全 文 ：茶 叶 科 学 2005，25（3）：295~299
Journal of Tea Science

收稿日期：2005－03－09 修订日期：2005－04－12
作者简介：陈玉琼（1968—）：女，重庆人，副教授，在职博士生，主要从事茶叶品质化学及综合利用教学与科研工作。
恩施富硒藤茶安全性毒理学实验研究
陈玉琼 1，向班贵 2，倪德江 1，吴谋成 1，周继荣 1，余志 1，曾维超 1
（1. 华中农业大学，湖北 武汉 430070；2. 湖北恩施州凤鸣藤茶有限公司，湖北 恩施 445700）
摘要：根据保健食品检验与评价技术规范对恩施州富硒藤茶安全性进行了评价。急性毒性试验结果表明，受试
藤茶属无毒级；3 项致突变试验结果均为阴性。大鼠 90 天喂养试验中，藤茶各剂量组动物生长发育良好，对
体重、食物利用率无不良影响。各剂量组血常规与对照组无显著差异。大鼠血清 ALT、AST、BUN、TRI、CHO、
CRE、GLU、ALB、TP 测定结果与对照组比较无显著差异。脏器比值与对照差异不明显。肝、心、脾、肾、
胃肠、睾丸、卵巢等器官外观和组织切片与对照比均未发现实质性病理改变。说明饮用恩施富硒藤茶安全无毒。
关键词：藤茶；恩施；毒性；致突性；安全毒理学评价；动物试验
中图分类号：R994.4 文献标识码：A 文章编号：1000—369X（2005）04—295—05

Study on the Toxicology of Se-Enriching Ampelopsis
Grossedentata from Enshi
CHEN Yu-qiong1, XIANG Ban-gui2, NI De-jiang1, WU Mou-cheng1,
ZHOU Ji-rong1, YU Zhi1, ZENG Wei-chao1
(1. Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China; 2. Hubei Enshi Fengming Tengcha Company, Enshi 445700, China)
Abstract: The water extract of Enshi Se-enriching Tengcha(ESTC) on the animal safety was investigated according
to the Standard of Health Food Test and Assess. Acute toxicity test on mice showed that LD50 was greater than 30
g/kg.bw. Three genetic tests showed negative results. 90 days feeding test showed that the outer appearance,
behavior, weights, organ coefficients, the indexes of hematology and biochemistry in rats have no significant
difference comparing with the control group. Significant pathological changes of inherent organs were not
discovered. All results showed that ESTC was safet for rats.
Key words: Ampelopsis grossedentata, Enshi, Toxicity, Genetic tests, Toxicology assessment on safety


藤茶属葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄
（ Ampelopsis grossedentata （Hand.Mazz）
W.T.Wang），主要分布在我国湖北、湖南、
广西、江西、福建等地，为民间茶用、药用植
物，其茎叶常用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、
黄疸型肝炎等症，已有数百年的使用历史[1]。
湖北恩施州来凤县已发现全国最大的野生藤
茶资源，面积达 20 万亩以上，并且藤茶富硒
（0.3~5.0 mg/Kg），具有较大开发价值。本文
根据保健食品检验与评价技术规范对恩施州
凤鸣富硒藤茶安全性进行了评价，为藤茶的安
全使用及深度开发提供理论依据。
1 实验材料与方法
1.1 主要仪器设备及试剂
意大利产 SABA18型全自动生化分析仪，
DOI:10.13305/j.cnki.jts.2005.04.010
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日本光电 MEK-6318K全自动血球记数仪，试
剂盒（上海长征生化试剂公司）。
1.2 材料
富硒藤茶（为恩施州凤鸣藤茶有限公司生
产）按常规饮用方法，分别按 1:10，1:6比例
开水浸泡两次，每次 30 min，过滤后，合并滤
液于 50℃水浴上浓缩至所需浓度作供试液
（ESTC）。
1.3 试验动物
SPF级昆明种小鼠和 Wister大鼠，由湖北
预防医学科学院动物中心提供，实验动物生产
许可证号为 SCXK（鄂）2003-0005，使用许
可证号为 SYXK（鄂）2003-0014。实验温度
22~24℃，湿度 65%~80%。
1.4小鼠急性毒性试验方法[2][3]
选体重 18~20 g 小鼠，雌雄各 10 只，禁
食 16 h 后，取 1 ml=0.5 g 样品重的受试物浓
缩液，按 0.2 ml/10 g.bw经口灌胃给予 3次，
每次间隔 3 h，观察 2 周，记录动物中毒症状
及死亡数。
1.5遗传毒性试验[2]
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：小鼠体
重 24~26 g，雌雄各 30只，随机分成 6组，A
组为蒸馏水阴性对照组；F 组为 40 mg/Kg•bw
环磷酰胺阳性对照组；B、C、D、E组为受试
物组，剂量为 2.5 g/Kg•bw、5.0 g/Kg•bw、10
g/Kg•bw、20 g/Kg•bw。受试物按 0.2 ml/10 g•bw
（1 ml浓缩液相当于 1.5 g样品重）容量经口
灌胃给予，30 h 内给予两次，第二次给予 6 h
后处死动物，取胸骨骨髓涂片，Giemsa染色，
每只动物油镜下观测 1000 个嗜多染红细胞
数，并记录出现微核的嗜多染红细胞数。
小鼠精子畸形实验：取昆明种雄性小鼠
30 只，重 24~26 g，按体重随机分成 5 组，A
组为蒸馏水阴性对照组，E组为 40 mg/Kg•bw
环磷酰胺阳性对照组，B、C、D 组为受试物
组，剂量为 5.0、10 g/Kg•bw 和 20 g/Kg•bw。
受试物按 0.2 ml/10 g•bw（浓缩液 1 ml相当于
1.5 g 样品重）容量连续经口给予 5 天，继续
喂养 30 天后处死动物，取两侧附睾涂片，伊
红染色，每只动物高倍镜下观测 1000个精子，
并记录畸形精子数。
Ames实验[4]：采用标准菌株 TA97、TA98、
TA100、TA102进行实验，用多氯联苯（PCB）
诱导的大鼠肝匀浆作为体外活化系统（+S9）。
分 5 个剂量组：0.2、0.5、1.0、2.5、5.0 mg/
皿，同时设置溶剂空白及阳性对照组。TA97、
TA98、TA102：-S9阳性对照物为敌克松，加
入量为 50.0 µg/皿，TA100：-S 阳性对照物为
NaN3，加入量为 2.5 µg/皿；TA97、TA98、
TA100：+S9 阳性对照物为 2-AF，加入量为
10 µg/皿，TA102：+S9 阳性对照物为 1，8-
二羟基蒽醌，加入量为 50 µg/皿，重复两次。
用平板渗入法记录结果。
1.6 90天喂养实验[2]
取 65~85 g重 Wister 大鼠 80只，雌雄各
半，随机分成 4 组，剂量为 3.8、7.5 g/Kg•bw
和 15.0 g/Kg•bw，受试物各剂量组按 1.0
ml/100 g•bw 连续经口灌胃浓缩提取液（浓缩
液 1 ml 相当于 1.5 g 样品重）90 天，对照组
给予等量蒸馏水。每天观察动物的表现、行
为、中毒症状、死亡情况、体重、食物利用
率。实验结束时测定血红蛋白（Hb）、红细
胞计数（RBC）、白细胞计数（WBC）、血
小板计数（PLT）；血清谷丙转氨酶（ALT）、
谷草转氨酶（AST）、血清尿素氮（BUN）、
总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TRI）、肌酐
（CRE）、血糖（GLU）、血清白蛋白（ALB）、
总蛋白（TP）；脏器重量及系数并对心、肝、
脾、肺、肾、胃肠、睾丸等器官进行病理切
片检查。
1.7 数据统计：
采用 SPSS8.0 for windows统计软件包，
计量资料采用 one way anvoa，记数资料采用
Norparamitric Tests。
4期 陈玉琼，等：恩施富硒藤茶安全性毒理学实验研究

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2 结果与分析
2.1 小鼠急毒性实验
小鼠经口灌胃恩施富硒藤茶浓缩液累计
达 30 g/Kg•bw，相当于人群推荐量 0.15
g/Kg•bw的 200倍，经两周观察未见明显中毒
症状，也无死亡发生（结果见表 1）。按急性
毒性分级[5]，该恩施富硒藤茶属实际无毒级。
2.2 遗传毒性实验
2.2.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果见
表 2，结果表明，受试物各剂量组雌雄性别微
核率与阴性对照组比较无显著差异，说明受试
物骨髓微核试验结果为阴性。
2.2.2 小鼠精子畸形试验
恩施富硒藤茶提取液对小鼠精子畸形试
验结果表明（表 3）：该藤茶提取液各剂量组
小鼠精子畸形率均在正常畸形范围内，对小鼠
精子畸形作用为阴性。
2.2.3 Ames试验结果
试验结果表明，恩施富硒藤茶对鼠伤寒沙
门氏菌 TA97、TA98、TA100、TA102四株试
验菌株，在加与不加 S9 时，各剂量组回变菌
落数均未超过阴性对照菌落数 2倍，也无剂量
反应关系，Ames试验结果为阴性。

表 1恩施富硒藤茶小鼠急毒性实验结果
Table 1 Results of acute toxicity test of ESTA on mice
动物体重 Weight（g） 性别
Sexuality
剂量
Dose（g/kg.bw）
动物数
(n) 初重 Before 终重 After
死亡动物数（n）
Died amounts
中毒反应
Toxiciaction
雌鼠 Female 30 10 19.0±0.57 30.7±1.13 0 无 no
雄鼠 Male 30 10 19.6±0.44 33.5±1.65 0 无 no

表 2 恩施富硒藤茶小鼠嗜多染红细胞微核试验结果
Table 2 Results of polychromatophilic erythrocyte micronucleus test of ESTC on mice
动物数(n)
Mouse
检查细胞数（n）
Examined cells
微核细胞数（n）
Micronucleus cells
微核率（‰）
Micronucleus rate
组别
Group
剂量（g/Kg•bw）
Dose
雌 F 雄 M 雌 F 雄 M 雌 F 雄 M 雌 F 雄 M
A 0 5 5 5×1000 5×1000 12 10 2.4±0.9 2.0±1.0
B 2.5 5 5 5×1000 5×1000 10 8 2.0±1.0 1.6±1.3
C 5.0 5 5 5×1000 5×1000 10 11 2.0±1.2 2.2±0.8
D 10.0 5 5 5×1000 5×1000 13 12 2.6±0.5 2.4±1.3
E 20.0 5 5 5×1000 5×1000 9 10 1.8±1.9 2.0±0.7
F 0.04 5 5 5×1000 5×1000 160 168 32.0±3.5 33.6±4.5

表 3 恩施富硒藤茶小鼠精子畸形试验结果
Table 3 Results of spermatozoa deformation test of ESTC on mice
组别
Group
剂量（g/Kg•bw）
Dose
动物数（n）
Mice amount
观察精子数（n）
Examined spermatozoa
畸形精子数(n)
Deform spermatozoa
精子畸形率（‰）
Deform spermatozoa rate
A 0 6 6×1000 136 23±2.6
B 5.0 6 6×1000 131 22±2.2
C 10.0 6 6×1000 156 26±4.7
D 20.0 6 6×1000 151 25±2.9
E 0.04 6 6×1000 580 97±4.2


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2.4 小鼠 90天喂养试验
不同剂量恩施富硒藤茶提取液喂食大鼠
90天后，大鼠毛发正常，无异常行为表现，无
死亡现象。各剂量组体重、食物利用率与对照
组比较都无显著差异。对大鼠血常规指标、血
生化指标检查结果表明（表 4、表 5）：恩施
富硒藤茶提取液各剂量组血常规指标及血生
化检验结果与对照组均无显著差异。
用恩施富硒藤茶提取液喂食大鼠 90 天
后，各剂量组的心/体、肝/体、脾/体、肾/体、
睾丸/体系数（表 6）与对照比较均无显著差
异。
对大鼠心、肝、脾、肾、胃肠、睾丸、卵
巢进行解剖，发现各剂量组雌雄大鼠各器官外
观颜色、大小正常，未见明显渗出、增生、水
肿、萎缩等病变。显微镜观察结果显示，高剂
量组与正常对照组比较，结果均在正常形态学
范围内，未见明显中毒性病理改变。

表 4 恩施富硒藤茶对大鼠血常规指标的影响
Table 4 Effects of ESTC on the indexes of hematology of rats
性别
Sexuality
剂量
Dose（g/Kg•bw）
动物数（n）
Mice amount
血红蛋白
Hb（g/L）
红细胞
RBC（×1012/L）
白细胞
WBC（×109/L）
血小板
PLT（×109/L）
0 10 134±8.3 7.00±0.44 14.4±1.97 332±43.1
3.8 10 134±5.8 7.23±0.37 14.1±2.12 364±52.6
7.5 10 138±8.0 6.96±0.31 14.4±3.02 347±35.3
雌 F
15.0 10 137±5.8 7.37±0.64 14.9±2.57 362±55.7
0 10 136±4.2 7.08±0.47 14.3±4.76 346±38.1
3.8 10 140±6.0 6.87±0.53 14.8±2.44 354±59.6
7.5 10 134±6.2 7.26±0.68 14.0±1.97 353±55.7
雄 M
15.0 10 139±5.7 7.06±0.44 14.3±1.76 364±38.1

3 结论
恩施凤鸣富硒藤茶提取液对两种性别的
SPF级昆明种小鼠经口毒性属无毒级，3项致
突变试验（小鼠嗜多染红细胞微核试验、小鼠
精子畸形试验、Ames 试验）结果为阴性。90
天喂养试验中，恩施富硒藤茶提取液对大鼠生
长发育、各项血液指标及血液生化指标均无显
著影响。高剂量组与正常对照组大鼠心、肝、
肾、脾、睾丸、卵巢等器官组织均未发生实质
性病理改变。说明恩施富硒藤茶是一种安全无
毒的天然保健饮料。
参考文献:
[1] 全国中草药汇编编写组 . 全国中草药汇编（下册）(M). 北
京: 人民卫生出版社 , 1997.
[2] 保健食品检验与评价技术规范 , 2003.
[3] 孙敬方 . 动物实验方法学 (M). 北京 : 人民卫生出版社 ,
2001.
[4] 食品安全性毒理学评价程序和方法 , GB15193—94.
[5] 李焕德 . 临床药学(M). 北京: 人民卫生出版社 , 2003.

4期 陈玉琼，等：恩施富硒藤茶安全性毒理学实验研究

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