全 文 ：第 27卷　第 3期　　　　　　　　　　　　　　　嘉应学院学报(自然科学)　　　　　　　　　　　　 Vol.27　No.3
　2009年 6月　　　　　　　　　JOURNALOFJIAYINGUNIVERSITY(NaturalScience)　　　　　　 Jun.2009　
石参根中总黄酮含量的测定
朱远平 ,古勉辉
收稿日期:2008-12-28
作者简介:朱远平(1965 -), 男 , 广东平远人 , 高级工程
师 , 硕士 ,主要研究方向:分析化学的教学和科研。
(嘉应学院生命科学学院 ,广东 梅州 514015)
[摘　要 ]用乙醇为提取剂 ,在乙醇浓度 80%、温度 70℃、料液比 1:20、提取时间 90 min条件下回流提取石参根中
的总黄酮。以芦丁为标样 , NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH显色体系进行显色 , 选择波长 510 nm, 分光光度法测定石
参中总黄酮的含量。实验结果表明:石参根中总黄酮含量为 1.10mg/g, 加标回收率为 99.3%, RSD为 2.0%。方
法简便 、重现性好 , 准确。
[关键词 ]石参根;总黄酮;分光光度法
中图分类号:O657.32　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:1006-642X(2009)03-0075-03
　　石参根是直立亚灌木石参的根或茎部 ,而石参
的学名是布狗尾 ,因其药效有如 “南方人参 ”,又常
生长在山石地 ,故广东客家人把它称之为石参 。有
的地方还依其特征称为:兔狗尾 、狐狸尾 、虎尾轮 、防
虫草 、猫上树 。布狗尾为蝶形花科狸尾草属多年生
直立亚灌木植物 UrariaCrintaDesv.var.macrostachya
wal[ 1] ,常野生于山坡 、灌木丛边 ,在我国南方有广
泛栽种 ,其资源比较丰富。石参根可药用 ,具清热化
痰 、凉血止血 、杀虫等功效 ,用于感冒咳嗽 ,疟疾 ,血
丝虫病 ,小儿疳积 ,肝火 ,吐血 ,咯血 ,尿血等病的治
疗;民间常用它用于小儿发育不良之转骨药材 ,以及
运动伤害和跌打内外伤科传统食疗优良药材 [ 2] 。
石参根中含有黄酮类物质 、糖类 、及微量元素铁 、锌 、
锰等多种营养成分 ,其根又有助脾运化的功效 ,在广
东梅州客家山区民间常用它作材料 ,与猪骨头等熬
或燉成汤膳 ,其味甘醇清香 ,常食可固胃健脾 、消化
除积 、清热和预防感冒等保健作用。黄酮类化合物
是指以黄酮为母核而衍生的一系列以 C6 -C3 -C6
为基本碳架的化合物 ,广泛存在于花草 、水果 、蔬菜
等绿色天然植物中。它具有多种生物活性和药理作
用 ,在医药工业方面 ,它可作抗炎 、抗菌 、抗病毒和健
胃消食类药物的主要成分;黄酮类化合物具有抗氧
化 、抗衰老等功能 ,又由于它来自天然植物 ,毒性低 ,
相对安全 ,在食品加工中广泛用作食品的添加剂 ,如
食品抗氧保鲜剂 、天然色素 、天然甜味剂等 [ 3, 4] 。目
前关于石参根总黄酮的测定未见报道。测定植物中
黄酮类化合物含量的方法有紫外分光光度法 、荧光
光度法和高效液相色谱法等[ 5-8] ,这些方法需要昂
贵的仪器或要求物质组成单一 。在比较和综合各种
测定方法的基础上 ,用乙醇作提取剂 ,提取石参根中
的总黄酮 ,以芦丁为对照品 ,用 NaNO2 -Al(NO3)3
-NaOH显色体系进行显色[ 9] ,分光光度法测定石
参根中总黄酮含量 ,旨在为石参根进一步开发应用
提供理论依据 。
1　实验部分
1.1仪器与试剂
U-2800型紫外分光光度计 ,日本 HITACHI公
司;RE200A旋转蒸发器 ,日本 YAMATO公司;HHS
型电热型恒温水浴锅 ,上海博讯实业有限公司医疗
设备厂;2N-200A型高速中药粉碎机 ,永康民用机
械厂 。
石参根 ,一年生 ,由梅州林科所提供 。经清洗 ,
切段 ,干燥 ,用中药粉碎机粉碎 ,过 40目筛 ,自然干
燥后备用 。
芦丁 ,生化试剂 ,国药集团化学试剂公司;无水
乙醇;5%NaNO2溶液;10%Al(NO3)3溶液;1mol/L
NaOH溶液。所用试剂均为分析纯 。
1.2实验方法
1.2.1石参根总黄酮的提取和样品溶液的制备
准确称取 10 g石参根粉末置于园底烧瓶中 ,加
入 80%乙醇 200 mL, 在 70℃水浴中回流提取 90
min,趁热抽滤 ,回流提取 2次 ,合并 2次的滤液 ,旋
转蒸发器回收溶剂 ,浓缩至近干 。用 3倍质量的
60℃热水溶解 ,过滤 ,滤液冷却后在 1 ～ 5℃下静置
24 h,析出结晶 ,过滤脱水 ,然后用 60%的乙醇溶解
并定容到 100 mL,得石参根总黄酮待测液 。避光保
存 。
1.2.2芦丁标准溶液的制备
精确称取在 120℃干燥至恒重的芦丁 25.0mg,
用 60%乙醇溶液溶解 ,定容至 250mL容量瓶中 ,摇
匀 ,得浓度为 100μg/mL的芦丁标准溶液 。
1.2.3黄酮类物质定性鉴定[ 3]
(1)盐酸 -锌粉反应。取样品溶液 1 mL,加入
少许锌粉振荡 ,滴加几滴浓盐酸 ,观察颜色的变化。
(2)铝盐显色反应 。向样品溶液中加入适量的
1%三氯化铝溶液 ,观察颜色变化 。
1.2.4石参根总黄酮含量的测定方法
(1)显色方法。参考文献[ 9] ,采用 NaNO2 -Al
(NO3)3 -NaOH显色体系进行显色分析 。分别准确
吸取不同量的芦丁标准溶液或样品溶液至 25 mL的容
量瓶中 ,用 60%的乙醇稀释至 12.5mL;加 0.7 mL5%
的 NaNO2溶液摇匀 ,放置 5min;加入 0.7 mL10%Al
(NO3)3溶液摇匀。放 6 min后 ,再加 5 mL1mol·
L-1的 NaOH溶液混匀 , 用 60%的乙醇溶液定容 。
放置 10 min后 ,测定吸光度。
(2)标准曲线的绘制 。分别精密吸取芦丁标准
溶液 0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL., 分别置于
25mL容量瓶中 ,按上述显色方法显色 ,以试剂空白
为参比溶液 ,在 510nm处测定吸光度值 ,进行回归
分析建立回归方程。
(3)石参根中总黄酮的测定 。准确称取质量为
m(g)的石参根粉未 ,按 1.2.1项方法进行提取和制
备 。准确吸取 5.00mL样品溶液置于 25mL容量瓶
中 ,按 1.2.4第(1)项方法显色 ,以试剂空白作参比
溶液 ,以 510 nm作测定波长 ,测吸光度 A,计算 C
(μg/mL),然后按下列公式计算总黄酮含量 。
总黄酮含量(mg/g)=c×25×20m×1 000
2　结果与讨论
2.1定性鉴定实验结果
2.1.1盐酸 -锌粉反应结果
取样品溶液 1 mL,加入少许锌粉振荡 ,滴加几
滴浓盐酸 , 1 ～ 2 min后 ,溶液呈红色。表明有黄酮
类物质存在。
2.1.2铝盐显色反应结果
向样品溶液中加入适量的 1%三氯化铝溶液
后 ,有一种黄色可溶性物质生成 ,这是黄酮类物质的
典型反应 。表明样品溶液中有黄酮类物质。
2.2标准曲线回归方程的建立
按 1.2.4第(2)项所述方法进行操作 ,以吸光
度 A为纵座标 ,浓度 C为横座标 ,绘制标准曲线 ,如
图 1所示 。实验结果表明 ,在 2 ～ 80 μg/mL范围内
芦丁具有良好的线性关系 ,其线性回归方程为 C=
60.24A+0.416, 式中:A表示吸光度 , C表示浓度
(μg/mL)。相关系数 R=0.999 4,说明吸光度与相
应的浓度线性显著相关 。
图 1　芦丁标准溶液标准曲线
2.3方法精密度实验
准确吸取 5.0mL芦丁标准溶液和样品溶液 ,分
别置于 25 mL的容量瓶中 ,按 1.2.4第(1)项方法
显色 ,以试剂空白作参比溶液 ,在 510 nm处 ,测定吸
光度 。同一标准溶液或样品溶液 ,重复 6次。结果
列于表 1.从表 1可见 ,芦丁标准溶液 , RSD=0.9%;
样品溶液 , RSD=1.2%。结果表明 ,本方法有较好
的重复性 ,能满足生产和科研的要求。
表 1　精密度实验结果
试　　样 测定值(n=6)/μg.mL-1
平均值
/μg.mL-1
标准
偏差
RSD
/%
芦丁标准溶液 20.09 ～ 20.31 20.19 0.18 0.9
样品溶液 22.90 ～ 23.40 23.15 0.48 1.2
2.4回收率实验
准确称取石参根粉末样品 5.0 g,加入 10 mg芦
丁 ,依次按 1.2.1、1.2.4.3项操作 ,计算加样回收
率 ,共重复 5次 。结果见表 2。实验结果表明 ,回收
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率在(96.5 ～ 101.5%)之间 ,平均回收率 99.3%,
RSD=2.0%,证明本方法可行。
表 2　回收率试验结果
序
号
加标量
/mg
样品总黄
酮含量
/mg.g-1
测定浓度
/μg.mL-1
回收率
/%
平均回
收率
/%
RSD
/%
1 10 1.12 30.11 96.5
2 10 1.12 31.39 100.6
3 10 1.12 31.67 101.5 99.3 2.0
4 10 1.12 30.73 98.5
5 10 1.12 30.95 99.2
2.5稳定性实验
准确吸取 5.0 mL样品溶液于 25 mL的容量瓶
中 ,按上述方法显色 ,并每隔 1 min测一次吸光度 ,
设定时间为 2 h。实验结果表明:显色反应结束 10
min后 ,在室温≤25℃环境中 ,样品溶液的吸光度值
保持稳定 ,故选择 10 ～ 20 min。
2.6样品中黄酮的测定
采收一年生长期的石参根 ,先按 1.1方法预处
理 ,然后按 1.2.1项方法提取总黄酮并制备样品溶
液 。再用本方法测定总黄酮。结果见表 3。
表 3　石参根总黄酮含量测定结果
样品批号 测定次数 总黄酮含量/mg.g-1
RSD
/%
080301 3 1.02 1.1
080302 3 1.15 0.85
3　小结
对石参根内的黄酮类物质进行了提取 ,并定性
鉴别和测定了提取物中的总黄酮 。实验结果表明:
80%乙醇回流提取石参根中的总黄酮 ,热水溶解冷
水结晶纯化 ,用 NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOH显色体
系 ,测定波长 510 nm,分光光度法测定石参根中总
黄酮 ,测得石参根中含量为 1.10 mg/g,其重复性 ,
线性关系 ,回收率均较好 ,操作也简便。结果同时表
明石参根中含较丰富的黄酮类化合物 ,有一定的开
发应用的价值 。
致谢:本实验所用石参根由梅州林业研究所张东生
所长提供 ,在此表示感谢 。
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DeterminationofTotalFlavonoidsinUrariaCrintaDesv.var.macrostachyaWal
ZHUYuan-ping, GUMian-hui
(SchoolofLifeSciences, JiayingUniversity, Meizhou514015, China)
Abstract:TotalflavonoidcontentinUrariaCrintaDesv.var.macrostachyawalwasextractedwithethanolasex-
tractant, undertheconditionsof80% ethanol, temperature70℃, ratioofmaterialtoliquid1:20(w/v)andex-
tractiontime90min.TakingbyusingRutinasstandardsample, andNaNO2 -Al(NO3)3 -NaOHaschromogenic
system, theconcentrationoftotalflavonoidwasdeterminedbyspectrophotometryatthewavelengthof510nm.Re-
sultsshowedthetotalflavonoidcontentinUrariaCrintaDesv.var.macrostachyawalwasabove1.10mg/g, theav-
eragerecoveryratewas99.3% withaRSDof2.0%.Themethodwassimple, accurateandreproductive.
Keywords:UrariaCrintaDesv.var.macrostachyawal;totalflavonoidcontent;spectrophotometry
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