全 文 ： ·594· Chin JMAP, 2011 July, Vol.28 No.7 中国现代应用药学 2011 年 7 月第 28 卷第 7 期
山芝麻水提液对 HepG2.2.15 细胞 HBsAg 和 HBeAg 的抑制作用
黄权芳 1，林兴 2*，张士军 2，黄仁彬 2，陈兆霓 2(1.广西中医学院第一附属医院，南宁 530023；2.广西医科大学，南宁 530021)
摘要：目的 观察山芝麻水提液(water extracts from Helicteres angustifolia，WHA)的体外抗乙型肝炎病毒的作用。方法 采
用 HepG2.2.15细胞模型进行体外培养，给予不同浓度山芝麻，以拉米夫定作阳性对照，作用 72 h后检测上清液中 HBsAg、
HBeAg的分泌，观察药物对 HepG2.2.15细胞分泌 HBV病毒抗原的影响，同时以 MTT法检测药物在体外对 HepG2.2.15
细胞的生长抑制作用，从而评价药物的抗 HBV 作用。结果 山芝麻水提液对 HepG2.2.15 细胞的半数细胞毒浓度(TC50)
为 482.1 mg·L−1；对 HepG2.2.15细胞分泌 HBsAg的半数抑制浓度(IC50)为 7.3 mg·L−1，其治疗指数(TI)为 66；对 HBeAg，
其 IC50为 14.6 mg·L−1，TI为 33。结论 山芝麻水提液在体外有显著的抗 HBV的作用，且毒性较低。
关键词：山芝麻；HepG2.2.15细胞；HBsAg；HBeAg
中图分类号：R285.5 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2011)07-0594-04
Inhibitory Effect of Water Extracts from Helicteres Angustifolia on HBsAg and HBeAg in HepG2.2.15
Cells
HUANG Quanfang1, LIN Xing2*, ZHANG Shijun2, HUANG Renbin2, CHEN Zhaoni2(1. The First Affiliated
Hospital of Guangxi Traditional Chinese Medicine University, Nanning 530023, China; 2.Guangxi Medical University, Nanning
530021, China)
ABSTRACT: OBJECTIVE To observe the effect of water extracts from Helicteres angustifolia (WHA) on excreting HBsAg
and HBeAg of HepG2.2.15 cells. METHODS The toxicity of WHA on HepG2.2.15 cells was detected by means of MTT. The
inhibitory effects of WHA on HepG2.2.15 cells excreting HBsAg and HBeAg were evaluated with method of enzyme-linked
immunosorbent assay(ELISA). RESULTS The half toxic concentration (TC50) of WHA on HepG2.2.15 cells was 482.1 mg·L−1.
The half inhibitory concentration (IC50) of WHA on HBsAg was 7.3 mg·L−1, the trealment index (TI) of WHA on HBsAg was 66,
and the IC50 of WHA on HBeAg was 14.6 mg·L−1, TI was 33. CONCLUSION WHA can significantly inhibit HBV in vitro,
and is a lower toxic drug.
KEY WORDS: Helicteres angustifolia; HepG2.2.15 cell; HbsAg; HBeAg
乙型肝炎是由 HBV 引起的，以肝脏炎性病变
为主的一种传染性疾病，对乙型肝炎病毒引起的
慢性肝病尚无理想的治疗方法。目前，中草药抗
病毒已成为国内、外研究的热点[1]。本课题组多年
来一直致力于发掘广西特色中草药用于抗乙型肝
炎的研究，首次成功建立了广西麻鸭乙肝动物模
型，实验证实该品种麻鸭易感染，其病程较规律，
病毒血症持续时间较长且较稳定，无明显的自然
转阴现象，保证了模型的稳定性和可靠性，并先
后利用该模型开展了大量的抗乙肝中药的筛查研
究工作[2-4]。此外，体外细胞模型因其实验周期较
短，试剂用量少等优点，而被广泛用于药物的高
通量初筛，前期利用 HepG2.2.15 细胞模型筛查了
几十种广西民族习用抗乙肝草药[5-7]，山芝麻即是
本课题组目前重点研究的民族药之一。前期实验
发现山芝麻能保护 CCl4 所致小鼠肝损伤，具有显
著的抗脂质过氧化作用[8]，为进一步研究其是否具
有抗乙肝病毒作用奠定了前期研究基础。
山 芝 麻 系 梧 桐 科 植 物 山 芝 麻 Helicteres
angustifolia L.的根，能清热解毒，主要用于感冒发
热、肺热咳嗽、咽喉肿痛、麻疹等。至今，对山
芝麻公开报道的研究主要集中在其化学成分的分
离、鉴定方面，其药效学研究很少。本研究以
HepG2.2.15 细胞模型，探讨山芝麻对乙型肝炎病
毒的影响，首次评价山芝麻对 HBsAg 和 HBeAg
的抑制作用。
1 材料与试药
1.1 仪器
CO2 孵箱(美国 ThermoForma 公司)；Model450
自动酶标仪(美国 Bio-Rad 公司)。
基金项目：广西教育厅自然科学基金项目(200911MS28)
作者简介：黄权芳，女，硕士，中药师 Tel: (0771)5645433 E-mail: hqf00@163.com *通信作者: 林兴，男，硕士，副教授
Tel: (0771)5358342 E-mail: gxLx60@163.com
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2011.07.002
中国现代应用药学 2011 年 7 月第 28 卷第 7 期 Chin JMAP, 2011 July, Vol.28 No.7 ·595·
1.2 试药
山芝麻经广西中医学院第一附属医院药学部
黄权芳中药师鉴定为梧桐科植物山芝麻 Helicteres
angustifolia L.的根，其水提物由广西医科大学药理
学教研室和广西医学科学实验中心自行提取。
HBsAg(乙型肝炎表面抗原)和 HBeAg(乙型肝炎 E
抗原)酶联免疫检测试剂盒(上海荣盛生物技术有
限公司)。HepG2.2.15 细胞株，购自北京医科大学
第一附属医院病毒研究所，本室自行传代，定期
用 G418(一种筛选抗生素)筛选。拉米夫定(中国苏
州葛兰素史克制药有限公司，规格：100 mg，批
号：2007090016)。RPMI 1640 培养基(美国 Gibco
公司，批号：13200-035)。小牛血清(美国 Gibco
公司，批号：16000-036)。G418(美国 Sigma 公司，
批号：108321-42)。
2 方法与结果
2.1 山芝麻含药培养液的配制
山芝麻饮片 10 g，加 10 倍量水提取 2 次，每
次 1.5 h，合并提取液，浓缩成 100 mL(相当于生
药 100 g·L−1)，经 0.45 μm 微孔滤膜，再经 0.22 μm
微滤膜过滤除菌后，即得山芝麻水提物母液，置
4 ℃冰箱保存备用。实验时用完全培养液将母液稀
释成所需终浓度的应用液。
2.2 山芝麻的细胞毒性实验(MTT 法)
取 HepG2.2.15 细胞 1 瓶，用胰酶消化后制备
成 单 细 胞 悬 液 ， 计 数 后 调 整 细 胞 浓 度 至
2×104 个·mL−1，加入 96 孔培养板中(每孔 100 μL)，
置 CO2 孵箱(37 ℃，5%CO2)中培养 24 h 后，细胞
贴壁且生长良好，吸除全部培养液，加入用完全
培养液将山芝麻稀释成 1 000，500，250，125，
62.5 mg·L−1 的应用液 100 μL，每个质量浓度设 6
个复孔。连续培养 72 h，培养结束前 4 h，每孔加
入 MTT 10 μL，于 CO2 孵箱中继续培养。4 h 后小
心吸弃上清液后，每孔加 DMSO 100 μL，微量振
荡器振荡 5 min，使结晶紫完全溶解。自动酶标仪
(检测波长 570 nm，参考波长 630 nm)读取各孔 OD
值，记录结果。按 Reed-Muench 法计算半数细胞
毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)。
2.3 ELISA 法定量检测 HBsAg 和 HBeAg
将 2×104 个·mL−1 的细胞悬液加入 24 孔细胞
培养板，每孔 1 mL，置 CO2 孵箱中培养 24 h 后，
细胞贴壁且生长良好，除去全部培养液，根据细
胞毒性试验结果，分别加入以下 5 个终质量浓度
为：100，50，25，12.5，6.25 mg·L−1 的应用液，
每个浓度设 3 个复孔。以等量的完全培养液为空
白对照，以拉米夫定为阳性对照药。连续培养 72 h
后，分别吸出上清液置于 1.5 mL 灭菌 Eppendorf
管中，−20 ℃保存，统一待检。
采用酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked
immunosorbent assay, ELISA)检测，结果以抑制率
表示，药物对抗原的抑制百分率=｛1−[(实验孔抗
原 OD 值−空白 OD 值)/(对照孔抗原 OD 值−空白
OD 值)]｝×100%，并按 Reed-Muench 法计算半数
抑制浓度(IC50)[9]。
2.4 药效评价
一般用治疗指数(TI)来评价药物的临床应用
前景。TI=TC50/IC50，TI>2 为药物有效低毒，1
2.5 统计学处理
数据以 sx ± 表示，统计学采用 SPSS 13.0 软
件，配对 t 检验。
2.6 结果
2.6.1 药物毒性实验 不同稀释倍数的药物加于
单层 HepG2.2.15 细胞上，连续培养 72 h 后，观察
细胞生长形态，检测有无病变，并以 MTT 法测定
细胞的活力，按照 Reed-Muench 法计算得出：
TC0=105.7 mg·L−1，TC50=482.1 mg·L−1，即当山芝
麻药物浓度≤TC0(105.7 mg·L−1)时，HepG2.2.15 细
胞无论在形态上还是数量上与空白对照没有明显
差异，对 HepG2.2.15 细胞毒性低。结果见表 1。
表 1 山芝麻对 HepG 2.2.15的生长抑制作用(n=6)
Tab 1 Inhibitory effect of Helicteres angustifolia on HepG
2.2.15 cell (n=6)
组别 终浓度/mg·L−1 OD570( sx ± ) 抑制率/%
山芝麻 1 000.0 0.686±0.075 81.3
500.0 1.975±0.493 41.4
250.0 2.891±0.603 12.9
125.0 3.137±0.582 5.3
62.5 3.283±0.616 0.8
细胞对照 − 3.309±0.431 −
拉米夫定 1 000.0 0.805±0.091 76.9
500.0 1.643±0.237 50.2
250.0 2.054±0.427 37.1
125.0 3.029±0.513 5.9
62.5 2.793±0.441 13.5
细胞对照 − 3.216±0.602 −
空白对照 − 0.084±0.007 −
2.6.2 病毒抗原抑制试验 HepG2.2.15在 24孔培
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养板上生长至单层，加入不同稀释倍数的山芝麻，
同时设细胞对照组和药物对照组，培养 72 h，分
别取上清液测定 HBsAg 和 HBeAg，并与细胞对照
组比较，计算抑制率、IC50 以及 TI。
山芝麻对 HepG2.2.15 细胞分泌 HBsAg、
HBeAg 有明显抑制作用，其作用与浓度呈明显的
正相关。山芝麻浓度对细胞分泌 HBsAg 的抑制率
与细胞对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，对
HBsAg 的 IC50=7.3 mg·L−1，TI=66。山芝麻浓度对
细胞分泌 HBeAg 的抑制率与细胞对照组比较差异
有统计学意义 (P<0.05)，其 IC50=14.6 mg·L−1，
TI=33。结果见表 2。
表 2 山芝麻对 HBsAg、HBeAg的抑制作用(n=3)
Tab 2 Inhibitory effect of Helicteres angustifolia on HBsAg and HBeAg(n=3)
HBsAg HBeAg 组别 终浓度/mg·L−1
OD570( sx ± ) 抑制率/% OD570( sx ± ) 抑制率/%
山芝麻 100.00 0.141±0.0572) 81.8 0.892±0.0852) 71.3
50.00 0.207±0.0432) 70.2 1.083±0.0912) 64.8
25.00 0.263±0.0662) 60.3 1.738±0.1442) 42.3
12.50 0.325±0.0711) 49.4 1.821±0.1472) 39.5
6.25 0.413±0.0481) 33.9 2.513±0.1251) 15.8
拉米夫定 100.00 0.288±0.0372) 55.9 1.016±0.0972) 67.1
50.00 0.313±0.0691) 51.5 1.695±0.1112) 43.8
25.00 0.386±0.0821) 38.6 2.258±0.1092) 24.5
12.50 0.458±0.055 25.9 2.456±0.1311) 17.7
6.25 0.481±0.073 21.9 2.735±0.128 8.2
细胞对照 − 0.605±0.088 − 2.974±0.136 −
空白对照 − 0.038±0.004 − 0.055±0.002 −
注：与细胞对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01
Note: Compared with normal cell control group, 1)P<0.05, 2)P<0.01
3 讨论
HepG2.2.15 细胞系是通过将重组 HBV-DNA
直接导入受体细胞而建立的转染细胞株，该细胞
能长期、稳定地向培养上清液中分泌 HBsAg、
HBeAg 和 HBV 颗粒及对人有感染性，可表达乙肝
病毒的全部标志，HepG2.2.15 细胞是当前体外筛
选抗 HBV 药物和药物评价的较好细胞模型，已被
广泛用于抗乙型肝炎病毒药物的体外研究[9]。
本研究以 HepG2.2.15 细胞株作为对象，观察
不同质量浓度山芝麻对 HepG2.2.15 细胞的毒性作
用，提示山芝麻浓度≤ 105.7 mg·L−1 时，对
HepG2.2.15 细胞的毒性低。而山芝麻对抗原抑制
作用的实验发现，药物作用 72 h 后，山芝麻对
HepG2.2.15 细胞分泌 HBsAg、HBeAg 有明显抑制
作用，与细胞对照组比较差异有统计学意义
(P<0.05)，其作用与浓度呈明显的正相关。本实验
初步表明山芝麻体外有明显的抗 HBV 的作用，且
毒性较低，至于其通过何种途径实现其抑制
HepG2.2.15 细胞分泌 HBeAg 和 HBsAg，还有待于
进一步研究；而其具有抑制作用的化学活性成分
也有待于进一步筛选。
REFERENCES
[1] TANG A, CHEN Z N, HUANG R B, et al. Inhibitory effect of
Yiganzhuanyinsan on duck hepatitis B virus [J]. Chin J Mod
Appl Pharm(中国现代应用药学), 2010, 27(6): 476-479.
[2] HUANG R B, HUANG Q F, ZHANG S J, et al. Study of the
terpenoids of Liuyueqing on duck hepatitis B virus in
ducklings [J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med(中药药理与临
床), 2010, 26(1): 37-39.
[3] ZHANG S J, JIAO Y, LIN X, et al. Inhibitory effect of
compound Liuyuexue on duck hepatitis B virus [J]. J Chin
Pharm(中国药房), 2008, 19(33): 2563-2565.
[4] ZHANG S J, CHEN Z N, LI Y W, et al. Inhibitory effect of
ethanol extract of Liuyueqing on heoatitis B virus in duck [J].
Chin J Public Health(中国公共卫生), 2009, 25(5): 543-544.
[5] LIN X, HUANG Q F, ZHANG S J, et al. The inhibitory effect
of the serum containing Liuyueqing on HBV DNA in the
HepG2.2.15 cells [J]. J Chin Pharm(中国药房), 2009, 20(24):
1847-1849.
[6] LIN X, HUANG Q F, ZHANG S J, et al. Effect of the
terpenoids of Liuyueqing on HBsAg and HBeAg in the
HepG2.2.15cells [J]. Chin Hosp Pharm J(中国医院药学杂志),
2009, 29(17): 1445-1448.
[7] LIN X, HUANG Q F, ZHANG S J, et al. The inhibitory effect
of the serum containing Liuyueqing on the expression of
HBsAg and HBeAg in the HepG2.2.15 cells [J]. Lishizhen
Med Mater Med Res(时珍国医国药), 2009, 20(7): 1603-1604.
[8] LIN X, HUANG Q F, ZHANG S J, et al. Influence of the
water extract from helicteres angustifolia on lipid peroxidation
induced by CCl4 in mice [J]. Chin J Exp Tradit Med Form(中
中国现代应用药学 2011 年 7 月第 28 卷第 7 期 Chin JMAP, 2011 July, Vol.28 No.7 ·597·
国实验方剂学杂志), 2010, 16(10): 147-149.
[9] ZHANG S J, HUANG C X, XIE H Y, et al. The inhibitory
effect of compound Liuyuexue on HBsAg and HBeAg in the
HepG2.2.15 cells [J]. Chin Hosp Pharm J(中国医院药学杂志),
2007, 27(6): 715-717.
收稿日期：2010-10-29
玳玳果黄酮滴丸对高脂血症大鼠的降血脂作用研究
邱红鑫，陈丹*，刘永静，吴晓青，任瑞琴，程清(福建中医药大学药学院，福州 350108)
摘要：目的 建立大鼠高血脂模型，观察玳玳果黄酮滴丸对高脂血症大鼠的降血脂作用。 方法 选用 SD 大鼠 60 只，
♂，10只作为空白对照组，喂饲普通饲料，其余高脂饲料喂饲，建立高脂血症模型，测定用药前后血清中胆固醇(TC)、
甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)的含量；同时取肝脏切片，HE 染色，观察玳玳果黄酮滴
丸的降血脂作用。结果 玳玳果黄酮滴丸各剂量组均能明显降低高血脂大鼠血清中 TC、TG和 LDL-C含量；能明显升高
大鼠血清中 HDL-C含量。病理切片结果显示，玳玳果黄酮滴丸能够明显减轻肝脏的脂肪变性。结论 玳玳果黄酮滴丸对
大鼠高脂血症有明显的预防作用，并能够阻止高脂血症大鼠的肝脏脂肪变性。
关键词：玳玳果黄酮滴丸；降血脂作用；脂肪肝
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2011)07-0597-05
Study on Antiatheroscloresis Effects of Daidai Flavones Dropping Pills on Hyperlipidemia Rats
QIU Hongxin, CHEN Dan*, LIU Yongjing, WU Xiaoqing, REN Ruiqin, CHENG Qing(College of Pharmacy,
Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350108, China)
ABSTRACT: OBJECTIVE Establish the hyperlipidemia rats model to observe antiatheroscloresis effects of daidai flavones
dropping pills on hyperlipidemia rat. METHODS Sixty SD rats were grouped randomly. Among them, 10 were in control
group, fed with conventional forage, while others were fed with high fatty forage, establish the hyperlipidemia model. The
content of cholesterol (TC), triglycerides (TG), low-density lipoprotein (LDL-C) and high-density lipoprotein (HDL-C) in serum
were determined. Take the liver, HE dyeing, to study the role of the daidai flavones dropping pills on lower cholesterol in
hyperlipidemia rats. RESULTS The dropping pills could significantly lower the high blood fat rats’ serum TC, TG and LDL-C
content, could obviously increase the rats’ serum HDL-C content. Furthermore, fatty degeneration was eased by daidai flavones
dropping pills according to the pathological result. CONCLUSION The daidai flavones dropping pills have good
precautionary and therapeutic effect on hyperlipemia rats, which can prevent fatty degeneration among rats.
KEY WORDS: daidai flavones dropping pills; antiatheroscloresis effects; fatty liver disease
玳玳又称代代(Citrus Aurantium L. var daidai)
是芸香科柑桔亚属植物，为酸橙的变种，在我国福
建、四川、浙江等地都有栽培[1-4]。具有行气宽中、
消食、化痰的功能，民间将其用作枳壳入药。本课
题组前期研究结果[5-8]表明，玳玳果总黄酮有效部位
具有明显的体外抗氧化作用，本实验采用大鼠高脂
血症动物模型[9-11]，研究将玳玳果总黄酮有效部位
制备成玳玳果黄酮滴丸后的体内降血脂作用。
1 仪器与试药
1.1 仪器
卓越 360 全自动生化仪(上海科华实验系统有
限公司)；YT-7FB 型生物组织摊片机(湖北省孝感市
亚光医用电子技术有限公司)；Microtec cut 4060(上
海精密科学仪器有限公司)；ZT-14S(双吊篮)生物自
动脱水机；YB-6LF 生物组织石蜡包埋机。
1.2 试药
玳玳果黄酮滴丸(自制，平均丸重约为0.04 g，
总黄酮含量约为130~150 mg·g−1)；山楂精降脂片
(福建汇天生物药业有限公司，批号：20090911)；
总胆固醇测定试剂盒(液体)(氧化酶法)(上海科华
基金项目：福建省自然科学基金项目(2008J0095)；福建省科技计划重点项目(2010Y0030)；福建省科技计划项目(2010Y2004)
作者简介：邱红鑫，女，硕士生 Tel: 13559101980 E-mail: qiuhongxin@163.com *通信作者：陈丹，女，博士，教授
Tel: 13515026709 E-mail: gscd@tom.com