全 文 ：第 14卷　第 3期 华　夏　医　学 V ol. 14 No. 3
2001年 6月 ACTA　 MEDICINAE　 SIN ICA Jun. 2001
中草药石上柏阻断促癌物激活 Eps tein-Barr病毒抗原表达研究
成积儒 ,郑裕明 ,汤敏中 ,莫永坤
(梧州市红十字会医院 ,广西 梧州　 543002)
摘要: 目的:研究中草药石上柏对促癌物激活 EB病毒 V CA、 EA抗原表达的影响。 方法:应用免疫酶法检测石上柏水
提取液对促癌物正丁酸巴豆油联合作用激活 EB病毒 VCA、 EA抗原的表达 ,计算出阻断率。结果:发现中草药石上柏
药物浓度 1mg /ml时阻断 Raji细胞表达 E A,阻断率为 51. 98% ;阻断 B95-8细胞 VCA表达 ,最高达 72. 04%。结论: 实
验表明 ,石上柏水提取液有阻断 EB病毒在细胞内抗原的表达作用 ,为临床使 EB病毒抗体阳性者转阴 ,阻断 EB病毒
与鼻咽癌的关联提供理论和实验依据。
关键词: EB病毒 ;石上柏 ;阻断
中图分类号: R285. 5; R373　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1008-2409( 2001) 03-0263-02
Study of the Interdiction of Chinese Herb Shishangbai on the Activation of the Antigen Expression of Epstein-Barr
Viruses by Cocarcinogens /CHENG Ji-ru, ZHENG Yu-ming, TANG Min-zhong, et al / /Wu Zhou Red-Cross Hospital,
Guangxi 543002, China
Abstract: Objec tiv e: To study the interdiction of Chinese herb Shishangbai on the activa tion o f the V CA and EA anti-
gen expression o f Epstein-ba rr v iruses by cocar cinogens. M eth ods: Immunoenzymatic method w as used fo r assess-
ment of the interdiction of the w ater ex tracts of Chinese herb Shishangbai on th e activ a tion of the VCA and EA anti-
gen expression o f Epstein Bar r viruses by the combination o f co ca rcinogens or tho buty ric acid and cro ton oil, and the
interdiction ra te w as calculated. Results: A t the concentra tion of lmg /ml, Chinese h erb Shishangbai interdicted the
EA antig en expression o f Raji cells, w ith the interdiction ra te of 51. 98% ; it a lso interdicted the V CA antig en expres-
sion o f B95- 8 cells, w ith the highest inte rdiction r ate up to 72. 04% . Conclusion: The wa ter ex trac ts o f Chinese herb
Shishangbai showed interdic to r y effect on the activa tion o f the intr acellular antigen expression o f Epstein-Bar r v iruses
fr om positiv e to negativ e, interdicting the rela tion of nasophar yngeal carcinoma and Epstein-Bar r vir uses. It could be
of some refe rence value fo r clinical tr ea tment.
Key words: EB virus, Chinese herb shishangbai; Interdic tion
　　众所周知 ,促癌物质 ( Cocar eingen)能激活 Epstein-Bar r
病毒 ( EBV ) [1 ] ,而促癌物正丁酸巴豆油系统的联合作用 ,能够
进一步提高激活 EBV的作用 ,表现在能激活隐伏感染携带
EBV基因组的 Raji细胞表达早期抗原 ( EA)和产病毒细胞株
B95-8细胞提高 EBV壳抗原 ( VCA )的表达。丁酸还能促进或
协同促癌物促进 EBV对淋巴细胞的转化。
中草药石上柏 ( Doeder leins Spikeemoss Herb) ,别名大叶
草、水柏枝等 ,属卷柏科植物深绿卷柏 (多德卷柏 Selagimella
doederleinii Hieron)。 化学成分为含莽草酸 ( Shikimicacid) ;性
能: 微涩、温、祛风散寒、止咳消肿 ;主治: 风湿痛、风寒咳嗽、抗
肿瘤等 [2]。
为了寻找能使 EB病毒抗体转阴和阻断 EB病毒与鼻咽
癌的关联的中草药 ,笔者研究了石上柏对由正丁酸巴豆油联
合激活 EB病毒 V CA和 EA表达的影响
1　材料和方法
1. 1　实验材料的处理　中草药石上柏购于市内常生草药店 ,
经市药检所鉴定后 ,称取全草 50g ,经剪碎后加双蒸水 500m l,
浸泡过夜 ,文火煮沸 30min,弃去药渣 ,离心后取上清液用滤纸
过滤 ,隔水煮沸灭菌 ,配成原液浓度 1g /ml,置- 20℃冰箱保存
备用。
1. 2　试验材料的预试验　药物原液用无菌生理盐水分别按
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作者简介: 成积儒 ( 1954- ) ,男 , 1977年毕业于广西卫校检验专业 , 1998年毕业于广西医科大学成教院临床专业 ,从事肿瘤防治研究工作
至今 (参加 EB病毒鼻咽癌血清学诊断方法建立及成果推广应用 ;环境促 EB病毒抗原表达物质的研究 ;中草药抑制 EB病毒抗原表达的研
究 ,组织细胞培养技术等工作 )。 现任梧州市红十字会医院主管检验师。
实验设计稀释成不同浓度 ,分别加入 Ra ji细胞或 B95-8细胞
悬液培养瓶内混合培养。 最终药物浓度分别为 10, 1, 0. 1,
0. 01, 0. 001mg /ml。连续培养 48h ,每瓶吸 1ml加入 0. 5%台酚
兰染色 ,计算其活细胞的百分率。 两种细胞存活率分别大于
90%才能用于阻断试验。
含有 EBV基因组的 Ra ji细胞及产病毒株的 B95-8细胞
按常规培养 ,培养液用 RPMI1640加 15%小牛血清加青、链霉
素 ,置 37℃温箱培养 , 2d换液一次。
1. 3　材料的阻断试验　将培养的 Raji细胞或 B95-8细胞加
4mm正丁酸及 500mg /ml巴豆油配成混合细胞浮液 ,分别加
试验材料最终浓度达到 10, 1, 0. 1, 0. 01, 0. 001mg /m l,每个稀
释度分 3管 ,同时作单纯抗原激活组及空白对照组。混合后置
37℃温箱培养 48h,离心涂片 ,冷丙酮固定 ,加入 N PC血清用
免疫酶法测定抗原。 在显微镜下分别计算 300个细胞中阳性
细胞数 ,折算阳性细胞百分率。然后计算出各试验材料的阻断
率。
阻断率= ( 1- 试验材料组细胞阳性率抗原激活组细胞阳性率 )× 100%
2　结果分析
2. 1　石上柏水提取液阻断由正丁酸巴豆油激活 Raji细胞
EBV-EA表达 ,药物浓度 1mg /ml阻断率为 51. 98% ,随着药
物稀释度升高而阻断率下降。 最终浓度 0. 001mg /ml时仍有
5. 69% ,但比阻断 B95-8细胞 V CA表达 45. 67%较低 ,可能是
细胞株的不同而有差别 (见表 1, 2)。
2. 2　石上柏水提取液阻断由正丁酸巴豆油激活 B95-8细胞
EBV-V CA表达 ,药物浓度在 1mg /m l时其阻断率达 72. 04% ,
比阻断 Raji细胞 EA表达高 ,两者之间有差异 ,而药物浓度在
10mg /ml时 ,阻断率为 62. 56% ,比 1mg /ml低 ,认为药物浓度
可能过高 ,造成部分细胞在生长过程中毒死亡 ,所以其活细胞
数低于 90% (见表 1, 2)。
表 1　石上柏阻断正丁酸+ 巴豆油激活
Raji细胞 EBV-E A表达
药物浓度
(mg /ml)
细胞阳性率
(% )
阻断率
(% )
χ2 P
10 16. 7 40. 57 37. 93 < 0. 001
1 13. 5 51. 98 50. 18 < 0. 001
0. 1 15. 8 43. 78 41. 24 < 0. 001
0. 01 19. 1 32. 03 29. 55 < 0. 001
0. 001 26. 5 5. 69 5. 49 < 0. 05
对照组 28. 1
表 2　石上柏阻断正丁酸+ 巴豆油激活
B95-8细胞 EBV-VCA表达
药物浓度
( mg /ml )
细胞阳性率
(% )
阻断率
(% )
χ2 P
10 7. 9 62. 56 59. 15 < 0. 001
1 5. 9 72. 04 71. 54 < 0. 001
0. 1 7. 7 63. 51 60. 32 < 0. 001
0. 01 9. 7 54. 03 49. 27 < 0. 001
0. 001 11. 3 45. 67 40. 76 < 0. 001
对照组 21. 1
3　讨论
随着分子生物学的发展 ,认为遗传因素、环境因素和机体
免疫功能是 NPC发生的基础 , EBV在 N PC发生中起着重要
作用 ,促癌致癌物起到协同作用 [3]。 纪志武报告 [4 ]从鼻咽癌患
者和其他鼻咽部疾病患者鼻咽部分离出一类革兰氏染色阴性
的细菌代谢产物中 ,含有能诱导类淋巴母细胞 Ra ji细胞和
P3HR-1细胞中的 EBV抗原的物质 ,经气相色谱分析证实 ,该
物质是正丁酸。 正丁酸与促癌物联合作用就能够激活潜伏感
染在人鼻咽部上皮细胞的 EBV ,使 EBV完成复制溶解周期 ,
释放出感染性 EBV。后者能转化上皮细胞产生肿瘤。在 NPC
高发区梧州市进行前瞻性现场研究 ,对 EB病毒 V CA-IgA抗
体阳性和阴性人群进行十年的追踪观察 , 95%的 NPC都来自
抗体阳性者。N PC患者主要来自抗体上升或不变的人群 ,而在
抗体下降或转阴者不再出现 N PC[3]。 本实验表明中草药石上
柏能部分地阻断促癌物正丁酸巴豆油联合作用激活 EBV ,降
低 EB病毒 V CA、 EB的表达作用。 提出石上柏水提取液对细
胞基本没有毒性 ,故应用于临床患者辅助治疗及 NPC高危人
群即 EBV抗体阳性人群 ,可望能缩短患者的疗程 ,提高疗效 ,
或使抗体阳性者阴转 ,有可能降低一定比例的 N PC发病率。
[参考文献 ]
[ 1 ]　 Eliasson L. Eps tein-Barr Virus and tumor Promoterrs [ J ] . Ins
Symp Princess Tak amatsu Cancer Res Fund, 1983, 14( 3): 139.
[2 ]　徐国均 ,何宏贤 ,徐珞珊 ,等 .中国药材学 [M ] .第 1版 .北京: 中
国医药科技出版社 , 1996, 1325- 1326.
[ 3 ]　李春海 ,陆仕新 .肿瘤生物学研究进展 [M ].第 1版 .北京:军事
医学科学出版社 , 1997, 1- 4.
[4 ]　纪志武 ,曾毅 ,王培中 ,等 .鼻咽癌病人和其他鼻咽部疾病病人鼻
咽厌氧菌代谢产物对类淋巴母细胞 Raji细胞和 P3HR-1细胞中
EB病毒抗原和诱导作用 [ J] .癌症 , 1990, 9( 1): 1- 3.
(收稿日期: 2000- 12- 05)
[责任编辑　王慧瑾 ]
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3期　　　　　　　　　　　　　　　　　　华　夏　医　学　　　　　　　　　　　　　　　　　 14卷