全 文 ：— 31 —现代中药研究与实践2011年第25卷第3期Chin Med J Res Prac,2011 May.,Vol.25 No.3
卷柏为蕨类植物门卷柏科卷柏属植物，约有 700
种，分布于世界各地，我国约有 50 余种，已知药用
的有 25 种 [1]。《中国药典》2010 年版收载为卷柏科
卷柏 Selaginella tamariscina(Beauv. ) Spring 和垫状卷
柏 Selaginella pulvinate(Hook. EtGrev. )Maxim 的干燥
全草。由于卷柏属植物外形相似不易辨别，近年来卷
柏的指纹图谱研究成为一个热点。卢平华等 [2] 研究
了江南卷柏及同属植物的 HPLC 指纹图谱，得到了
18 个特征峰，并比较了其他同属植物及江南卷柏的
指纹图谱，结果显示黑顶卷柏、薄叶卷柏、翠云草不
宜与江南卷柏混用。范晓磊等 [3] 对卷柏属近 10 个药
卷柏及垫状卷柏的 HPLC 指纹图谱及穗花杉双黄酮的含量
测定研究
范慧佳 1，梅 赞 1，杨 杰 1，曹 园 2，王 强 1*
(1. 中国药科大学，江苏 南京 210009 ；2. 江苏省中医院，江苏 南京 210036）
摘要 ：目的 建立卷柏及垫状卷柏的 HPLC 指纹图谱分析方法并进行穗花杉双黄酮的含量测定。方
法 采用 HPLC 方法测定 24 批不同产地的卷柏及垫状卷柏药材，分析两者的指纹图谱特征及穗花杉双黄
酮的含量。结果 以穗花杉双黄酮为主的不同的 7 个特征峰分别共同构成卷柏及垫状卷柏的 HPLC 指纹图
谱概貌，卷柏及垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量分别为 1.77~3.82% 和 0.45~0.85%。结论 卷柏及垫状卷柏
的 HPLC 指纹图谱相似，主要成分穗花杉双黄酮的含量相差较大。
关键词 ：卷柏 ；垫状卷柏 ；HPLC ；指纹图谱 ；穗花杉双黄酮 ；含量测定
中图分类号 ：R284.1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2011)03-0031-03
收稿日期：2010-10-24
基 金 项 目 ： 国 家 “ 重 大 新 药 创 新 ” 科 技 重 大 专 项 资 助 项 目 （ N O ：
20092X09308-04）
作者简介：范慧佳，硕士研究生。研究方向：中药分析方向。
*通讯作者：王 强, 教授。Tel：025-83271390，E-mail：qwang49@sohu.com
用植物的 HPLC 指纹特征进行了研究，但所选各药
材只来源于一或两个产地。郑玉胜等 [4] 对卷柏药材
进行了 HPLC 指纹图谱研究，但研究对象仅为卷柏
Selaginella tamariscina。对于多产地的卷柏及垫状卷
柏的指纹图谱对比研究未见报道。因此本研究对 20
批来自不同产地的卷柏及垫状卷柏的 HPLC 指纹图
谱进行研究及比较，丰富了卷柏属的指纹图谱信息。
《中国药典》对卷柏的含量测定规定用 HPLC
方法测定其主要成分穗花杉双黄酮的含量，规定不能
少于 0.3%。本研究目的在于进一步完善中国药典对
卷柏中穗花杉双黄酮含量测定的方法。
1 仪器和材料
Aglient 1100 高效液相色谱仪，BP211D 型电子
天平 (Satorius Co.Ltd.，德国 )，KQ-250DB 数控超声
波清洗仪 ( 昆山市超声仪器有限公司 )。
Study on HPLC Fingerprint Chromatogram of Selaginella tamariscina and
Selaginella pulvinate and Amentofl avone Determination
FAN Hui-jia1, MEI Zan1, YANG Jie1, CAO Yuan2, WANG Qiang1
(1. China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China;2. Jiangsu Provincial Hospital of Traditional
Chinese Medicine, Nanjing 210036,China)
Abstract:Objective To establish a method to analyze HPLC fingerprint chromatogram of Selaginella
tamariscina and Selaginella pulvinate and to determine the content of amentoflavone.Methods HPLC was
applied for establishment of fingerprints of Selaginell atamariscina and Selaginella pulvinate which from
different origin to analyze their fi ngerprint characteristic and content of amentofl avone.Results The different
characteristic seven peaks in the chromatogram consisted of the common pattern of Herba Selaginella tamariscina
and Selaginlla pulvinate.Two important mutual fingerprint peaks were found in both of them,one of which is
amentoflavone.The content of amentoflavone in Herba Selaginella tamariscina and Selaginella pulvinate was
1.77~3.82% and 0.45~0.85% separately.Conclusion The HPLC fingerprint chromatogram of Selaginella
tamariscina and Selaginella pulvinate was similar,but their were very different in the content of amentofl avone.
Key words:Selaginella tamariscina; Selaginella pulvinate;HPLC; fi ngerprint; amentofl avone;assay
DOI:10.13728/j.1673-6427.2011.03.019
— 32 — 现代中药研究与实践2011年第25卷第3期Chin Med J Res Prac,2011 May.,Vol.25 No.3
乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为
分析纯。穗花杉双黄酮由本实验室提供，纯度大于
98%。药材样品来源见表 1，所用样品均由中国药科
大学王强教授鉴定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
穗花杉双黄酮定量色谱条件：色谱柱Shimpack
C18柱 (150 mm×4.6 mm，5 μm)，预柱为 ZORBAX C18
柱(4.6 mm×12.5 mm，5μm)；检测波长330 nm；柱
温30 °C；流速1.0 mL/min；进样量20 µL。流动相：
0.1%磷酸水 (A)-乙腈(B)（67：33）。
指纹图谱色谱条件 ：色谱柱 Lichrospher C18(4.6
mm×150 mm，5 μm)）， 预 柱 为 ZORBAX C18 柱 (4.6
mm×12.5 mm，5 μm) ；检 测 波 长 330 nm ；柱 温 30 °
C ；流 速 1.0 mL/min ；进 样 量 20 µL。 流 动 相 ：
0.31% 甲酸水 (A)- 乙腈 (B)，梯度洗脱 ：0~10 min，
30%~37%B ；10~20 min，37%B ；20~35 min，
37%~57% B ；35~60 min，57%~90%B。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取 1.634 mg 的穗花杉双黄酮对照品，置
10 mL 量瓶中，加入适量甲醇充分溶解后，定容至刻
度，配成 0.164 3 mg/mL 的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取药材粉末（过 4 号筛）约 0.2 g，精密称定，
置 50 mL 量瓶中，加 70% 乙醇适量，超声 2 h，放冷
至室温，用 70% 乙醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤
膜 (0.45 μm) 滤过 , 取续滤液即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 精密吸取穗花杉双黄酮对照
品 溶 液 0.1、0.5、1、1.4、2、3、4 mL， 置 10 mL
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，依次进样，按
上述色谱条件测定 , 记录色谱图，以峰面积 (Y) 对
进样量 (X) 进行线性回归分析，得线性回归方程 ：
Y=28 241X-28.448(r=0.999 7)，表明穗花杉双黄酮峰
面积与进样量在 0.008 21~0.329 μg 有良好的线性关
系。
2.4.2 精密度试验 穗花杉双黄酮定量分析中，精
密吸取上述穗花杉双黄酮对照品溶液 20 μL，重复进
样 5 次，测定峰面积，结果 RSD 为 0.80%。HPLC 指
纹图谱研究中，取同一供试品溶液，连续进样 5 次，
考察指纹图谱中各共有峰的相对保留时间及相对峰
面积的一致性。结果显示，共有峰的相对保留时间
RSD 均小于 4. 0%, 相对峰面积的 RSD 均小于 5. 0%。
表明仪器精密度良好。
2.4.3 重现性试验 穗花杉双黄酮定量分析中，取
同一样品 5 份 , 按样品溶液制备方法制备 5 份样品溶
液，各进样 20 μL，测定穗花杉双黄酮峰面积，计算，
RSD 为 2. 21%。HPLC 指纹图谱研究中，取同一样品
5 份 , 按样品溶液制备方法制备 5 份样品溶液，依法
检测各指纹图谱，计算，其共有峰的相对保留时间的
RSD 小于 4%，相对峰面积的 RSD 不超过 5%，表明
其重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 穗花杉双黄酮定量分析中，取
同一份供试品溶液依次在 0、4、8、12、24、48 h 测
定 , 计算 RSD 为 1.91 %。HPLC 指纹图谱研究中，取
同一份供试品溶液依次在 0、4、8、12、24、48 h 测定，
得到其共有色谱峰的相对保留时间的 RSD 均小于 4%,
相对峰面积的 RSD 均小于 5%。表明供试品溶液在室
温下 48 h 内稳定。
2.4.5 加样回收率试验 精密称取已知穗花杉双黄
酮含量的同一样品 6 份，每份约 0.1 g，分别加入穗
花杉双黄酮 16.43 μg，按 “2.3”项下方法制得供试品
溶液 , 按上述色谱条件测定 , 计算回收率，结果平均
回收率为 101. 6%，RSD 为 2. 32%。
2.5 样品分析 将卷柏及垫状卷柏的 20 批样品的供
试液，按上述穗花杉双黄酮定量色谱条件及指纹图谱
条件进样分析，记录各组色谱图。结果见表 2，色谱
图见图 1、图 2。
2.6 不同产地药材指纹图谱相似度的评价 根据药
国家典委员会的指纹图谱相似度评价软件《中药色谱
指纹图谱相似度评价系统 2004A 版》处理 , 得到 10
批卷柏及 10 批垫状卷柏药材的相似度评价结果 , 结
果见表 3、表 4。
根据相似度计算结果 , 10 批卷柏药材的相似度
均在 0.997~1 之间 ,10 批垫状卷柏药材的相似度均在
表1 卷柏及垫状卷柏样品来源
Tab.1 Origins of Selaginella tamariscina and Selaginella pulvinate
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
卷柏样品收集地
黑龙江齐齐哈尔
江苏常州
江苏苏州
江苏南京
甘肃兰州
江苏徐州
江苏南通
山东胶南
山东沂水
辽宁凤城
编号
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
垫状卷柏样品收集地
云南红河
云南蒙自
江西赣州
湖南常德
四川成都
贵州遵义
重庆
贵州贵阳
云南大理
广西南宁
— 33 —现代中药研究与实践2011年第25卷第3期Chin Med J Res Prac,2011 May.,Vol.25 No.3
表2 卷柏及垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量
Tab.2 Content of amentofl avone in S.tamariscina and S.pulvinate
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
穗花杉
双黄酮含量（%）
2.15
3.82
2.48
3.46
1.77
2.13
2.39
2.88
2.90
1.98
RSD(%)
1.58
2.12
1.67
2.91
1.90
2.23
2.64
2.77
2.58
2.34
序号
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
穗花杉
双黄酮含量（%）
0.75
0.69
0.45
0.48
0.48
0.79
0.60
0.85
0.74
0.58
RSD(%)
1.22
1.18
0.89
1.24
0.68
2.01
1.63
1.67
0.75
0.88
表3 10批卷柏药材的相似度评价结果
Tab.3 Similarity evaluation of S.tamariseina
序号
1
2
3
4
5
相似度
0.998
0.998
1.000
0.998
0.998
序号
6
7
8
9
10
相似度
0.999
0.998
0.998
1.000
0.997
表4 10批垫状卷柏药材的相似度评价结果
Tab.4 Similarity evaluation of S.pulvinate
序号
11
12
13
14
15
相似度
0.978
0.951
0.948
0.954
1.000
序号
16
17
18
19
20
相似度
0.973
0.989
0.958
0.958
0.923
0.923~1 之间，说明不同产地不同批次的药材的相似
度较高。
3 结果和讨论
3.1 本研究对含量测定的提取方法进行了考察，分
别考察了超声、加热回流及索氏提取 , 包括超声提取
0.5 h、1 h 及 2 h ；加热回流提取 2.5 h、3.5 h 及 5 h ；
索氏提取 2 h 及 3 h。考虑到《中国药典》规定穗花
杉双黄酮含量不得低于 0.3% 及提取方法的简易性，
选择了超声提取 2 h 为药材的提取方法。
3.2 本研究建立了卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图
谱。以穗花杉双黄酮为参照峰，卷柏中共标定了7个
共有峰。共有峰的峰号（相对保留时间）：2（S，
1.000），3（1.229）， 4（1.712）， 6（1.909），
7（2.248）， 8（2.384）， 9（2.759）；垫状卷柏
中共标定了6个共有峰。共有峰的峰号（相对保留时
间）：1（0.696）， 2（S，1.000）, 3（1.234），
4 （ 1 . 7 0 8 ） ， 5 （ 1 . 8 1 0 ） ， 6 （ 1 . 8 9 6 ） ， 7
（2.231）。由指纹图谱可以看出，卷柏及垫状卷柏
中均含有2、3、4、6、7号峰，其中2及6号峰为主要
特征峰。卷柏同垫状卷柏相比，2号峰高，其它峰含
量相似，并多出8、9号两个峰。垫状卷柏则多出1、
5号峰。说明二者中所含有的成分大体相同，只在个
别微量成分上不同，表明将两者同时入用为卷柏的
原药材存在一定的合理性。由于研究中只收集了各
10批卷柏及垫状卷柏药材样品，所获得的信息只能
反映部分产地卷柏及垫状卷柏药材的质量。
3.3 卷柏及垫状卷柏的指纹图谱显示，二者的主要
成分穗花杉双黄酮（2 号峰）含量相差较大，因此本
文就卷柏及垫状卷柏中的穗花杉双黄酮的含量进行
了进一步的研究。由穗花杉双黄酮含量测定结果可
知，卷柏及垫状卷柏中该成分的含量趋势明显，卷柏
中穗花杉双黄酮的含量较高（1.77~3.82%）；垫状卷
柏中该成分含量较低（0.45~0.85%）。尽管二者含量
均达到《中国药典》的规定，但两品种药材中穗花杉
双黄酮的含量相差几乎 5 倍，因此卷柏及垫状卷柏的
药效是否等同，有待于进一步的研究。
参考文献
[1] 徐国筠，徐珞珊，王峥涛，等 . 卷柏类专题研究（第三册）[M]. 福州 :
福建科学技术出版社 , 1999,730-748.
[2] 卢 平 华， 谢 培 山， 田 润 涛， 等 . 江 南 卷 柏 及 同 属 植 物 的 HPLC 指
纹 图 谱 鉴 别 及 穗 花 杉 双 黄 酮 测 定 研 究 [J]. 中 药 新 药 与 临 床 药
理 ,2007,18(1):40~43.
[3] 范晓磊，万定荣，叶丛进，等 . 卷柏属药用植物的 HPLC 指纹特征研究
[J]. 中国中药杂志，2007,32(27):2102~2106.
[4] 郑玉胜，刘永刚，张宏桂 . 卷柏药材的 HPLC 指纹图谱研究 [J]. 北京中
医药大学学报 ,2006,29(12):851~853.