全 文 ：［收稿日期］ 20100810(010)
［第一作者］ 王珲，硕士研究生，Tel:13840521293，E-mail:wan-
ghui521. 61@ 163. com
［通讯作者］ * 张 振 秋，博 士 研 究 生 导 师，教 授，Tel:
15998458585，E-mail:zhangzhenqiu@ sina. com
HPLC波长切换法同时测定迷迭香中咖啡酸、
阿魏酸和迷迭香酸的含量
王珲，张振秋 *
(辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:建立迷迭香中咖啡酸、阿魏酸和迷迭香酸的含量测定方法，为其质量标准的研究提供科学依据。方法:采
用高效液相色谱切换波长法同时测定咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸的含量。色谱条件为 phenomsil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)
分析柱进行测定，流动相甲醇-0. 1%磷酸水溶液(32∶ 68);流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 0 ～ 20 min 为 323 nm，20 ～ 30 min 为
316 nm，30 min 为 329 nm。结果:此方法线性良好，咖啡酸，阿魏酸和迷迭香酸的平均加样回收率分别为 103. 7%，99. 5%，
101. 7%;RSD 分别为 1. 5%，1. 2%，1. 5%。结论:本方法简便，准确，重复性好，可做为迷迭香质量控制的定性依据。
［关键词］ 咖啡酸;阿魏酸;迷迭香酸;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)05-0116-03
Determination of Caffeic Acid，Ferulic Acid ，Rosmarinic Acid in
Rosmarinus officinalis by HPLC with
Changing Ultraviolet-visible Wavelength
WANG Hui，ZHANG Zhen-qiu*
(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To establish the method for determining the content of caffeic acid，ferulic acid，ros-
marinic acid in Rosmarinus officinalis for its quality standards to provide the scientific basis for the study. Caffeic
acid，ferulic acid，rosmarinic acid were determined by HPLC simultaneously with changing ultraviolet-visible wave-
length. Chromatographic condition was composed of C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，mobile phase methanol –
0. 1% phosphoric acid(32∶ 68);Flow rate was 1. 0 mL·min － 1;the detection wavelength of caffeic acid at 323 nm，
Ferulic acid at 316 nm and rosmarinic acid at 329 nm. the isolation effect among caffeic acid，ferulic acid，and ros-
marinic acid showed good linear correlation，the average recoveries were 103. 7%，99. 5%，101. 7%;RSD were
1. 5%，1. 2%，1. 5% . the method and was convenient，accurate and good reappearance，It can be used as quantity
basis of the quality control of R. officinalis.
［Key words］ caffeic acid;ferulic acid;rosmarinic acid;HPLC
迷迭香 Rosmarinus officinalis L. 系唇形科(Labi-
atae)迷迭香属植物［1-3］，性温味辛，具有芳香健胃、
镇静安神的功效。其主要成分为二萜酚类、黄酮
类、三萜类及倍半萜类等化学成分。现代研究表明
其水溶性成分迷迭香酸、阿魏酸等在抗炎、抗血栓、
抗花生四烯酸代谢及增强纤溶性等方面都有明显
作用［4-5］。本文采用 HPLC 波长切换法［6］检测不同
采收时期迷迭香药材中迷迭香酸，咖啡酸，阿魏酸
的含量，提高了检测灵敏度，获得了满意的分离和
测定结果［7］。
·611·
第 17 卷第 5 期
2011 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 5
Mar.，2011
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪;SPD-
10AVP 可见紫外检测器;AS3120A 超声提取器;2140
型电子分析天平;METTLER AB135-S 1 /10 万电子
天平(瑞士)。
1. 2 试药 咖啡酸(批号 110885-200102)，阿魏酸
(批号 0773-9607)购于中国药品生物制品检定所。
迷迭香酸(批号 100106)，购于上海融禾医药公司
(含量≥99%)。迷迭香药材购于安徽亳州华申药
业有限公司，经辽宁中医药大学药学院李峰教授鉴
定为正品。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱 Phenomsil C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)流动相甲醇-0. 1%磷酸水溶液(32∶
68)，测定波长迷迭香酸为 329 nm，咖啡酸 323 nm，
阿魏酸 316 nm，流速 1. 0 mL·min － 1;理论塔板数按
迷迭香酸、阿魏酸、咖啡酸对照品峰计算均不低于
2 000。
2. 2 对照品溶液制备 精密称取迷迭香酸对照品
4. 80 mg、咖啡酸对照品 1. 83 mg，阿魏酸对照品
3. 28 mg 分别置 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀，制成浓度分别为 0. 480 0，0. 183 2，
0. 320 0 g·L － 1的溶液，作为对照品溶液。
2. 3 供试品溶液制备 取迷迭香药材 5 g，精密称
定，置于 100 mL 圆底烧瓶中，精密加入 20%乙醇 75
mL，回流提取 2 次每次 2 h，取出，放冷，滤过，合并
滤液，浓缩，转移置 25 mL 量瓶中，加入 20%乙醇至
刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，用微孔滤膜过滤，作
为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取迷迭香酸对照
品溶各 6，8，10，12，16，20 μL，咖啡酸、阿魏酸对照
品溶液各 2，4，6，8，10，12 μL，注入高效液相色谱仪
中，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以进样量为横
坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归，得回
归方程分别为迷迭香酸 Y = 979. 53X + 656. 37，
r = 0. 999 8;咖啡酸 Y = 3 583. 4X － 327. 19，r =
0. 999 8;阿魏酸 Y = 1 718. 5X － 284. 45， r =
0. 999 6;迷迭香酸在 2. 880 ～ 9. 600 mg，咖啡酸在
0. 366 4 ～ 2. 198 mg，阿魏酸在 0. 656 0 ～ 6. 560 mg
与峰面积线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，进样
20 μL，平行测定 5 次，测得各次 3 种成分峰面积，
RSD 分别为 0. 85%，1. 6%，1. 6%，表明仪器精密度
良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，在
0，2，4，6，8 h 各进样 20 μL，测得 3 种成分峰面
积，RSD 分别为 0. 9%，0. 5%，0. 2%，表明供试品溶
液在 8 h 内稳定。
2. 7 重复性试验 精密称取同一样品 5 份，每份约
5 g，照 2. 3 供试品溶液制备方法制备供试品溶液，
按上述色谱条件进样 20 μL，测定 3 种成分的含量，
RSD 分别为 2. 4%，2. 6%，2. 7%，表明方法重复性
较好。
2. 8 加样回收率测定 取已知含量的同一迷迭香
药材(咖啡酸 0. 354 9 mg·g － 1，阿魏酸 0. 225 1 mg·
g － 1)5 份，各约 2. 5 g，精密称定，分别精密加入咖啡
酸(0. 183 2 g·L － 1)对照品溶液 5 mL，阿魏酸
(0. 328 g·L － 1)对照品溶液 2 mL;另取已知含量的
同一迷迭香药材(迷迭香酸 14. 50 mg·g － 1)5 份，各
约 0. 25 g，精密称定，分别精密加入迷迭香酸对照品
溶(1. 44 g·L － 1 )2. 5 mL，按供试品溶液制备方法制
备供试液，求得迷迭香酸、咖啡酸、阿魏酸平均加样
回收率分别为 101. 7%，103. 7%，99. 5%;RSD 分别
为 1. 5%，1. 5%，1. 1%。结果见表 1 ～ 3。
表 1 迷迭香酸加样回收率试验
称样量
/ g
样品中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
0. 2501 3. 626 3. 600 7. 245 100. 5 101. 7 1. 5
0. 2512 3. 643 3. 600 7. 291 103. 2
0. 2502 3. 628 3. 600 7. 242 100. 1
0. 2505 3. 626 3. 600 7. 160 103. 5
0. 2500 3. 626 3. 600 7. 289 101. 4
表 2 咖啡酸加样回收率试验
称样量
/ g
样品中
量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
2. 501 0. 887 3 0. 916 0 1. 835 103. 4 103. 7 1. 5
2. 512 0. 891 3 0. 916 0 1. 821 101. 5
2. 502 0. 887 7 0. 916 0 1. 845 104. 5
2. 505 0. 888 7 0. 916 0 1. 857 105. 7
2. 500 0. 887 1 0. 916 0 1. 833 103. 3
表 3 阿魏酸加样回收率实验结果
称样量
/ g
样品中
量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
2. 501 0. 562 7 0. 6500 1. 203 98. 5 99. 5 1. 1
2. 512 0. 565 2 0. 650 0 1. 215 99. 9
2. 502 0. 562 9 0. 650 0 1. 200 98. 1
2. 505 0. 562 7 0. 650 0 1. 217 100. 7
2. 500 0. 562 6 0. 650 0 1. 215 100. 3
·711·
王珲，等:HPLC 波长切换法同时测定迷迭香中咖啡酸、阿魏酸和迷迭香酸的含量
2. 9 样品测定 取迷迭香药材，按 2. 3 项下操作，
分别制成供试品溶液。精密吸取对照品、供试品溶
液各 20 μL，注入高效液相色谱仪中，按外标法计算
样品中比较不同月份中迷迭香酸、咖啡酸、阿魏酸的
含量。结果见表 4，图 1。
表 4 迷迭香中迷迭香酸，咖啡酸和阿魏酸的含量
月份
迷迭香酸
/mg·g － 1
咖啡酸
/mg·g － 1
阿魏酸
/mg·g － 1
综合评分
3 10. 26 0. 478 3 0. 157 7 2. 148
4 12. 90 0. 344 6 0. 078 8 1. 787
5 15. 15 0. 378 7 0. 237 6 2. 568
6 7. 095 0. 422 8 0. 279 9 2. 290
7 8. 001 0. 527 1 0. 135 7 2. 013
8 4. 972 0. 227 8 0. 229 7 1. 581
图 1 迷迭香 HPLC
A.对照品;B.供试品;1. 咖啡酸;2. 阿魏酸;3. 迷迭香酸
2. 10 数据处理与结果分析 结果采用加权综合评
分，综合评分 = 迷迭香酸含量 /最大值 + 咖啡酸含
量 /最大值 +阿魏酸含量 /最大值，结果见表 4。
3 结果与讨论
通过对迷迭香药材不同采收期的迷迭香酸、咖
啡酸、阿魏酸的含量检测，以探求最佳采收期，5 月
为迷迭香药材最佳采收时期，各有效成分此时含量
最大;8 月份有效成分含量明显减少，迷迭香药材水
溶性成分中主要有效成分是迷迭香酸，随着采收
时间的延长，其含量逐渐减少，故应严加控制储存条
件。迷迭香药材最佳采收时期为 5，6 月，为迷迭香
质量研究提供依据。
采用波长切换法对供试品进行检测分析，提高
了检测灵敏度，获得了满意的分离和测定结果。进
行单波长 HPLC 进行检测的时候，我们测得植物中
迷迭香酸的含量较多;但是对于咖啡酸和阿魏酸含
量非常的少，该化学成分见光易分解，随着原植物药
材的采收，存放时间的长短及提取过程中不同的方
式方法对其都有一定的损耗。然而，波长切换检测
方法可以使每个有效成分在不同时间段都可以达到
最大吸收，且峰型对称，分离较好，各成分含量可以
达到最高。
［参考文献］
［1］ 屠鹏飞，徐占辉 .新型资源植物迷迭香的化学成分及其
应用［J］.天然产物研究与开发，1998，10(3):62.
［2］ Paris A，Strukel J B，Renko M，et al. Znhibitory effect of
carnosolic acid on HIV-1 protease in cell-free assasy［J］. J
Nat Prod，1993，56(8):1426.
［3］ Richheimer S L，Bernart M W，King G A，et al. Antioxi-
dant activity of lipid-soluble phenolic literpenses rosemary
［J］. J Am Oil Chem Soc，1996，73(4):507.
［4］ 李伟刚，梁敬钰 . 高效液相色谱-串联质谱法同时测定
水溶性迷迭香提取物中迷迭香酸［J］.海峡药学，2004，
16(1):11.
［5］ 许高燕，刘莹雯，银霍红 . 高效液相色谱串联质谱法同
时测定水溶性迷迭香提取物中迷迭香酸，阿魏酸，咖啡
酸的含量分析［J］.科学学报，2006，2(5):83.
［6］ 李可强，王坤，张振秋 . HPLC 切换波长法同时测定冬
凌片中迷迭香酸和冬凌草甲素的含量［J］. 中成药，
2008，30(4):115.
［7］ 吴良，袁干军，苏秋玲 . 高效液相色谱法测定迷迭香中
迷迭香酸的含量［J］.海南医学报，2006，12(2):112.
［责任编辑 顾雪竹］
·811·
第 17 卷第 5 期
2011 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 5
Mar.，2011