全 文 ：书收稿日期:2015－06－25 修回日期:2015－12－09
基金项目:福建省自然科学基金资助项目(2013J01360)．
作者简介:谢勇平(1978－) ，男，讲师．研究方向:天然产物活性成分提取．Email:xypnm@ 163．com．通讯作者李清禄(1957－) ，男，教授．研究方
向:天然产物活性成分提取．Email:lql3388@ 126．com．
楮头红皂苷的抑菌效果和抗乙肝病毒活性
谢勇平1，2，李宇翔3，张文连1，申爱丽1，李清禄1，2
(1．福建农林大学生命科学学院，福建 福州 350002;2．福建农林大学省级动物药物工程实验室，
福建 福州 350002;3．福建省疾病控制中心，福建 福州 350001)
摘要:将楮头红醇提取物用正丁醇萃取，萃取物经硅胶柱层析和制备型高效液相色谱(PHPLC)纯化得一纯净物，通过 IＲ、
ESI-MS和13C NMＲ谱等分析，鉴定为呋甾烷型甾体皂苷，命名为楮头红皂苷 A(SWSA) ，系首次从楮头红中提取得到．抑菌
试验结果表明:SWSA对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、耶尔森氏菌和嗜水气单胞菌均有较好的抑制效果，其最小抑菌浓
度分别为 2．8、3．3、2．5和 2．2 mg·mL－1;对大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌的抑制效果不明显．通过 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，
5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)试验检测 SWSA对 HepG2．2．15 细胞的毒性，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组细胞
培养上清液中 HBsAg和 HBeAg的水平，综合评价不同含量 SWSA 体外抗乙肝病毒(HBV)的活性．结果表明，SWSA 处理
HepG2．2．15细胞后，HBsAg和 HBeAg的表达均呈时间和剂量依赖性抑制，治疗指数分别为 6．43和 4．23，预示 SWSA具有一
定的体外抗 HBV活性．
关键词:楮头红;皂苷;抑菌活性;HepG2．2．15细胞;乙肝病毒
中图分类号:Ｒ285 文献标识码:A 文章编号:1671-5470(2016)03-0296-06
DOI:10．13323 / j．cnki．j．fafu(nat．sci．)．2016．03．010
Bacteriostasis and anti-HBV activities of saponins
from Sarcopyramis nepalensis
XIE Yongping1，2，LI Yuxiang3，ZHANG Wenlian1，SHEN Aili1，LI Qinglu1，2
(1．College of Life Science，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou，Fujian 350002，China;2．Provincial
Engineering Laboratory of Animal Pharmaceuticals，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou，Fujian
350002，China;3．Fujian Center for Disease Control and Prevention，Fuzhou，Fujian 350001，China)
Abstract:To elucidate the pharmacological properties of Sarcopyramis nepalensis Wall for clinical application，steroidal saponin
monomer was extracted by n-butyl alcohol and filtered via silica gel column chromatography and preparative high performance liquid
chromatography (PHPLC)． Molecular structure of the monomer was identified by infrared spectroscopy (IＲ) ，electrospray ionization
mass spectrometry (ESI-MS) ，and 13C nuclear magnetic resonance (NMＲ) ，and followed by bacteriostasis and anti-HBV activities
tests via filter paper method． The monomer was identified as furostan steroidal saponin and named S．nepalensis saponin A (SWSA)．
SWSA had relatively strong bactericidal capacity to Staphylococcus aureus，Aeromonas hydrophila and Bacillus subtilis，with the mini-
mal inhibitory concentration (MIC)being 2．8，3．3，2．5，2．2 mg·mL－1，respectively． Although，its bactericidal capacity to Esche-
richia coli and Pseudomonas aeruginosa were relatively weak． Subsequently，anti-HBV activities of SWSA on hepatitis B virus
(HBV)in vitro was evaluated by proliferation level of cell line 2．2．15 and the contents of HBsAg and HBeAg via enzyme linked im-
munosorbent assay (ELISA)． Ｒesults showed the inhibitory effect of SWSA on HBV was both dose and time dependent，with the
therapeutic index on HBsAg and HBeAg being 6．43 and 4．23． To summarize，SWSA showed inhibitory efficacy on HBV in vitro to
some extent．
Key words:Sarcopyramis nepalensis;saponin;antimicrobial activity;HepG2．2．15 cell;hepatitis B virus
乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是一个世界性的健康问题，它不仅可以导致急、慢性 HBV 感
染，还与 75%～90%的原发性肝癌相关．目前临床上用于治疗 HBV感染的药物除干扰素外，还有众多化学
合成药物，如核苷类似物阿糖腺苷、拉米夫定、泛昔洛韦、阿地福韦和恩他卡韦等．这些药物已在实验室和
临床应用中被证实能显著抑制 HBV DNA的复制或抑制 HBsAg 和 HBeAg 的表达与分泌［1－4］．然而这些药
福建农林大学学报(自然科学版) 第 45卷 第 3期
Journal of Fujian Agriculture and Forestry University (Natural Science Edition) 2016年 5月
物存在一定的不足，如耐药性及副作用等，停药后发生谷丙转氨酶(ALT)反跳，甚至发生重症肝炎［5］，上述
种种不足使得在临床应用上受到极大的限制．随着天然植物及其提取物抗病毒和调节免疫等有效成分研
究的不断深入，人们发现天然药物具有对人体低毒副作用和不易产生耐药性等显著特点．针对目前病毒性
肝炎治疗中的困难，寻找与证实有效天然药物已经成为临床治疗病毒性肝炎的希望与重要手段．传统中草
药品种繁多，已广泛应用于临床治疗慢性乙型肝炎并取得一定疗效［6］．
楮头红(Sarcopyramis nepalensis Wall)属野牡丹科肉穗草属，主要分布于中国的福建、台湾、四川、云
南、江西、广西、广东、湖北和贵州等地［7］．楮头红主治肺热咳嗽和急性肝炎，在福建民间广泛用于治疗急、
慢性肝炎，疗效显著［8］．药理活性研究表明，楮头红提取物具有多种药理活性，如正丁醇部位具有较强的保
肝护肝、抗病毒和抑菌作用等活性［9］．迄今为止，已从楮头红提取分离得到很多具有很好药理活性的物质，
如 β-谷甾醇、胡萝卜苷、山柰酚、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芦丁、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷［10－11］
和多糖［12］等．经分离、鉴定，正丁醇部位的主要活性物质为皂苷类物质，本试验初步探讨该皂苷类物质的
结构、抗乙肝病毒和抑菌活性，并测定了其最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC) ，旨在为
楮头红药理活性成分的筛选和临床应用提供参考．
1 材料与方法
1．1 材料
楮头红皂苷 A(S．nepalensis saponin A，SWSA)为褐色粉末，由本实验室提取分离．
大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas
aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和耶尔森氏菌(Yersinia-
van loghem)由福建农林大学微生物实验室提供．分别将各菌株接种至装有 5 mL的营养肉汤培养基的试管
中，于 37 ℃培养 18 h．
HBV DNA克隆转染人肝癌细胞(HepG2)的 2．2．15细胞系，由美国 Mount Sinai医学中心构建，北京军
事医学科学院引进并保藏，引进后进行传代培养，置 5% CO2 的培养箱于 37 ℃培养;培养基为 DMEM，在
培养基中添加 10%胎牛血清和 200 mg·mL－1 G418;DMEM培养基和胎牛血清购自 GIBCO公司;胰蛋白酶
和 L-谷氨酰胺购自 Amresco公司;G418购自 Promega公司;青霉素和链霉素购自中国华北制药厂;二甲基
亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)购自 Sigma公司;HBsAg和 HbeAg ELISA检测试剂盒购自上海科华生物工
程公司;拉米夫定购自苏州葛兰素史克制药有限公司，用 DMSO适量溶解后，DMEM稀释配制成试验所需
含量，置 4 ℃的冰箱保存(临用前用 0．22 μm滤膜过滤) ;其他所需化学试剂均为分析纯．
1．2 SWSA的制备
楮头红全草粉末用 95%乙醇于 80 ℃回流浸提 3次，每次 3 h，合并滤液减压浓缩成浸膏．浸膏用水混
悬，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯及水饱和的正丁醇萃取，收集正丁醇层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥得楮
头红粗皂苷．粗皂苷经硅胶柱层析(CCl3 ∶ CH3OH = 2 ∶ 1)及制备型高效液相色谱(PHPLC)梯度洗脱，收
集洗脱液冷冻干燥得褐色粉末样品．PHPLC条件为:ULtimate XB-C18 色谱柱(5 μm，10 mm×250 mm) ;紫
外检测器的检测波长分别为 203 和 210 nm;流速为 2 mL·min－1;温度为 23 ℃;以乙腈与水的混合溶液
(8 ∶ 92～20 ∶ 80)为流动相．
1．3 SWSA结构的鉴定
样品经红外光谱、质谱和核磁共振谱进行结构表征．
1．4 SWSA供试液制备
准确称取一定量的 SWSA，用生理盐水溶解，过 0．22 μm 的微孔滤膜，除菌，配制成含量为 10 mg·
mL－1的皂苷供试液，密封待用．
1．5 SWSA抑菌试验
1．5．1 抑菌圈试验 在无菌操作条件下，用移液枪吸取 0．1 mL不同菌液置营养琼脂平板上，涂布均匀．每
个平板上放 3个蘸有供试液的滤纸片和一个蘸有庆大霉素(单位为 10－4)的滤纸片，做好标记．每个菌液设
·792·第 3期 谢勇平等:楮头红皂苷的抑菌效果和抗乙肝病毒活性
3次平行．以在平板上贴有无菌蘸有供试液的滤纸片为空白对照．置 37 ℃的生化培养箱中倒置培养 24 h．
1．5．2 MIC的测定 供试液过 0．22 μm的微孔滤膜，除菌，采用 10倍和 2倍稀释法测定 MIC．
(1)10倍稀释法:在试管中加入 1 mL营养肉汤、0．1 mL稀释好的菌液和 1 mL 药液．阳性对照只加菌
液不加药液，阴性对照只加供试液不加菌液．
(2)2倍稀释法:依据 10倍稀释法的结果，进一步确定 SWSA 的 MIC．药液用生理盐水倍比稀释，使样
品浓度的梯度分别为 1 ∶ 2、1 ∶ 4、1 ∶ 8、1 ∶ 16和 1 ∶ 32．
供试液置 37 ℃的恒温培养振荡器培养 18 h后，肉眼观察试管中的液体是否浑浊．若试管中的液体透
明澄清，表明无菌生长;若试管中的液体浑浊，表明有菌生长．以肉眼所见试管中不浑浊的最低供试液含量
为 SWSA的 MIC．
1．6 药物毒性的测定
采用 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4，5-dimethyl-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2-H-
tetrazolium bromide，MTT)法测定药物毒性．取对数生长期的 HepG2．2．15细胞按 105 个·mL－1接种于 96孔
培养板中，每孔 0．1 mL，置于 5% CO2、37 ℃的培养箱中过夜贴壁后，将供试液用完全培养基配制成相应含
量 (10、5、2．5、1．25、0．625、0．312 mg·mL－1)后对原培养基进行置换，每个含量设 5 个复孔，每孔 0．1 mL，
同时设无药细胞对照和阳性对照(2 mg·mL－1拉米夫定)．加药后培养 4 和 8 d，弃上清液用 MTT 染色，每
孔加 0．1 mL 1 mg·mL－1 MTT无血清培养液，孵育 4 h，弃上清液，每孔加 150 μL DMSO，采用酶标仪(波长
570 nm)测定各孔的光密度(D) ，试验重复 3次．计算细胞的存活率，利用软件计算半数毒性浓度(50% tox-
icity concentration，TC50)．
1．7 HepG2．2．15细胞 HBsAg和 HBeAg表达抑制率的 ELISA检测
将上述方法处理的 HepG2．2．15细胞进行分组试验，在药物作用 2、4、6、8、10 和 12 d 后分别吸取细胞
上清液，按 HBsAg和 HBeAg检测试剂盒说明书操作，用酶标仪检测 450 nm波长处的 D，并计算对 HBsAg
和 HBeAg的抑制率，利用软件计算半数抑制浓度(50% inhibiting concentration，IC50)．
治疗指数(therapeutic index，TI)按公式计算:TI=TC50 / IC50 ．TI＞2为有效低毒，1＜TI≤2为低效低毒，TI
≤1为毒性作用［13－14］．
1．8 数据处理
试验数据采用 SPSS 13．0软件进行分析，结果以平均值±标准差表示，并进行多因素方差分析，P＜0．05
有统计学意义．
2 结果与分析
2．1 SWSA的结构
红外光谱图显示，SWSA 的特征吸收峰分别为 3 378、1 734、1 646、1 409 和 1 235 cm－1．其中，3 378
cm－1为 O－H伸缩振动区，1 734 cm－1为羰基，1 646 cm－1为双键的伸缩振动．ESI-MS负离子质谱准分子离子
峰 577(M+－H) ，表明本品分子质量为 578，m/z 445(M+ －H－132)为脱掉 1 个 132 质量单位糖的碎片．
13C NMＲ谱中 C－18、C－19、C－21和 C－27的化学位移分别为 18．1、16．8、16．7和 17．9，表明化合物为甾体皂
苷．C－5和 C－6的化学位移分别为 144．4和 128．0，表明 C－5和 C－6有双键．C－12信号(δ176．2)表明 C－12
位连有羰基(表 1)．与薯蓣皂苷元［15］对应的 C－26 信号相比，SWSA 的 C－26 化学位移为 73．8，向低场位
移，且红外光谱图上无螺缩酮特征吸收，可推测 SWSA 的皂苷元部分为 F 环开环．综上推断 SWSA 为呋甾
烷型甾体皂苷，分子式为 C32H50O9，其结构为 3-O-(β-D-戊糖苷基)-19，23-三醇-12-酮，结构图如图 1所示．
2．2 SWSA的抑菌效果
表 2表明:SWSA对嗜水气单胞菌、耶尔森氏菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌作用后，产生明显的
抑菌圈;对大肠埃希氏菌抑制效果不明显;对铜绿假单胞菌没有抑制作用．用 10 倍和 2 倍稀释法逐步确定
SWSA对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、耶尔森氏菌和嗜水气单胞菌的 MIC 分别为 2．8、3．3、2．5 和 2．2
mg·mL－1．
·892· 福建农林大学学报(自然科学版) 第 45卷
表 1 SWSA的13C NMＲ谱数据
Table 1 13C NMＲ data on SWSA
苷元部分
C C C
糖部分
C
1 32．1 10 35．4 19 16．8 1 105．1
2 23．0 11 20．4 20 40．1 2 81．8
3 77．8 12 176．2 21 16．7 3 83．2
4 39．9 13 42．1 22 105．2 4 72．0
5 144．4 14 52．3 23 31．0 5 77．8
6 128．0 15 35．6 24 27．3
7 31．4 16 81．8 25 33．6
8 39．6 17 64．6 26 73．8
9 49．8 18 18．1 27 17．9
Ｒ=β-D-戊糖基．
图 1 SWSA的结构
Fig．1 Molecular structure of SWSA
表 2 SWSA对不同菌株的抑制效果1)
Table 2 Inhibitory effect of SWSA to different bacterial strains
菌株
抑菌圈直径 /mm
SWSA 庆大霉素(10－4)
金黄色葡萄球菌 8．23±0．31 10．74±0．55
大肠埃希氏菌 6．42+0．22 14．00±0．50
铜绿假单胞菌 － －
耶尔森氏菌 10．81±0．32 13．01±0．62
嗜水气单胞菌 10．53±0．62 12．03±0．14
枯草芽孢杆菌 8．14±0．31 11．02±0．49
1)滤纸片直径为 6 mm，－表示无抑菌效果．
2．3 抗乙肝病毒的效果
2．3．1 HepG2．2．15细胞分泌 HBsAg和 HBeAg的规律 在试验条件下，供试 HepG2．2．15 细胞于第 3 天开
始检测到有 HBsAg和 HBeAg的分泌，在第 8天达到高峰，以后逐渐减弱，持续到第 13天．
2．3．2 SWSA对 HepG2．2．15细胞增殖的影响 MTT试验检测结果显示:与对照组相比，拉米夫定阳性对
照组和 SWSA对 HepG2．2．15细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性 (P＜0．05) ;与拉米夫定阳性对照组比
较，SWSA的含量为 5．0 mg·mL－1时对细胞增殖的抑制作用强于拉米夫定，含量为 2．5 mg·mL－1时弱于拉
米夫定(P＜0．05) (表 3)．
2．3．3 SWSA 对 HepG2．2．15 细胞上清液中 HBsAg 和 HBeAg 含量的影响 HepG2．2．15 细胞上清液中
HBsAg和 HBeAg 含量的检测结果(表 4、5)显示:与对照组相比，拉米夫定阳性对照组和 SWSA 对
HepG2．2．15细胞 HBsAg和 HBeAg两种抗原的表达均呈剂量、时间依赖性抑制;与拉米夫定阳性对照组比
较，SWSA含量为 2．5 mg·mL－1时对 HepG2．2．15 细胞上清液中 HBsAg 和 HBeAg 表达的抑制效果均优于
拉米夫定．通过对 TI的分析比较，SWSA作用 8 d，TI均大于 2，呈有效低毒．
·992·第 3期 谢勇平等:楮头红皂苷的抑菌效果和抗乙肝病毒活性
表 3 SWSA对 HepG2．2．15细胞增殖的影响1)
Table 3 Effect of SWSA on the proliferation of cultured HepG2．2．15 cell
组别
第 4天
D570 nm 细胞存活率 /%
第 8天
D570 nm 细胞存活率 /%
无药细胞对照 1．48±0．08
空白对照 0．18±0．02
阳性对照(2 mg·mL－1拉米夫定) 0．80±0．04* 47．70* 0．56±0．02 29．23*
10．000 mg·mL－1 SWSA 0．49±0．04 23．85＊▲ 0．22±0．04 3．42＊▲
5．000 mg·mL－1 SWSA 0．77±0．04 45．38＊▲ 0．54±0．03 27．69＊▲
2．500 mg·mL－1 SWSA 0．99±0．04 62．07＊▲ 0．68±0．04 38．46＊▲
1．250 mg·mL－1 SWSA 1．29±0．06 84．39＊▲ 1．09±0．04 70．00＊▲
0．625 mg·mL－1 SWSA 1．40±0．04 92．79＊▲ 1．31±0．05 86．92＊▲
0．312 mg·mL－1 SWSA 1．48±0．03 98．58＊▲ 1．45±0．05 97．69＊▲
1)* 表示与对照组比较差异显著(P＜0．05) ;▲表示与阳性对照组比较差异显著(P＜0．05)．
表 4 SWSA在 HepG2．2．15细胞培养中对 HBsAg的抑制作用1)
Table 4 Inhibitory effect of SWSA on HBsAg in cultured HepG2．2．15 cell
组别
第 4天
D570 nm 抑制率 /%
第 8天
D570 nm 抑制率 /%
无药细胞对照 0．95±0．04 1．65
空白对照 0．02±0．01 0．05
阳性对照(2 mg·mL－1拉米夫定) 0．36±0．03 69．00* 0．45±0．02 71．85*
10．000 mg·mL－1 SWSA 0．24±0．02 76．45＊▲ 0．13±0．03 94．65＊▲
5．000 mg·mL－1 SWSA 0．37±0．03 62．86＊▲ 0．27±0．05 85．79＊▲
2．500 mg·mL－1 SWSA 0．43±0．01 56．63＊▲ 0．39±0．03 78．28＊▲
1．250 mg·mL－1 SWSA 0．56±0．02 42．85＊▲ 0．51±0．05 70．54＊▲
0．625 mg·mL－1 SWSA 0．67±0．03 31．28＊▲ 0．73±0．04 56．67＊▲
0．312 mg·mL－1 SWSA 0．74±0．05 23．87＊▲ 1．06±0．06 36．00＊▲
0．156 mg·mL－1 SWSA 0．86±0．04 11．52＊▲ 1．23±0．04 24．96＊▲
1)* 表示与对照组比较差异显著(P＜0．05) ，▲表示与阳性对照组比较差异显著(P＜0．05) ;第 4和 8天的 TI分别为 1．79和 6．43．
表 5 SWSA在 HepG2．2．15细胞培养中对 HBeAg的抑制作用1)
Table 5 Inhibitory effect of SWSA on HBeAg in cultured HepG2．2．15 cell
组别
第 4天
D450 nm 抑制率 /%
第 8天
D450 nm 抑制率 /%
无药细胞对照 0．43±0．02 0．85±0．03
空白对照 0．03±0．01 0．05±0．01
阳性对照(2 mg·mL－1拉米夫定) 0．21±0．02 68．02* 0．25±0．02 71．53*
10．000 mg·mL－1 SWSA 0．11±0．02 80．94＊▲ 0．12±0．01 91．26＊▲
5．000 mg·mL－1 SWSA 0．17±0．04 66．84＊▲ 0．20±0．04 81．41＊▲
2．500 mg·mL－1 SWSA 0．22±0．02 55．56＊▲ 0．27±0．02 72．17＊▲
1．250 mg·mL－1 SWSA 0．26±0．01 46．32＊▲ 0．35±0．01 63．31＊▲
0．625 mg·mL－1 SWSA 0．31±0．05 34．59＊▲ 0．50±0．04 44．87＊▲
0．312 mg·mL－1 SWSA 0．37±0．04 20．67＊▲ 0．61±0．05 31．56＊▲
1)* 表示与对照组比较差异显著(P＜0．05) ，▲表示与阳性对照组比较差异显著(P＜0．05) ;第 4和 8天的 TI分别为 1．95和 4．23．
3 讨论
HepG 2．2．15细胞模型是 1986年 Sureau et al［16］利用电穿孔基因转移技术以重组载体 pHoITHBV-1转
染人肝癌细胞株 HepG2，经 G418 筛选后获得的可产生高水平表达 HBsAg 和 HBeAg 的细胞株．
HepG 2．2．15细胞模型可以稳定表达 HBV基因，并支持 Dane样颗粒的包装与分泌，故本试验选取该细胞模
型探讨 SWSA抗乙肝病毒的作用．
本试验结果表明，SWSA在设定的含量范围内与无药细胞对照组相比对 HBsAg和 HBeAg 有明显的抑
制作用，且随着 SWSA含量的增加，其抑制作用增强，显示出一定的量效关系，对 HBsAg 和 HBeAg 的治疗
·003· 福建农林大学学报(自然科学版) 第 45卷
有效低毒(TI分别为 6．43 和 4．23)．但本试验结果仅揭示了 SWSA 在 HepG2．2．15 这一细胞模型上对 HB-
sAg 和 HBeAg的抑制作用，而在 HBV临床感染中，受感染肝细胞 HBV DNA的复制、HBsAg和 HBeAg的合
成均受到机体免疫功能状态及多种病理状态的影响，其变化比体外细胞水平要复杂得多．因此，还需结合
体内试验来进一步证实确定，其作用机制也有待于进一步研究．
参考文献
［1］余祥山．近年治疗乙肝药物的研究进展［J］．中国现代临床医学，2005(4) :45－46．
［2］LAGGET M，ＲIZZETTO M． Treatment of chronic Hepatitis B［J］． Current Pharmaceutical Design，2002，8(11) :953－958．
［3］GILSONＲ J，CHOPＲA K B，NEWELL A M，et al． A placebo-controlled phase Ⅰ /Ⅱ study of adefovir dipivoxil in patients
with chronic hepatitis B virus infection［J］． J Viral Hepat，1999，6(5) :387－395．
［4］BACON T H． Famciclovir，from the bench to the patient-a comprehensive review of preclinical data［J］． Int J Antimicrob A-
gents，1996，7(2) :119－134．
［5］吴健莹，谢晨．慢性乙型肝炎抗病毒治疗药物的再评价［J］．医学与哲学(临床决策论坛版) ，2010，31(8) :39－40．
［6］周艳萌．抗乙型肝炎病毒的中药研究进展［J］．时珍国医国药，2005，16(10) :1 043－1 045．
［7］江苏新医学院．中药大词典(下册) ［M］．上海:上海人民出版社，1997:2 290．
［8］陈桂菲，叶淑玲．风柜斗草药用探讨［J］．时珍国医国药，2000，11(2) :129－130．
［9］廖梅，张锦文，张勇慧．楮头红保肝护肝活性部位筛选［J］．医药导报，2010，29(5) :571－572．
［10］伏晓，樊建领，巨秦豫．楮头红化学成分的分离与鉴定［J］．中国药房，2012(7) :638－639．
［11］张锦文，陈华栋，廖梅，等．楮头红化学成分研究［J］．中国药学杂志，2011(1) :17－20．
［12］朱庆银．楮头红多糖的提取、结构及其活性研究［D］．福州:福建农林大学，2007．
［13］FＲESHNEY Ｒ I．动物细胞培养:基础技术手册［M］．4版．章静波，徐存栓，译．北京:科学出版社，2004:398－402．
［14］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［M］．3版．北京:人民卫生出版社，2002:1 757－1 758．
［15］杨如同，徐德平，唐世蓉，等．盾叶薯蓣鲜根茎中甾体皂苷的分离鉴定［J］．中草药，2008，39(4) :493－496．
［16］SUＲEAU S，ＲOMET-LEMONNE J L，MULINS J I，et al． Production of hepatitis B virus by a differentiated human hepatoma
cell line after transfection with cloned circular HBV DNA［J］． Cell，1986，47(1) :37－47．
(责任编辑:施晓棠)
·103·第 3期 谢勇平等:楮头红皂苷的抑菌效果和抗乙肝病毒活性