全 文 ：收稿日期: 2002-09-28;　修订日期: 2003-02-21
基金项目:国家中医药管理局中医药科学技术研究基金资助项目〔国中
医药科 00-01L( M)〕;广西青年科学基金资助项目 (桂科青 0007025)
作者简介:钟正贤 ( 1952-) ,男 (汉族 ) ,广西苍梧人 ,现任广西中医药研究
所药理室副研究员 ,主要从事心血管 ,抗衰老药物、药物代谢研究及中草
药产品开发工作 .
药理药化
广西藤茶总黄酮的长期毒性试验
钟正贤 1 , 周桂芬 1 , 陈学芬1 , 覃洁萍2
( 1.广西中医药研究所 ,广西 南宁　 530022;　 2.广西中医学院 ,广西 南宁　 530006)
摘要: 目的:观察广西藤茶总黄酮对大鼠长期毒性试验的影响。方法:广西藤茶总黄酮以 1. 5 g /kg和 0. 3 g /kg (为临床日
用量的 50倍和 10倍 )剂量给大鼠连续灌服 12周 ,停药 2周 ,分别测量大鼠体重 ,计算脏器系数 ,测定血液学和血液生化
学指标 ,并作组织病理学检查。 结果: 广西藤茶总黄酮大小剂量组动物的外观行为 ,体重 ,脏器系数 ,血液学和生化学指
标 ,与空白对照组比较 ,均无明显差异 ;病理检查未见与药物毒性相关的明显病变 ,停药后也未见药物延迟性毒性反应。
结论: 广西藤茶总黄酮长期用药对大鼠无明显毒性 ,推论临床拟用剂量应是安全的。
关键词: 广西藤茶 ;　总黄酮 ;　大鼠长期毒性试验
中图分类号: R285. 5　　文献标识码: A　　文章编号: 1008-0805( 2003) 04-0193-02
The Rat Chronic Toxicity Test of Total Flavone of Ampelopsis grossedent at a from Guangxi
ZHON G Zheng-xian
1
, ZHOU Gui-fen
1
, CHEN Xue-fen
1
, QIN Jie-ping
2
( 1. Guangx i Institute of Traditional Chinese Medical and Pharmaceutical Sciences , N anning, Guangx i ,
530022, China; 2. Guangx i College of TCM , N anning 530006, China)
Abstract: Object ive: T o observ e the effects of to ta l flav one of Ampelopsis Grossedentata f rom Guangx i( GX TF) on the ra t
ch ronic tox icity test.Methods: The rats wer e orally giv en fo r 12 weeks with the doses of 1. 5g /kg and 0. 3g /kg ( being 50 and
10 times of clinic do se ) and fo r 2 weeks of stopping adiministration, the rat weights, o rgan coefficients, the indexes of
hemotolog y and bioch emistr y w ere determined , and the pathological ex amination were car ried out. Results: The outer
appea rance and behav io r, w eigh ts, o rgan coefficients, the indexes of hemotolo gy and biochemistry in ra ts ha s no significant
difference by compa ring with contro l g roup; th e pa tho logical ex amination was no t discovered significant pa tho logica l changes
with rela tion of drug to xicity and the delayed tox icity reaction in stopping adiministra tion later. Conclusion: Th e GX TF has
no significant toxicity fo r long- term adiministration in rats, and infers tha t the draw ing up doses in clinic will be safe.
Key words: Ampelopsis grossedentata from Guangx i;　 To ta l flavone;　 rat chronic tox icity test
　　广西藤茶系葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄 Am pelopsis
grossedntata ( Hand- Mazz) W. T. Wang的茎叶 ,其性味甘淡 ,具
有清热解毒功效 ,主治黄疸型肝炎 ,感冒风热 ,咽喉肿痛 [1, 2]。从广
西藤茶茎叶中提取的总黄酮为广西藤茶的有效成分 ,药理研究表
明其具有活血化瘀、保肝、降脂、降血糖等作用 [3～ 5 ]。 为确保广西
藤茶总黄酮临床用药的安全性 ,笔者对其进行了长期毒性试验。
1　实验材料
1. 1　药物与试剂 广西藤茶总黄酮为微黄色粉末结晶 ,由广西中
医学院药学系提供 ,使用时加数滴吐温 - 80研磨成乳浊液供实
验应用。
1. 2　动物 SD大鼠 ,体重 100～ 120 g ,由广西中医药研究所动物
室提供。动物按性别分笼饲养于有空调的实验动物室内 ,室温 ( 22
± 1)℃ ,相对湿度 ( 60± 5)℃。 自由饮水和喂标准颗粒饲料。
1. 3　仪器 7170A型日立生化自动分析仪 ,日本东亚公司 ;
CD1700型全自动血球计数仪 ,美国 SPECIM E公司。
2　方法
2. 1　大鼠长期毒性试验 [6, 7] 选取 8～ 10周龄大鼠 60只 ,体重
130～ 140 g ,雌雄各半 ,随机分为 3组 ,每组 20只。每组大鼠分笼
饲养 ,每笼 5只。 设空白对照组 ,广西藤茶总黄酮高剂量组 ( 1. 5
g /kg )和低剂量 ( 0. 3 g /kg )组。 给药各组分别以临床人日剂量的
50倍、 10倍剂量的广西藤茶总黄酮给大鼠灌胃给药 ,空白对照组
给予等体积蒸馏水 , 1次 /d,连续 12周。 每日观察记录大鼠一般
状况如进食 ,行为活动 ,粪便等。称体重 1次 /周 ,及时调整用药剂
量。末次给药 24 h后 ,每组活杀 10只动物 ,并采集血样于血球记
数仪上检测红细胞数 ( RBC) ,白细胞数 ( WBC) ,血红蛋白 ( Hb) ,
血小板计数 ( BPC) ,淋巴 ( LYM ) ,中性粒细胞 ( GRAN) ,中间细胞
( M ID)及凝血时间 ( CT)等血液学指标。另外取血分离血清 ,于生
化分析仪上测定血清中的天冬氨酸氨基转移酶 ( AST) ,丙氨酸氨
基转移酶 ( ALT ) ,碱性磷酸酶 ( ALP) ,尿素氮 ( BUN ) ,总蛋白
( TP ) ,白蛋白 ( ALB) ,血糖 ( GLU ) ,总胆红素 ( T- BIL ) ,肌酐
( Crea )和总胆固醇 ( T- C HO)等生化学指标。解剖大鼠进行肉眼
检查各器官情况 ,取心、肝、脾、肺 、肾、胸腺、卵巢称重 ,并计算各
脏器系数。 然后将上述器官用 10%甲醛固定 ,进行病理学检查。
各组余下动物停药 2周后活杀 ,同法测定上述项目。
3　结果
3. 1　对动物一般情况的影响 在试验期间 ,广西藤茶总黄酮各剂
量组及空白对照组大鼠的外观行为活动 ,进食量及粪便等状况正
常 ,无一死亡。 停药观察 2周 ,亦无变化。
3. 2　对动物体重的影响 连续用药 12周和停药 2周 ,广西藤茶
总黄酮高低剂量组大鼠体重正常增长 ,与空白对照组比较 ,体重
变化无明显差异 ,实验中无大鼠死亡。 结果见表 1。
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3. 3　对动物脏器系数的影响 给大鼠连续用药 12周和停药 2周
后 ,广西藤茶总黄酮高低剂量组和空白对照组大鼠的心、肝、脾、
肺、肾等主要脏器系数比较 ,无明显差异 (P> 0. 05) ,表明给大鼠
长期灌服广西藤茶总黄酮 ,对大鼠主要脏器重量无明显影响 ,结
果见表 2。
3. 4　对大鼠血液学指标的影响 给大鼠连续用药 12周和停药 2
周后 ,广西藤茶总黄酮高低剂量组和空白对照组大鼠血液的红细
胞 ( RBC)总数 ,白细胞 ( WBC)总数及白细胞分类 ,血小板计数
( BPC) ,血红蛋白 ( Hb) ,凝血时间 ( CT )等指标与空白对照组比
较 ,均无显著差异 ( P> 0. 05) ,表明广西藤茶总黄酮对大鼠血液
学指标无明显影响 ,结果见表 3。
表 1　广西藤茶总黄酮对大鼠体重增长的影响 (x-± s ) g
组别 用药前 用药前增长体重
1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周
空白对照组 128. 7± 24. 7 158. 4± 28. 4 178. 3± 33. 0 201. 0± 42. 8 214. 3± 45. 0 227. 5± 48. 4 242. 5± 49. 8 258. 7± 52. 2
高剂量组 134. 0± 12. 8 169. 7± 16. 7 197. 0± 22. 1 214. 5± 21. 5 228. 5± 19. 2 244. 0± 21. 7 254. 3± 25. 5 267. 5± 31. 4
低剂量组 128. 8± 17. 6 161. 0± 16. 9 190. 8± 21. 8 213. 0± 27. 7 221. 5± 30. 0 238. 3± 38. 1 247. 0± 42. 1 257. 0± 49. 4
组别 用药前增长体重
8周 9周 10周 11周 12周
停药后增长体重
1周 2周
空白对照组 278. 0± 53. 8 289. 5± 59. 6 300. 5± 61. 3 303. 9± 64. 9 315. 3± 66. 7 316. 4± 66. 4 309. 4± 49. 8
高剂量组 284. 7± 36. 6 292. 0± 40. 6 297. 7± 49. 1 306. 8± 42. 7 313. 2± 42. 4 311. 8± 42. 3 301. 3± 31. 6
低剂量组 262. 6± 77. 8 282. 0± 59. 5 295. 0± 59. 9 298. 9± 61. 5 308. 9± 64. 7 309. 7± 58. 8 292. 8± 46. 6
　　 n= 20
表 2　广西藤茶总黄酮对大鼠脏器系数的影响 (x-± s ) g
组别 用药期间脏器系数心 肝 脾 肺 肾 胸腺 胰腺
空白对照组 0. 30± 0. 03 3. 32± 0. 31 0. 23± 0. 04 0. 78± 0. 21 0. 61± 0. 04 0. 18± 0. 05 0. 29± 0. 06
高剂量组 0. 38± 0. 04 3. 12± 0. 31 0. 29± 0. 04 0. 75± 0. 14 0. 72± 0. 04 0. 19± 0. 04 0. 36± 0. 06
低剂量组 0. 37± 0. 04 2. 98± 0. 36 0. 23± 0. 04 0. 62± 0. 06 0. 66± 0. 11 0. 16± 0. 04 0. 31± 0. 06
组别 停药后脏器系数心 肝 脾 肺 肾 胸腺 胰腺
空白对照组 0. 31± 0. 04 3. 39± 0. 25 0. 23± 0. 03 0. 59± 0. 09 0. 58± 0. 13 0. 16± 0. 05 0. 29± 0. 07
高剂量组 0. 35± 0. 04 3. 45± 0. 37 0. 23± 0. 04 0. 68± 0. 13 0. 65± 0. 09 0. 16± 0. 04 0. 24± 0. 02
低剂量组 0. 36± 0. 04 3. 38± 0. 24 0. 25± 0. 05 0. 72± 0. 14 0. 69± 0. 06 0. 16± 0. 03 0. 26± 0. 06
　　 n= 20
表 3　广西藤茶总黄酮对大鼠血液学指标的影响 (x-± s )
指标 空白对照组用药期间 停药 14 d
高剂量组
用药期间 停药 14 d
低剂量组
用药期间 停药 14 d
RBC /1012· L-1 　　 7. 27± 0. 49 　　 6. 78± 0. 32 　　 7. 42± 0. 59 　　 6. 50± 0. 56 　　 7. 68± 0. 79 　　 6. 59± 0. 30
WBC /1012· L-1 6. 22± 1. 48 7. 35± 2. 53 5. 00± 1. 25 5. 04± 1. 65 4. 99± 2. 44 4. 85± 1. 98
BPC /109· L-1 542. 4± 74. 4 630. 1± 66. 7 586. 1± 91. 7 574. 1± 78. 3 589. 0± 39. 3 590. 8± 33. 4
Hb /g· L-1 138. 0± 5. 0 142. 6± 9. 5 139. 5± 7. 4 138. 0± 14. 8 145. 6± 8. 8 141. 1± 4. 8
LYM /109· L-1 4. 34± 1. 26 5. 03± 1. 59 3. 51± 0. 78 3. 44± 1. 32 3. 48± 1. 96 3. 01± 1. 33
M ID /109· L-1 1. 02± 0. 21 1. 07± 0. 46 0. 74± 0. 37 0. 67± 0. 20 0. 79± 0. 25 0. 80± 0. 41
GRAN /109· L-1 0. 87± 0. 34 1. 28± 0. 64 0. 74± 0. 37 0. 91± 0. 26 0. 79± 0. 25 1. 03± 0. 47
C T /min 1. 80± 0. 47 1. 95± 0. 68 1. 72± 0. 44 1. 88± 0. 41 1. 71± 0. 41 2. 18± 0. 66
　　 n= 20
3. 5　对大鼠血液生化学指标的影响 给大鼠连续用药 12周和停
药 2周后 ,广西藤茶总黄酮高低剂量组和空白对照组大鼠血液的
天门冬氨酸氨基转移酶 ( AST )、丙氨酸氨基转移酶 ( ALT)、碱性
磷酸酶 ( ALP)、尿素氮 ( BUN )、总蛋白 ( TP)、白蛋白 ( ALB)、血糖
( GLU )、总胆红素 ( T- BIL )、肌酐 ( Crea)、总胆固醇 ( T- CHO)的
检查结果均在正常值范围内 ,与空白对照组比较无显著差异 (P
> 0. 05) ,提示广西藤茶总黄酮对大鼠肝、肾功能及糖、蛋白代谢
无明显影响 ,结果见表 4。
表 4　广西藤茶总黄酮对大鼠血液生化学指标的影响 (x-± s )
指标 空白对照组用药期间 停药 14 d
高剂量组
用药期间 停药 14 d
低剂量组
用药期间 停药 14 d
AST /u· L-1 205. 80± 48. 44 190. 67± 47. 78 194. 50± 30. 17 192. 55± 34. 96 186. 00± 19. 30 164. 44± 26. 49
AL T /u· L-1 51. 50± 20. 06 59. 11± 18. 31 50. 70± 11. 58 51. 00± 11. 58 52. 20± 17. 37 47. 55± 10. 01
AL P/u· L-1 139. 80± 40. 55 144. 67± 60. 14 135. 80± 20. 94 160. 50± 35. 55 117. 10± 23. 42 148. 11± 36. 53
BUN /mmol· L- 1 8. 98± 1. 09 8. 67± 0. 66 8. 37± 0. 75 8. 75± 0. 79 7. 37± 0. 94 8. 67± 0. 67
TP /g· L- 1 69. 48± 2. 76 67. 35± 2. 48 70. 37± 3. 55 69. 22± 3. 09 68. 97± 2. 76 66. 93± 2. 82
ALB /g· L- 1 20. 35± 2. 88 20. 22± 2. 74 20. 30± 2. 48 20. 66± 1. 72 20. 41± 2. 01 21. 18± 2. 55
GLU /mmol· L- 1 5. 99± 1. 04 7. 38± 0. 87 6. 14± 0. 65 6. 97± 0. 74 6. 49± 0. 78 7. 57± 0. 99
T- BIL /μmol· L- 1 6. 03± 0. 37 5. 15± 0. 32 5. 98± 0. 26 4. 86± 0. 11 6. 67± 0. 34 5. 23± 0. 39
Crea /μmol· L- 1 50. 50± 6. 42 49. 11± 7. 94 50. 90± 8. 85 47. 87± 7. 62 49. 10± 8. 53 47. 78± 6. 42
T- CHO /mmol· L- 1 1. 40± 0. 11 1. 50± 0. 25 1. 30± 0. 18 1. 39± 0. 12 1. 37± 0. 21 1. 20± 0. 20
　　 n= 20
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时珍国医国药 2003年第 14卷第 4期 LISHIZHEN M EDICINE AND M ATERIA MEDICA RESEARCH 2003 VOL. 14 NO. 4　
3. 6　病理学检查 给大鼠连续用药 12周和停药 2周后 ,分别处
死动物 ,剖取各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器 ,首先做肉眼观
察 ,主要脏器外形、体积、色泽均属正常 ,无充血、肿胀和坏死等异
常表现。 然后 ,各脏器用 10%甲醛溶液固定 48 h后 ,按常规方法
做病理切片 ,光镜下检查。结果表明 ,广西藤茶总黄酮大小剂量组
大鼠的心、肝、脾、肺、肾、小肠、肾上腺、胸腺、子宫、卵巢、睾丸等
器官组织形态学均为正常 ,与空白对照组比较 ,未明显见到由于
药物毒性引起的病理改变。证明给大鼠长期灌胃广西藤茶总黄酮
不影响动物器官组织形态学。
4　结论
广西藤茶总黄酮以 1. 5 g /kg , 0. 3 g /kg体重 ,相当于人临床
日剂量 ( 1. 49 g /kg )的 50和 10倍剂量 ,连续给大鼠灌胃给药 12
周。与空白对照组比较 ,动物的一般状况、体重、主要脏器系数、血
液学指标和血液生化学指标均无明显差异。主要脏器的病理检查
表明 ,组织形态学正常 ,未见与药物毒性相关的明显病变。停药 2
周后也未见药物延迟性毒性反应。 表明广西藤茶总黄酮毒性很
小 ,临床拟用剂量是安全的。
参考文献:
[ 1 ]　全国中草药汇编编写组 .中草药汇编 ,下册 [M ].北京:人民卫生出
版社 , 1997: 788-788.
[ 2 ]　广西医药研究所 .广西药用植物名录 [M ] .南宁:广西民族出版社 ,
1974: 203-203.
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学 , 1999, 6( 3): 216-216.
[4 ]　钟正贤 ,周桂芬 ,陈学芬 .广西藤茶总黄酮保肝作用实验研究 [ J] .广
西科学 , 2002, 6( 3): 216-216.
[5 ]　钟正贤 ,周桂芬 ,陈学芬 .广西藤茶总黄酮降血糖实验研究 [ J].中国
中药杂志 , 2002, 6( 3): 216-216.
[ 6 ]　中华人民共和国卫生部药政管理局 .中药新药研究指南:大鼠的长
期毒性试验 . 1993: 205-205.
[ 7]　中华人民共和国卫生部药政管理局 .新药 (西药 )临床前研究指导原
则汇编 [ S] .大鼠的长期毒性试验 , 1993: 199-199.
收稿日期: 2002-10-17;　修订日期: 2003-02-28
基金项目:四川省教委自然科学基金资助项目 ( No. 1999-04)
作者简介:黄　珍 ( 1975-) ,女 (汉族 ) ,四川资阳人 ,现任成都中医药大学
助教 ,学士学位 ,主要从事中药化学研究 .
分光光度法测定雄黄及牛黄解毒片中可溶性砷的含量
——牛黄解毒片中雄黄的系统研究 (Ⅰ )
黄　珍 , 万　丽 , 赵　力 , 幸春蓉 , 周　娴
(成都中医药大学药学院 ,四川 成都　 610075)
摘要:目的: 对雄黄、牛黄解毒片中可溶性砷含量进行测定和比较。方法: 采用分光光度法。结果:在 4～ 20μg范围内 ,线
性关系良好 ( r= 0. 999 3) ;回收率为 99. 1%。 结论:该方法灵敏度高 ,重现性好 ,可为牛黄解毒片含砷量限度制定提供依
据。
关键词: 分光光度法 ;　三氧化二砷 ;　牛黄解毒片 ;　雄黄
中图分类号: R284. 2　　文献标识码: A　　文章编号: 1008-0805( 2003) 04-0195-02
To Determine the Content of As in Niuhuangjiedu Tablet by Spectrophotometry The
Systematic Study on Xionghuang in Niuhuangjiedu Tablet (Ⅰ )
HU ANG Zhen, W AN Li, ZHAO Li, XING Chun-rong, ZHOU Xian
(Chengdu University of TCM , Chengdu 610075, China)
Abstract: Objective: To determine the soluble As in Niuhuang jiedu tablet and Xionghuang .Methods: The content of As is
determined by spectropho tometry. Resul ts: The linear range is 4～ 20μg( r= 0. 999 3) , th e average recovery rate is 99. 1% .
Conclusion: The method is sensitiv e and has good reproducibility. It can be used as a reference to the content limits of As in
Niuhuangjiedu tablet.
Key words: Spectropho tometry;　 As2O3;　 Niuh uangjiedu tablet;　 Xionghuang
　　牛黄解毒片是由牛黄、雄黄、大黄、黄芩等 8味中药制成的复
方制剂。 主要用于治疗咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮、目赤肿痛
等火毒内盛的病证 ,是一种临床上常用的清热解毒药 [1 ]。 方中含
有雄黄 ,雄黄中常混有剧毒物质 As2O3 ,量大时对人体有害 [2]。笔
者采用《中国药典》 2000年版Ⅰ 部砷盐检测法项下第 2法 ,对雄
黄、牛黄解毒片中可溶性砷的含量进行了测定。
1　仪器与试药
1. 1　仪器 7530G分光光度计 (惠普上海分析仪器有限公司 ) ,
BP221S电子天平 ( Made by Sa rtorius) ,砷化氢发生器。
1. 2　试药 As2O3 ,牛黄解毒片 (自制 ) ,化学试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　标准砷溶液制备 称取 As2O3 0. 132 g ,置 1 000 ml量瓶中 ,
加 20%氢氧化钠溶液 5 m l溶解后 ,用适量的稀硫酸中和 ,再加稀
硫酸 10 ml,用水稀释至刻度 ,摇匀 ,作为贮备液。临用前 ,精密量
取贮备液 10 ml置 1 000 ml量瓶中 ,加稀硫酸 10 ml,用水稀释至
刻度 ,摇匀 ,即得 (每 1 m l相当于 1μg As) [3]。
2. 2　供试品溶液的制备 称取牛黄解毒片粉末 0. 5 g于锥形瓶
中 ,加入人工胃液 25 ml,于水浴恒温 ( 37℃ )振荡 4 h ,抽滤 ,残渣
用 5 ml人工胃液洗涤 3次 ,合并滤液及洗液于 50 m l量瓶中 ,定
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LISHIZHEN M EDICINE AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 2003 V OL. 14 NO. 4 时珍国医国药 2003年第 14卷第 4期