全 文 ：２．３　性质测定　参照 Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司
的蛋白电泳技术手册［５］操作，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的浓缩胶
４％，分离胶１２％。“２．２．２”项下获得的各组分经
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，峰１组分呈单一条带，达电泳纯，
相对分子质量约为２５　ｋＤａ（图４）。
图４　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱
Ｍ－标准分子质量蛋白；１－经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　３０分子筛色谱柱层析峰１组
分；２－经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　３０分子筛色谱柱层析峰２组分；３－经 ＤＥＡＥ－Ｓｅ－
ｐｈｒｏｓｅ　Ｆ．Ｆ阴离子交换柱层析峰３组分
Ｆｉｇ　４　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＡＡＶ－Ⅱ３－１
Ｌａｎｅ　Ｍ　ｉｓ　ｍａｒｋｅｒ，Ｌａｎｅ　ｌ　ｉｓ　ＡＡＶ－Ⅱ３－１，Ｌａｎｅ　２ｉｓ　ＡＡＶ－Ⅱ３－２，Ｌａｎｅ
３ｉｓ　ＡＡＶ－Ⅱ３
３　讨论
从五步蛇毒中提取的凝血酶样酶制剂在治疗急
性脑梗死方面疗效显著。但在临床应用中发现有可
能致过敏反应，血小板下降等问题。这些不良反应
可能与制剂的纯度不足等有关。因此，通过改进工
艺提高质量，可获得更好临床效果，减少不良反应是
必要且可行的尝试。
本研究进行分离纯化工艺考察。五步蛇毒经
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　７５分子筛色谱柱层析，受上样量、洗脱流
速、盐浓度、ｐＨ 值的影响，其中影响最大的为ｐＨ
值，其次为盐浓度；Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　３０分子筛色谱柱不仅
有除盐的功能，还有纯化的作用。
已有文献报道［２］，五步蛇毒中有３个凝血酶样
酶同工酶，相对分子质量为１４～６６　ｋＤａ。本课题采
用新一代色谱柱Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　７５、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈｒｏｓｅ　Ｆ．
Ｆ、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　３０等，经几步层析去除杂蛋白，分离纯
化效果显著，取得一种凝血酶样酶纯品，相对分子质
量约为２５　ｋＤ。本试验重复性佳，适用于大规模生
产。
参考文献：
［１］　Ｏｕｙａｎｇ　Ｃ，Ｃｈｅｎ　ＹＣ，Ｔｅｎｇ　ＣＭ．Ｔｈｅ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ
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［５］　Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｔｅｃｈｎｉ－
ｃａｌ　ｍａｎｕａｌ［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ，
１９９９：１３－１９．
［收稿日期］２０１３－０３－０１
［基金项目］国家自然科学基金项目（Ｎｏ．８１２０２９８７，２１２７５０２８）；福建省自然科学基金（２０１２Ｊ０１１３１、２０１２Ｊ０５１３４）　［作者简介］黄建勇，男，学
士，在读硕士，主管药师，研究方向：中药药效物质基础，电话：１３７０５００８１９１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｊｙ８１９１＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］姚宏，男，博士，副教授；福
建医科大学药学院药物分析系，研究方向：中药药效物质及体内过程分析，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｕｈｕｎｇ＠１２６．ｃｏｍ
高效液相色谱法同时测定石上柏中４个双黄酮类化合物
黄建勇１，２，李少光２，赵美凤２，李宇翔２，林新华２，姚宏２　（１．福建医科大学附属协和医院药学部，福建 福州３５０００１；２．
福建医科大学药学院药物分析系，福建 福州３５０００４）
［摘要］　目的：建立同时测定石上柏中穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素及３′，３′′′－双柚皮素共
４个主要双黄酮成分的含量分析方法，为石上柏药材抗癌药用提供质量控制方法参考。方法：采用 ＵｌｔｉｍａｔｅＴＭ　ＸＢ－Ｃ１８（４．６
ｍｍ×２５０　ｍｍ，５μｍ）色谱柱；以不同体积分数的乙腈（Ｂ）－０．５％醋酸溶液（Ａ）为流动相，检测波长２７０　ｎｍ，流速１．０ｍＬ·
ｍｉｎ－１，柱温３０℃。结果：穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素和３′，３′′′－双柚皮素均在１．５６～１００
μｇ·ｍＬ
－１范围内具有良好的线性关系（ｒ≥０．９９９　９），平均加样回收率分别为９９．０％，９６．０％，１０１．０％和９７．０％，ＲＳＤ均小于
５％（ｎ＝６）。结论：该法简便、快速，重现性好，可为石上柏药材质量控制提供定量分析方法。
［关键词］　石上柏；双黄酮类化合物；含量测定；高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ９６９．３　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１３）２３－１９４５－０４
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉ　Ｈｉｅｒｏｎ　ｂｙ　ＨＰＬＣ
·５４９１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｄｅｃ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２３
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2013.23.010
ＨＵＡＮＧ　Ｊｉａｎ－ｙｏｎｇ１，２，ＬＩ　Ｓｈａｏ－ｇｕａｎｇ２，ＺＨＡＯ　Ｍｅｉ－ｆｅｎｇ２，ＬＩ　Ｙｕ－ｘｉａｎｇ２，ＬＩＮ　Ｘｉｎ－ｈｕａ２，ＹＡＯ　Ｈｏｎｇ２（１．Ｄｅ－
ｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｕｎｉｏｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｆｕｚｈｏｕ３５０００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕ－
ｔｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆａｃｕｌｔｙ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００４，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｍａｉｎ　ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ，ｒｏｂｕｓｔｆｌａｖｏｎｅ，２″，３″－ｄｉｈｙｄｒｏ－３′，３″′－ｂｉａｐｉｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　３′，３″′－ｂｉｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ　ｉｎ　Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　Ｈｉｅｒｏｎ　ａｎｄ
ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　Ｈｉｅｒｏｎ　ｉｎ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｕｓａｇｅ．ＭＥＴＨ－
ＯＤＳ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｏｎ　ａｎ　ＵｌｔｉｍａｔｅＴＭＸＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ　ａ　ｇｒａｄｉｅｎｔ
ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（Ｂ）ａｎｄ０．２％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（Ａ）．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ
ｗａｓ　２７０　ｎｍ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　３０℃．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｒａｎ－
ｇｅｓ　ｏｆ　１．５６–１００μｇ·ｍＬ
－１　ｆｏｒ　ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ，ｒｏｂｕｓｔｆｌａｖｏｎｅ，２″，３″－ｄｉｈｙｄｒｏ－３′，３″′－ｂｉａｐｉｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　３′，３″′－ｂｉｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ（ｒ≥
０．９９９　９），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗａｓ　９９．０％，９６．０％，１０１．０％ａｎｄ　９７．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，
ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ＲＳＤｓ　ｂｅｌｏｗ５％ （ｎ＝６）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ
ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　Ｈｉｅｒｏｎ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　Ｈｉｅｒｏｎ；ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ
　　石上柏（Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　Ｈｉｅｒｏｎ）为蕨
类植物门卷柏科植物深绿卷柏的全草，又名大叶菜、
地侧柏、水柏枝等，主产于贵州、云南、广东、广西、福
建、浙江及台湾等地，其味甘、微苦、涩、性凉，有清热
解毒、祛风除湿、抗癌止血等功效［１］，临床用于治疗
咽喉肿痛、风湿痹痛、鼻咽癌、绒毛膜上皮癌、肺癌、
宫颈癌及外伤出血等各种疾病［２－３］，效果显著，毒副
作用少。尽管石上柏已在临床有广泛应用，但关于
其质量控制方法的研究报道较少。为满足用药安
全、有效和质量可控的要求，有必要为其建立质量分
析方法。笔者课题组前期从石上柏中分离得到了４
个双黄酮类成分，包括穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄
酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素和３′，３′′′－双柚
皮素。文献已报道这些双黄酮类成分具有较好的抗
癌活性［４－７］，因此，这些双黄酮可能是石上柏的活性
物质基础。本文以这４种成分为指标成分，建立同
时测定石上穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，
３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素和３′，３′′′－双柚皮素的
ＨＰＬＣ法，该法简便、快速，重现性好，为石上柏质量
控制提供了定量分析方法。
１　材料
Ａｇｉｌｅｎｔ　１２６０型高效液相色谱仪（配备四元低
压混合泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测
器）。
穗花杉双黄酮对照品购自上海融禾医药科技发
展有限公司，罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，
３′′′－双芹菜素和３′，３′′′－双柚皮素对照品为本实验
室制备分离获得。上述对照品经 ＨＰＬＣ归一法验
证纯度均为９８％以上。色谱级乙腈（Ｍｅｒｃｋ）、醋酸
（国药集团化学试剂有限公司）；注射用水（实验室自
制）；其他试剂均为分析纯。所有溶剂均用０．４５μｍ
微孔滤膜过滤，并超声除气。
石上柏购自福州市林氏草药店，经福建医科大
学药学院姚宏副教授鉴定为蕨类植物门卷柏科植物
深绿卷柏的全草。
２　方法与结果
２．１　溶液的制备
２．１．１　对照品溶液　精密称取穗花杉双黄酮、罗伯
斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素及３′，
３′′′－双柚皮素对照品各约１０　ｍｇ，置５　ｍＬ量瓶中，
加８０％乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照
品储备液。
２．１．２　供试品溶液　称取干燥过筛的样品粉末１　ｇ，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚（６０～９０℃）５０
ｍＬ，超声提取６０　ｍｉｎ（功率２５０　Ｗ，频率４０　ｋＨｚ），弃
去上清液，再重复超声提取１次。药渣放置于滤纸
上，室温挥干石油醚后转移入具塞锥形瓶中，精密加
入５０　ｍＬ７０％乙醇，加塞，称重，超声提取６０　ｍｉｎ（功
率２５０　Ｗ，频率４０　ｋＨｚ），补足溶剂，过滤，精密量取滤
液１０　ｍＬ，５８℃水浴蒸干，用８０％乙醇复溶后定容于
１０　ｍＬ量瓶中待用。进样分析前用０．４５μｍ微孔滤
膜过滤，取续滤液为供试品溶液。
２．２　色谱条件　用上述供试品溶液优化色谱分析
条件。采用 ＵｌｔｉｍａｔｅＴＭ　ＸＢ－Ｃ１８（４．６　ｍｍ ×２５０
ｍｍ，５μｍ）色谱柱分析；以乙腈（Ｂ）－０．５％醋酸溶液
（Ａ）为流动相，优化获得梯度洗脱条件（０～４　ｍｉｎ，
Ｂ：３５％→４４％；４～２０　ｍｉｎ，Ｂ：４４％→４６％；２０～２１
ｍｉｎ’Ｂ：４６％→７８％；２１．１～３５　ｍｉｎ，Ｂ：９９％；３５．１
～４２　ｍｉｎ，Ｂ：１２％）、检测波长（２７０　ｎｍ）、流速（１．０
ｍＬ·ｍｉｎ－１）及柱温（３０℃），进样量１０μＬ。色谱分
·６４９１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｄｅｃ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２３
析结果如图１所示，石上柏中４个成分达到基线分
离，且一次进样色谱分析时间小于３０　ｍｉｎ。
图１　样品（Ａ）和对照品（Ｂ）色谱图
１．穗花杉双黄酮，２．罗伯斯特双黄酮，３．２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹
菜素，４．３′，３′′′－双柚皮素
Ｆｉｇ　１　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ａ）ａｎｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂ－
ｓｔａｎｃｅｓ（Ｂ）
１．ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ，２．ｒｏｂｕｓｔｆｌａｖｏｎｅ，３．２″，３″－ｄｉｈｙｄｒｏ－３′，３″′－ｂｉａｐｉ－
ｇｅｎｉｎ　ａｎｄ　４．３′，３″′－ｂｉｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ
２．３　标准曲线及检测限　准确量取“２．１．１”项下４
种对照品储备液适量置于同一２　ｍＬ量瓶中，加无
水乙醇稀释到刻度，摇匀，制成含４种成分质量浓度
均为２００μｇ·ｍＬ
－１的标准工作液。取上述标准工作
液按倍比稀释法配制标准系列工作溶液（１００，５０，
２５，１２．５，６．２５，３．１２，１．５６μｇ·ｍＬ
－１）按“２．２”项下
色谱条件进样分析，以对照品质量浓度（μｇ·ｍＬ
－１）
为横坐标（Ｘ），色谱峰面积为纵坐标（Ｙ），绘制标准
曲线，并计算检测限（Ｓ／Ｎ≥３）及定量限（Ｓ／Ｎ≥
１０），结果见表１。
表１　标准曲线及检测限（ｎ＝８）
Ｔａｂ　１　Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ａｎｄ　ＬＯＤ（ｎ＝８）
成分 标准曲线
线性范围
／μｇ·ｍＬ－１
Ｒ ＬＯＤ／μｇ·ｍＬ－１
穗花杉双黄酮 Ｙ＝１７．０８１　Ｘ＋１３．５１１　 １．５６～１００　０．９９９　９　 ０．７８
罗伯斯特双黄酮 Ｙ＝６．４１８８　Ｘ＋３．８８３　６　 １．５６～１００　１　 ０．７８
２′′，３′′－二 氢－３′，
３′′′－双芹菜素
Ｙ＝１．５４９　Ｘ＋０．８９８　５　 １．５６～１００　０．９９９　９　 ０．７８
３′，３′′′－双柚皮素 Ｙ＝２．７２６　１　Ｘ＋３．１６３　７　１．５６～１００　１　 ０．７８
２．４　精密度试验　取对照品溶液一份（穗花杉双黄
酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜
素及３′，３′′′－双柚皮素质量浓度分别为１２．５，１２．５，
１２．５，１２．５μｇ·ｍＬ
－１），按“２．２”项下色谱条件，连
续进样６次，记录峰面积，计算得穗花杉双黄酮、罗
伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素及
３′，３′′′－双柚皮素的 ＲＳＤ 分别为１．５％，２．０％，
３．９％及１．８％。
２．５　 重现性试验 　 取同一批药材 ６ 份，按照
“２．１．２”项下方法平行制备供试品溶液６份，并按
“２．２”项下色谱条件进样分析，测得穗花杉双黄酮、
罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素及
３′，３′′′－双柚皮素含量平均值的ＲＳＤ分别为１．２％，
１．３％，２．２％及１．３％。
２．６　稳定性试验　取供试品溶液１份，室温放置，
按“２．２”项下色谱条件，于０，２，４，８，１０，２４，３６，４８　ｈ
各进样一次分析，记录峰面积，代入标准曲线，计算
穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，
３′′′－双芹菜素及３′，３′′′－双柚皮素含量平均值的
ＲＳＤ分别为０．２％，０．２％，０．４％及０．０７％，结果表
明在４８　ｈ内样品溶液稳定性良好。
２．７　加样回收率试验　精密称取已测知含量的样
品６份，每份１　ｇ，精密称定后置具塞锥形瓶中，分别
加入穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－
３′，３′′′－双芹菜素及３′，３′′′－双柚皮素对照品溶液
（质量浓度均为５００μｇ·ｍＬ
－１）２００μＬ，按照“２．１．２”
项下方法制备供试品溶液，按“２．２”项下色谱条件
进样分析，计算加样回收率，见表２。
表２　回收率测定结果（ｎ＝６）
Ｔａｂ２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｂｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ
（ｎ＝６）
成分
已知量
／ｍｇ
加标量
／ｍｇ
测得总量
／ｍｇ
平均回
收率／％
ＲＳＤ
／％
穗花杉双黄酮 ０．１１２　 ０．１　 ０．２１１±０．００６　 ９９．０　 ２．４
罗伯斯特双黄酮 ０．０９１　 ０．１　 ０．１８７±０．００４　 ９６．０　 ２．１
２′′， ３′′－二 氢－３′，
３′′′－双芹素
０．１４２　 ０．１　 ０．２４３±０．００７　 １０１．０　 ３．１
３′，３′′′－双柚皮素 ０．１４４　 ０．１　 ０．２４１±０．００９　 ９７．０　 ３．７
２．８　样品含量测定　取供试品，按照“２．１．２”项制
备成供试品溶液。按“２．２”项色谱条件，进样分析，
以外标法计算样品中穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄
酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素及３′，３′′′－双柚
皮素的含量，结果见表３。
表３　含量测定结果（ｍｇ·ｇ－１，珚ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ　３　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ｍｇ·ｇ－１，珚ｘ±ｓ，ｎ＝３）
样品
编号
穗花杉
双黄酮
罗伯斯特
双黄酮
２′′，３′′－二氢－３′，
３′′′－双芹菜素
３′，３′′′－
双柚皮素
１　 ０．１１２±０．００４　０．０９１±０．００３　 ０．１４２±０．００７　 ０．１４４±０．００３
２　 ０．１５１±０．００７　０．０８２±０．００１　 ０．１０１±０．００５　 ０．１０４±０．００３
３　 ０．１４０±０．００１　０．１２３±０．００１　 ０．１９１±０．００１　 ０．１９３±０．００２
３　讨论
３．１　提取方法的选择　本实验分别考察了回流提
取、索氏提取和超声波提取。超声波提取效率高，且
简便快速，故采用超声波提取。
实验中针对配制供试品溶液的不同提取溶剂
（５０％、７０％及１００％乙醇），不同溶剂体积（３０，５０，
７５，１００　ｍＬ）及不同提取时间（１５，３０，６０，９０　ｍｉｎ）分
别考察。结果样品７０％乙醇５０　ｍＬ超声提取（５０
ｍＬ×６０　ｍｉｎ×１次），穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄
酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素及３′，３′′′－双柚
·７４９１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｄｅｃ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２３
皮素提取较完全。
３．２　检测波长的选择　本研究采用的检测器为二
极管阵列检测器，记录的紫外光谱显示，穗花杉双黄
酮在２１０，２８８及３３５　ｎｍ左右有吸收峰，罗伯斯特
双黄酮在２１０，２６８　ｎｍ 及３４５　ｎｍ 左右有吸收峰，
２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素在２１０，２６８　ｎｍ，２９０
ｎｍ及３３８　ｎｍ左右有吸收峰，而３′，３′′′－双柚皮素
在２１２，２８６　ｎｍ左右有吸收峰，考虑到分析方法的
耐用性（如使用普通紫外检测器），因此选择单一波
长２７０　ｎｍ为检测波长。
３．３　流动相的选择　试验了甲醇－水、乙腈－水不同
配比的流动相系统，乙腈－水系统梯度洗脱可以达到
很好的分离效果。同时，水中加入０．５％醋酸可有效
改善穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－
３′，３′′′－双芹菜素及３′，３′′′－双柚皮素色谱峰峰形，
故选择乙腈－０．５％醋酸系统。
３．４　石上柏含量测定指标成分的选择　笔者课题
组前期研究从石上柏中分离、纯化得到了穗花杉双
黄酮、罗伯斯特双黄酮、２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹
菜素及３′，３′′′－双柚皮素４个双黄酮成分，且有文
献研究表明这些双黄酮成分具有较好的抗癌活
性［４－７］。本文选择石上柏中的４个主要活性成分为
含量测定指标成分，一定程度上可客观地反映出石
上柏药材的质量。
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［收稿日期］２０１３－０４－１１
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（８１００１５９９）；教育部博士点新教师基金（２０１０３２３７１２００１０）　［作者简介］念其滨，男，本科，副教授，
主任中药师，研究方向：中药质量控制，电话：０５９１－８７８０４９６８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｉａｎ－ｑｂ＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］姚卫峰，男，博士，副教授，中药代谢
与质量控制，电话：０２５－８５８１１８３６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｉｆｅｎｇｙａｏ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ．
川楝子饮片化学成分的ＨＰＬＣ－ＴＯＦ－ＭＳ分析
念其滨１，陈玲２，陈茜２，姚卫峰２　 （１．福建卫生职业技术学院附属福建省级机关医院药剂科，福建 福州３５０００３；２．南京
中医药大学药学院，江苏 南京２１００２３）
［摘要］　目的：通过高效液相色谱－飞行时间质谱（ＨＰＬＣ－ＴＯＦ－ＭＳ）联用技术定性分析川楝子饮片甲醇超声提取物中的主要
化学成分。方法：色谱分离采用安捷伦ＺＯＲＢＡＸ　ＳＢ－Ｃ１８色谱柱（４．６　ｍｍ×１５０　ｍｍ，５μｍ），以１％甲酸－乙腈为流动相梯度洗
脱，流速１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，质谱定性采用飞行时间质谱，正负离子模式扫描。结果：通过正、负离子质谱信息及安捷伦
ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ　Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ软件分析元素组成并结合相关文献数据对照，鉴定出川楝子饮片甲醇超声提取物中的１３个
成分。结论：建立了一种基于 ＨＰＬＣ－ＴＯＦ－ＭＳ技术对川楝子饮片中的化学成分进行鉴别的方法，为中药饮片川楝子的质量控
制奠定了基础并为其深入研究和应用提供了依据。
［关键词］　川楝子饮片；高效液相色谱－飞行时间质谱；成分
［中图分类号］Ｒ９２７．２　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１３）２３－１９４８－０４
Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｔｏｏｓｅｎｄａｎ　ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｐｉｅｃｅｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ－ｔｉｍｅ　ｏｆ
ｆｌｉｇｈｔ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
ＮＩＡＮ　Ｑｉ－ｂｉｎ１，ＣＨＥＮ　Ｌｉｎｇ２，ＣＨＥＮ　Ｑｉａｎ２，ＹＡＯ　Ｗｅｉ－ｆｅｎｇ２（１．Ｆｕｊｉａｎ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｃｏｌｅｇｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｆｕｊｉａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００３，Ｃｈｉｎａ　２．Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｊｉａｎｇｓｕ
·８４９１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２３期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｄｅｃ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２３