉硬化是导致心脑血管疾
病的主要原因[ 1] 。流行病学研究表明 , 血尿酸水平增加 ,致
死性和非致死性心脏事件发生率增高。[ 2-4] 本研究对入住我
院的心 、脑血管病患者进行了血液尿酸水平测定分析 , 以探
讨其间的相互关系及临床意义。
1 资料与方法
1.1 资料所有病例均为 2006 年 1 月至 2007 年 1 月入住我
院的心脑血管病患者 ,排除痛风 、白血病与肿瘤 、糖尿病合并
酮症 、急慢性肾炎和慢性肾功能不全患者。其中脑血管疾病
均为急性病人 ,经头颅 C T 证实 , 符合 1995 年全国第四届脑
血管病学会制定的诊断标准[ 5] ;心血管疾病患者均测尿酸含
量 ,试剂由上海荣胜生物有限公司提供。 为急性心肌梗死
(AMI)患者 , 并通过心电图 、心肌酶谱监测证实 , 病例符合
WHO对 AM I的诊断标准。 急性心肌梗死组 107 例 , 男 57
例 ,女 50例 , 平均年龄(56.5±5.5)岁;脑梗死组 142 例 , 男
82 例 ,女 60 例 ,平均年龄(58.2±4.5)岁;脑出血组 91 例 ,男
51 例 ,女 40 例 ,平均年龄(53.9±9.5)岁。对照组为无任何
心脑血管性疾病证据的同期住院患者 146 例 , 其中男 80 例 ,
女 66 例 ,平均年龄(55.4±11)岁。各组的平均年龄差异无
统计学意义(P>0.05)。
1.2　诊断标准:高尿酸血症(H um)标准以 1980 年全国正常
人血尿酸调查均值男≥420mmo l/ L , 女≥360 mmo l/ L。
1.3 方法:受检者进清淡饮食 ,于 3 天后晨起取空腹 12 小
时静脉血 ,分离血清。全部生化项目均采用 TBA-120 全自
动生化分析仪测定。
1.4　统计学方法:各组测定值以 x±S 表示 ,组间显著性比
较采用 t检验。
2 结果
4组血清尿酸水平比较 ,见表 1。
·7·哈尔滨医药 2007 年第 27 卷第 6 期